補肺益脾通竅湯對慢性鼻竇炎家兔模型NF-κB p65的影響*

張　岳，唐年亞

(南陽醫學高等專科學校，河南 南陽 473000)

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·實驗研究·

補肺益脾通竅湯對慢性鼻竇炎家兔模型NF-κB p65的影響*

張岳，唐年亞

(南陽醫學高等專科學校，河南 南陽 473000)

摘要目的：研究補肺益脾通竅湯對慢性鼻竇炎家兔模型鼻黏膜NF-κB p65的影響，探討其作用機制。方法：選取家兔60只，雌雄各半，分為正常對照組、假手術組、模型對照組、克拉霉素片組、補肺益脾通竅湯組、針氧組6組，每組10只。采用竇口不完全堵塞+竇腔留置棉絮造模法建立慢性鼻竇炎家兔模型，造模時間為42 d。造模成功后，克拉霉素片組灌胃克拉霉素片25 μg/(g·d)；補肺益脾通竅湯組灌胃補肺益脾通竅湯14 g生藥/(kg·d)；針氧組針刺5組穴位(迎香穴、肺俞穴、脾俞穴、腎俞穴和后三里穴)，針刺后給體積分數300 mL/L氧10 min，1 d 1次；以上各組療程均為14 d。免疫組織化學法檢測各組兔NF-κB p65在鼻竇黏膜的表達。結果：模型對照組家兔NF-κB p65的表達高于正常對照組，差別有統計學意義(P<0.05)。與模型對照組對比，克拉霉素片組、補肺益脾通竅湯組和針氧組NF-κB p65的表達均降低，差別有統計學意義 (P<0.01)；其中以補肺益脾通竅湯組降低最為明顯，與正常對照組對比，差別無統計學意義。結論： 補肺益脾通竅湯能夠抑制NF-κB p65激活，終止炎癥介質的轉錄，減少炎癥介質釋放，限制炎癥反應；減輕鼻黏膜炎癥反應，達到治療慢性鼻竇炎的目的。

關鍵詞補肺益脾通竅湯；慢性鼻竇炎；NF-κB p65；動物；家兔

慢性鼻竇炎(chronic sinusitis，CRS) 屬中醫學“慢鼻淵”范疇，是鼻竇黏膜慢性化膿性疾病，臨床上以慢性上頜竇炎最為常見。目前臨床治療CRS多采用的藥物和(或)手術治療，容易導致細菌耐藥性增強，手術治療后遺癥(如病情反復、頭痛等癥狀加重、嗅覺減退等)增多，因此尋求安全、有效、副作用少的CRS治療方法，已成為廣大耳鼻喉科醫生迫切需要解決的問題。本研究通過觀察補肺益脾通竅湯對慢性鼻竇炎家兔模型鼻黏膜NF-κB p65的影響，探討補肺益脾通竅湯治療CRS的作用機制。

1材料與方法

1.1動物

選取3月齡1級健康家兔60只，雌雄各半，體質量1.9～2.3 kg，由華中科技大學統計醫學院實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK(鄂)2013-10。

1.2菌株

取門診慢性鼻竇炎患者上頜竇穿刺沖洗液進行細菌培養，篩選單一菌株金黃色葡萄球菌接種于血平板上，置于培養箱中 24 h，收集菌落，用生理鹽水稀釋成1 麥氏單位的細菌懸濁液備用。

1.3藥品、試劑與儀器

補肺益脾通竅湯由黨參、黃芪、山藥、桔梗、辛夷花、荊芥、防風、薏苡仁、茯苓、鵝不食草、細辛、甘草等組成，由南陽醫學高等專科學校第二附屬醫院藥房制備，每毫升含1 g生藥；克拉霉素片，江蘇恒瑞醫藥股份有限公司產品，批號20131209。兔抗NF-κB多克隆抗體(批號BA0866)、生物素化山羊抗兔抗體(批號AR0194)、抗體稀釋液(批號AR1016)、兔SABC試劑盒(批號SA1052)，均為武漢博士德生物工程有限公司產品；DAB顯色試劑盒，北京中山生物技術有限公司，批號SW1040。華佗牌針灸針一次性無菌銀針(直徑0.3 mm，長25 mm)，蘇州醫療用品廠產品；PHY-III病理組織漂烘處理儀，常州中威電子儀器廠產品；BMJ-III病理組織包埋冷凍臺，常州中威電子儀器廠產品；電熱恒溫培養箱，天津實驗儀器廠產品；Leica Qwin V3.2.0圖像分析系統，產地德國。

1.4分組、模型的建立與給藥

將60只家兔隨機分為正常對照組、假手術組、模型對照組、克拉霉素片組、補肺益脾通竅湯組、針氧組6組，每組10只。采用竇口不完全堵塞+竇腔留置棉絮造模方法建立CRS家兔模型：家兔鼻部常規消毒鋪巾，10 g/L利多卡因手術區浸潤麻醉；沿鼻背正中線作一縱長切口，分離雙側上頜竇前壁皮下組織及骨膜；上頜竇穿刺針在上頜竇前壁圓孔凹陷處鉆開直徑1.5 mm小孔；取少量棉絮放置在竇口及竇腔中，竇口不完全堵塞；注入1mL金黃色葡萄球菌懸濁液；碘伏消毒手術創面，將骨膜、皮膚逐層縫合。假手術組手術步驟同上，但竇腔內不填塞棉絮，不注射細菌。正常對照組不需任何處理。造模時間為42 d。組織學病理檢查以鼻竇黏膜出現增生肥厚，伴大量慢性炎性細胞滲出為造模成功的標準。造模成功后，克拉霉素片組灌胃克拉霉素片25 μg/(g·d)；補肺益脾通竅湯組灌胃補肺益脾通竅湯14 g生藥/(kg·d)；針氧組針刺5組穴位(迎香穴、肺俞穴、脾俞穴、腎俞穴和后三里穴)，針刺后放入密封紙箱，給體積分數300 mL/L氧10 min，1 d 1次。以上各組療程均為14 d。

