RUNX3 甲基化在非肌層浸潤性膀胱癌患者中的表達

岳 峰* 韓 偉 趙 晨 江 彬

（大連市友誼醫院泌尿外科，遼寧 大連 116001）

RUNX3 甲基化在非肌層浸潤性膀胱癌患者中的表達

岳 峰* 韓 偉 趙 晨 江 彬

（大連市友誼醫院泌尿外科，遼寧 大連 116001）

目的 對非肌層浸潤性膀胱癌（NMIBC）患者的癌旁正常尿路上皮組織進行RUNX3甲基化表達的檢測，證實RUNX3在膀胱癌發生發展過程中的作用。方法 接受經尿道電切術的膀胱腫瘤患者65例，取腫瘤組織和對應癌旁正常尿路上皮組織進行試驗。采用甲基化特異性聚合酶鏈反應（MS-PCR）的方法對RUNX3甲基化程度進行檢測。結果 非肌層浸潤性膀胱癌（NMIBC）患者的腫瘤標本中RUNX3甲基化發生率明顯高于癌旁正常尿路上皮組織（P=0.03），癌旁正常尿路上皮組織和腫瘤組織中RUNX3甲基化率分別為47%和69%，癌旁正常尿路上皮組織中RUNX3甲基化率與腫瘤數量（P=0.021）和疾病進展（P=0.036）相關。多因素Cox回顧分析提示RUNX3在正常黏膜中出現甲基化是腫瘤進展的獨立因素。結論 RUNX3甲基化與正常尿路上皮向膀胱癌轉化相關。RUNX3甲基化在癌旁正常尿路上皮中的表達可以為接受經尿道電切手術的非肌層浸潤性膀胱癌（NMIBC）患者的腫瘤進展起到預測作用。

膀胱癌；甲基化；非肌層浸潤性

膀胱癌是泌尿系統最常見的惡性腫瘤，發病率居泌尿系統惡性腫瘤的首位。約85%的膀胱癌為非肌層浸潤性膀胱癌（NMIBC），NMIBC大部分具有惰性和復發性的特點，少部分還可以進展為肌層浸潤性膀胱癌（MIBC），具有侵襲性［1］。當NMIBC行經尿道手術（TUR），癌旁正常尿路上皮組織日后進展為癌的可能性為50%～80%。所以，對NMIBC患者進行疾病進展的預測對醫師和患者都十分必要。建立一種既準確又可靠的診斷指標更是十分的必要。

RUNX3不僅是癌癥的腫瘤抑制因子，還是TGF-β家族信號通路的靶點。非活性的RUNX3被甲基化后引起膀胱癌發生，是膀胱癌的一個十分重要的預測因子，本實驗RUNX3在40例正常對照組膀胱上皮組織中全部表達陰性。本文著重對RUNX3甲基化在NMIBC患者癌旁正常尿路上皮的表達來幫助對有潛在腫瘤復發和進展風險的患者進行分類，進行早期干預。

1　材料與方法

1.1一般資料：收集我院65例NMIBC腫瘤標本和對應正常癌旁上皮組織。男47例，女18例，年齡60.5歲（51～84歲）。腫瘤分級采用2002TNM分類和1973WHO分級系統。

1.2基因組DNA提取和甲基化特異性聚合酶聯反應（MS-PCR）：使用基因組DNA純化系統進行標準DNA提取（Promega，Madison，WI，USA），無水乙醇沉淀純化，保存于-20 ℃冰箱中。基因組DNA的重亞硝酸鹽處理使用的是EZ DNA Methylation-Gold Kit（Zymo Research，Orange，CA，USA）標準方法。

1.3數據分析：對初發NMIBC患者的病理和預后特征進行分析研究，根據癌旁正常尿路上皮組織中甲基化水平進行分層分析。分類變量使用卡方檢驗進行比較和Kaplan-Meier方法計算進展時間。計算差別使用log軼統計量。鄰近正常尿路上皮行RUNX3甲基化后對預后的評估使用Cox相對危險回歸法。統計分析使用SPSS 12.0軟件，對數據進行t或卡方檢驗，α=0.05作為數據的檢驗水準，P＜0.05有統計學意義。

