淺析沙門(mén)菌屬的臨床檢驗(yàn)方法與意義

于峰

淺析沙門(mén)菌屬的臨床檢驗(yàn)方法與意義

于峰

目的探討沙門(mén)菌屬的臨床檢驗(yàn)方法與意義。方法26例腸胃炎患者,對(duì)其血液、糞便及尿液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn),總結(jié)分析檢驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果對(duì)26例腸胃炎患者進(jìn)行血液、糞便及尿液的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn),26例患者的采集樣本中均檢出沙門(mén)菌屬。結(jié)論沙門(mén)菌屬常可導(dǎo)致患者出現(xiàn)腸胃炎、腸熱癥及敗血癥等疾病,為臨床中常見(jiàn)細(xì)菌,通過(guò)對(duì)患者采集樣本的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn),可以確定患者發(fā)病原因,進(jìn)行對(duì)癥治療。

沙門(mén)菌屬；檢驗(yàn)方法；鑒定

沙門(mén)菌屬為一群寄生在人類(lèi)與動(dòng)物腸道內(nèi)的生化反應(yīng)與抗原結(jié)構(gòu)相類(lèi)似地革蘭陰性桿菌,其可以從人與動(dòng)物的體內(nèi)分離獲得［1］。沙門(mén)菌屬的致病性具有一定的種屬特異性,如傷寒沙門(mén)菌、乙型副傷寒沙門(mén)菌及甲型副傷寒沙門(mén)菌等種屬均對(duì)人可致病,會(huì)引發(fā)患者出現(xiàn)腸炎與腸熱癥,而豬霍亂沙門(mén)菌、鼠傷寒沙門(mén)菌及腸炎沙門(mén)菌等種屬對(duì)人與動(dòng)物均存在一定的致病作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年8月～2016年2月本院收治的腸胃炎患者26例,其中男13例,女13例,年齡16～66歲,平均年齡(39.2±14.1)歲,所有患者均根據(jù)病情的不同采集器血液、糞便及尿液,并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。

1.2 標(biāo)本采集 根據(jù)患者病情與病程的不同,提取不同的標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)(標(biāo)本最好在患者使用抗生素前進(jìn)行采集)。如根據(jù)患者腸熱癥的病程不同,在第1周內(nèi)可取血液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn),在第2～3周可取糞便或尿液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)［2］。血清學(xué)的診斷需要在病程的不同時(shí)期分別進(jìn)行2～3份的標(biāo)本采集。如胃腸炎患者可取糞便及嘔吐物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。

1.3 方法

1.3.1 檢驗(yàn)方法

1.3.1.1 標(biāo)本直接檢查 取糞便、尿液等標(biāo)本直接制作涂片,在革蘭染色后進(jìn)行鏡檢。

1.3.1.2 分離培養(yǎng) 進(jìn)行分離沙門(mén)菌時(shí)常使用腸道培養(yǎng)基(MAC、SS、EMB等)與強(qiáng)選擇性的培養(yǎng)基(亞硫酸鉍瓊脂與孔雀綠瓊脂等)［3］。在對(duì)非傷寒沙門(mén)菌及各型副傷寒沙門(mén)菌之外的沙門(mén)菌分離時(shí)使用孔雀綠瓊脂的效果相對(duì)較好,而進(jìn)行傷寒沙門(mén)菌分離時(shí)選用亞硫酸鉍瓊脂的效果相對(duì)較好。除此之外,在暴發(fā)流行及篩選帶菌患者時(shí),當(dāng)菌量較少時(shí),初次進(jìn)行分離使用亞硒酸鹽及革蘭陰性菌肉湯(GN肉湯)增菌效果相對(duì)較好。不同的樣本在制作檢驗(yàn)標(biāo)本時(shí)所選用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)方法各不相同,其方法分別為：①當(dāng)樣本為血液與骨髓液時(shí),取血液樣本5ml或骨髓樣本0.5ml,將其加入到50ml的膽汁葡萄糖肉湯中進(jìn)行增菌培養(yǎng),如果有生長(zhǎng)則可以移種到血平板與SS平板等培養(yǎng)基上；②當(dāng)樣本為糞便及肛門(mén)拭子時(shí),可直接將其同時(shí)接種在SS平板與EMB/MAC平板等培養(yǎng)基上；③當(dāng)樣本為尿液與體液時(shí),其需要以3 000 r/min進(jìn)行離心操作30min后,取其沉淀物在增菌后接種在血平板或EMB/MAC平板等培養(yǎng)基上；④當(dāng)樣本為可疑食物時(shí),需將其在研磨后加入10倍量無(wú)菌的生理鹽水內(nèi)進(jìn)行混勻,而后接種在增菌肉湯與腸道選擇性的平板上。沙門(mén)菌屬在SS平板上為透明或不透明、中央黑色或無(wú)色的菌落,在MAC與 EMB平板上呈現(xiàn)無(wú)色透明的菌落群［4］。