1.5檢測指標

治療結束處死動物，于冰盤上取出部分鼻竇黏膜。按照試劑盒說明書，采用免疫組織化學法檢測各組兔NF-κB P65在鼻竇黏膜的表達。顯微鏡下隨機選5個高倍視野(×200)，用計算機圖像處理系統分析細胞凋亡率，以細胞核染呈棕褐色者為NF-κB陽性細胞。細胞陽性率=棕褐色細胞面積/細胞總面積×100%。

1.6統計學方法

2結果

模型對照組家兔NF-κB p65的表達高于正常對照組，差別有統計學意義(P<0.05)。與模型對照組對比，克拉霉素片組、補肺益脾通竅湯組和針氧組NF-κB p65的表達均降低，差別有統計學意義 (P<0.01)；其中以補肺益脾通竅湯組降低最為明顯，與正常對照組對比，差別無統計學意義。見表1。

表1各組家兔鼻竇黏膜中NF-κB p65表達

注：與正常對照組對比，*P<0.05；與模型對照組對比，#P<0.05；與補肺益脾通竅湯組對比，△P<0.05。

3討論

慢性鼻竇炎多與鼻竇內多種細菌感染、炎癥細胞長期浸潤相關。鼻竇急性炎癥反復多次發作，導致鼻竇黏膜病變，纖毛上皮功能失常，上皮細胞分泌增強和鱗狀上皮化；竇口黏膜腫脹、肥厚,甚至息肉樣變，使竇口引流受阻，出現鼻竇慢性炎癥。

慢性炎癥反應是體液和細胞等多因素介導的免疫機制表達，基因轉錄增加是許多細胞因子產生過量的關鍵[1]。NF-κB p65通過促進多種細胞因子基因轉錄，參與并調控多種炎癥因子表達[2]。NF-κB活化后在核定位信號介導下，以能量依賴形式進入核內，接觸DNA，誘導多種細胞因子和炎癥介質等基因轉錄；激發NF-κB過度活化，引起炎癥介質過度表達和超量釋放[3]。炎癥介質同時反作用激活NF-κB，形成正反饋效應，使炎癥反應放大并持續存在。慢性咽炎是鼻-鼻竇黏膜的慢性化膿性炎癥，參與早期免疫反應和炎癥反應各階段的許多細胞因子都受NF-κB的調控。炎癥反應激活NF-κB p65，持續激活的NF-κB p65通過增強細胞因子(如IL-6、IL-8)表達，刺激抗凋亡基因的轉錄，增強細胞的增殖能力，使炎癥反應細胞產生活性氧，損傷鼻-鼻竇黏膜周圍上皮細胞DNA，引起鼻-鼻竇黏膜組織的炎性損害。

補肺益脾通竅湯主要針對肺脾氣虛、濕邪滯留鼻竅的病因，采用補益肺脾、利水滲濕排膿、宣通鼻竅的方法進行治療。黨參、黃芪、山藥補肺脾之氣，桔梗宣肺排膿，辛夷祛風通竅，荊芥、防風祛風解表，薏苡仁、茯苓利水滲濕健脾，鵝不食草、細辛祛風散寒除濕通竅，甘草調和諸藥，共奏補肺益脾、宣鼻通竅之功效。現代藥理表明：黨參、薏苡仁能夠提高機體免疫功能[4-5]；黃芪可以降低滑膜細胞和血清脂質過氧化物的一氧化氮，發揮一定的抗炎作用[6]。諸藥合用,可抑制CRS的發生、發展，達到治療本病的目的。

本實驗表明，補肺益脾通竅湯可降低CRS中升高的NF-κB p65至正常水平，由此推測，補肺益脾通竅湯能夠抑制NF-κB p65激活，終止炎癥介質的轉錄，減少炎癥介質釋放，限制炎癥反應；并提高機體免疫力，減輕鼻黏膜炎癥反應，達到治療慢性鼻竇炎的目的。

4參考文獻

[1]徐祥,梁華平.核因子-κB的結構和功能研究進展[J].細胞與分子免疫學雜志, 2002, 18(1):92-95.

[2]Wu MY，Hung SK,Fu SL. Immunosuppressive effects of fisetin in ovalbumin-induced asthma through inhibition of NF-κB activity[J]. J Agric Food Chem,2011，59 (19):10496-10504.

[3]黃小兵,梁平. NF-κB在感染和炎癥促進腫瘤發生及發展中的作用[J].重慶醫學,2008, 37(23):2741-2743.

[4]賈泰元， Benjamin H.S.Lau. 黨參對鼠J774巨噬細胞吞噬活性的增強效應[J].時珍國醫國藥，2000,11(9):769-770.

[5]范偉忠，章榮華，傅劍云. 薏苡仁油對小鼠移植性腫瘤的影響[J].上海預防醫學，2000，12(5):210.

[6]劉美華.黃芪的化學成分及藥理作用研究進展[J].科學與財富,2014，13(3):252.

(編輯陶珠)

文章編號:1001-6910(2016)01-0065-03

中圖分類號:R765.4+1

文獻標志碼:B

doi:10.3969/j.issn.1001-6910.2016.01.28

* 基金項目：南陽市科技攻關項目(2013GG062)

收稿日期：2015-04-24；修回日期：2015-08-31