2　結 果

中位隨訪時間58個月（14～79個月），術后接受膀胱內灌注治療53/65，隨訪期內，37/65患者出現復發，18/65出現疾病進展。47/65表現為腫瘤RUNX3甲基化，35/65癌旁正常上皮組織RUNX3甲基化。

RUNX3甲基化在正常組織中的診斷價值：RUNX3甲基化在癌旁正常上皮組織表達與腫瘤數量（P=0.021）和腫瘤進展（P=0.036）相關，癌旁正常上皮RUNX3甲基化陽性患者具有顯著的更短的無進展生存期（P=0.017）。然而，Kaplan-Meier檢驗提示兩組復發情況無顯著差別（P=0.895）。雙重甲基化的患者（即腫瘤和癌旁組織均檢測出RUNX3甲基化）比單甲基化和無甲基化有更短的無進展生存期（P=0.036）。多因素分析提示，腫瘤分級（P=0.042）和癌旁正常組織RUNX3甲基化（P=0.045）是NMIBC的獨立進展因素。

3　討 論

膀胱癌具有多灶發病、復發性高以及同時或異時發病的特點，腫瘤細胞的微侵入性特點給膀胱癌的臨床診斷帶來極大困難。有研究發現腫瘤的微侵入性特點是不同時間或位置，原發腫瘤通過黏膜下種植、轉移進行的［2］。然而，正常外觀的膀胱黏膜或病理證實正常的黏膜組織也可能有癌前改變，存在著腫瘤發生的不確定性。從Wolff等對膀胱癌采用高通量DNA甲基化檢測，正常外觀的膀胱組織和無癌膀胱組織均可有癌前改變。我們發現在癌旁正常組織中RUNX3甲基化率為47%，但仍低于腫瘤組織69%。因為尿路上皮癌是多灶性的惡性腫瘤，RUNX3甲基化與正常黏膜向膀胱癌轉變相關，那么異常甲基化就是膀胱組織惡變前的反應。RUNX3甲基化可能參與了膀胱癌發生的早期事件。

腫瘤抑制基因沉默導致異常高的甲基化是人類癌癥發病中最早，也是最普遍存在的事件之一。普遍來說，異常甲基化在瘤前期病灶中可以被檢測出來，Dhawan等報道多種癌癥中異常升高的甲基化率和疾病進展相關，包括肺癌和肝癌，發現從正常尿路上皮向尿路上皮癌轉變過程中甲基化率是顯著升高的［3-12］，并且最近一系列研究發現膀胱癌和RUNX3之間的相關性，但是目前RUNX3甲基化研究還沒有關于膀胱癌正常癌旁組織的報道。膀胱癌行TUR術后的正常外觀的尿路上皮RUNX3進行甲基化檢測，或復查膀胱鏡，是NMIBC患者腫瘤進展的可靠預測因子，也可以用來區分高進展風險的患者，對于低進展風險的患者也有降低復查頻率的作用。

作為診斷預測因子，將患者分為雙甲基化、單甲基化，和無甲基化組，雙甲基化組具有更差的無進展生存期。足以說明正常RUNX3甲基化可以作為診斷預測因子。由于NMIBC和MIBC在生物學行為和預后不同，所以分開進行研究是有必要的。本實驗主要遺憾為實驗病例數較少。進一步需要研究的內容較多，生物多樣性例如mRNA表達或蛋白水平研究仍需進行。我們正在收集更多的樣本，進行膀胱癌患者尿液的脫落細胞RUNX3甲基化檢測。

最后，由于RUNX3異常甲基化頻繁出現在正常癌旁尿路上皮中，將來在膀胱癌的診斷、治療、復查方面，建議將RUNX3甲基化檢測作為常規檢測在高危人群中進行。

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R737.14

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1671-8194（2016）27-0019-02

大連市衛生局局級課題

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