1.3.2 鑒定方法 取上述的可疑菌落進(jìn)行涂片染色,進(jìn)一步的進(jìn)行生化試驗(yàn),如果反應(yīng)的結(jié)果符合數(shù)據(jù)要求,則可以初步鑒定其為沙門(mén)菌屬。而后再根據(jù)數(shù)據(jù)所列生化反應(yīng)試驗(yàn)和血清學(xué)的試驗(yàn)鑒定菌屬的種與型［5］。沙門(mén)菌屬血清學(xué)的鑒定基本方法為：使用沙門(mén)菌屬抗血清對(duì)已經(jīng)分離的菌株按照O抗原、第一相以及第二相H抗原的順序進(jìn)行玻片凝集。在臨床中常見(jiàn)的沙門(mén)菌屬>95%為A～F群,因此需要先使用A～F多價(jià)O血清進(jìn)行玻片的凝集,在確定其為A～F群后,使用單價(jià)O因子進(jìn)行血清鑒定至具體群,而后再使用第一相和第二相H因子進(jìn)行血清定型［6］。如果細(xì)菌生化的反應(yīng)符合沙門(mén)菌屬的反應(yīng),但和A～F多價(jià)O血清未產(chǎn)生凝集的現(xiàn)象,需要考慮是否存在表面抗原(Vi),可以將細(xì)菌懸液進(jìn)行水浴加熱30min后再次進(jìn)行凝集試驗(yàn)。若除去Vi抗原后血清仍不能凝集,則需要考慮A～F以外的菌群可能。

2 結(jié)果

對(duì)26例腸胃炎患者進(jìn)行血液、糞便及尿液的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn),26例患者的采集樣本中均檢出沙門(mén)菌屬。

3 討論

沙門(mén)菌屬部分毒株可以借助菌毛吸附在小腸黏膜的上皮細(xì)胞處。存在Vi抗原的部分沙門(mén)菌屬具有較強(qiáng)的侵襲力,可以穿過(guò)小腸的上皮達(dá)固有層部分。沙門(mén)菌屬存在相對(duì)較強(qiáng)的內(nèi)毒素,可以引起患者出現(xiàn)發(fā)熱及白細(xì)胞改變,甚至是中毒性休克。其還能激活患者的補(bǔ)體系統(tǒng),引發(fā)一系列的病理與生理的變化［7］。部分沙門(mén)菌屬(如鼠傷寒沙門(mén)菌)可以產(chǎn)生與大腸埃希菌類(lèi)似的腸毒素,會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)早期水樣的腹瀉。沙門(mén)菌屬主要通過(guò)污染水源與食物經(jīng)口進(jìn)行感染,可以引發(fā)胃腸炎、食物中毒、慢性腸炎及敗血癥。如果患者的腸熱癥的病程較長(zhǎng),因使用抗生素,患者的臨床癥狀不具有典型性,且臨床標(biāo)本的分離陽(yáng)性率相對(duì)較低,因此常使用肥達(dá)反應(yīng)進(jìn)行輔助診斷。肥達(dá)反應(yīng)為使用已知的傷寒沙門(mén)菌O、H抗原與甲型、乙型及丙型副傷寒沙門(mén)菌H抗原同受檢患者的血清開(kāi)展凝集試驗(yàn),檢測(cè)受檢患者的血清中是否存在相應(yīng)的抗體以及效價(jià),以此來(lái)輔助診斷傷寒與副傷寒。其檢測(cè)結(jié)果需要結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)、病程及病史等情況進(jìn)行綜合的分析。O抗原刺激機(jī)體出現(xiàn)免疫球蛋白M(IgM)抗體,患者的癥狀出現(xiàn)的較早,抗體在其血清中存在時(shí)間相對(duì)較短［8-10］。H抗原在刺激機(jī)體后產(chǎn)生免疫球蛋白G(IgG),患者癥狀出現(xiàn)的較遲,但持續(xù)的時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)。健康的機(jī)體因隱性的感染及疫苗的接種,在血清中可能會(huì)存在一定數(shù)量抗體。通常傷寒沙門(mén)菌 O凝集的效價(jià)達(dá)到1：80及以上、H抗體的效價(jià)達(dá)到1：160及之上、各型的副傷寒沙門(mén)菌的H抗體效價(jià)達(dá)到1：80及以上。通常情況下,O、H的凝集效價(jià)均會(huì)升高,則可判斷為傷寒或副傷寒等。O凝集的效價(jià)不提升,H凝集的效價(jià)上升。O凝集的效價(jià)上升而H凝集的效價(jià)不提升則可以判斷為早期感染或其他的沙門(mén)菌感染,其可以在1周后進(jìn)行復(fù)查,如果H升高則可以進(jìn)行診斷。

［1］陳強(qiáng),余曉君,李俏俏,等.引起兒童腹瀉的沙門(mén)菌屬臨床分離株的耐藥特點(diǎn)及分子流行病學(xué)研究.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,34(3):249-253.

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［8］李?lèi)?ài)華,陳金玲,陳志曉,等.沙門(mén)菌屬流行血清型分型及耐藥性分析.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2012,9(23):3019-3020.

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.21.031

2016-09-14］

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