HPLC法同時測定梔子膠囊中梔子苷和葛根素含量

2016-01-29 03:05:37周美娟胡浩武沈麗琴耿炤上海中醫藥大學上海010上海中創醫藥科技有限公司上海010江西匯仁藥業有限公司南昌005

江西中醫藥 2015年10期

★　周美娟　胡浩武　沈麗琴　耿炤　(1.上海中醫藥大學　上海 010；.上海中創醫藥科技有限公司　上海 010；.江西匯仁藥業有限公司　南昌 005)

★周美娟1,3胡浩武2沈麗琴2耿炤3(1.上海中醫藥大學上海 201203；2.上海中創醫藥科技有限公司上海 201203；3.江西匯仁藥業有限公司南昌 330052)

摘要：目的：建立梔子膠囊的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜(HPLC)法對制劑中梔子和葛根的有效成分梔子苷和葛根素進行定量研究。結果：確定同時對兩種成分進行定量測定的方法，梔子苷在0.0531～5.31μg/mL、葛根素在0.0288～2.88μg/mL范圍內均呈良好的線性關系，梔子苷的平均加樣回收率為101.52%(RSD=0.58%，n=6)，葛根素的平均加樣回收率為103.41%(RSD=0.60%，n=6)。結論：建立的方法分析效率高，重復性好，準確度高。

關鍵詞：梔子膠囊；高效液相色譜法；梔子苷；葛根素

梔子膠囊是由梔子、葛根等中藥材提取制得，并對化學性肝損傷具有輔助保護作用的中藥保健品。根據藥材中已知化學成分的藥理作用及其在梔子膠囊中存在的量，我們對制劑中的梔子苷和葛根素進行了定量研究，建立了一測多評的HPLC含量測定方法，并準確和迅速的控制該產品質量。實驗數據如下。

1儀器與試藥

AgiLent 1100高效液相色譜儀；梔子苷對照品(購自中國食品藥品檢定研究院，批號：110749-200714，供含量測定用)，葛根素對照品(購自中國藥品生物制品檢定所，批號：110752-200209，供含量測定用)，甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑為分析純。

梔子膠囊(規格：0.4g/片；批號：1211001、1211002、1211003；江西匯仁藥業有限公司)

2實驗方法與結果

2.1色譜條件色譜柱：采用C18色譜柱YMC(4.6mm×250mm,5μm)；流動相：乙腈-水(11∶89)。

檢測波長：經紫外掃描梔子苷最大吸收波長為238nm；葛根素最大吸收波長為250nm；因為梔子苷為該制劑的功效成分，所以以梔子苷的最大吸收波長238nm定為該方法的檢測波長。柱溫：35℃；流速：1.0mL/min。

2.2試驗方法對照品溶液的制備：取梔子苷對照品、葛根素對照品適量，精密稱定，加50%乙醇制成每1mL中含梔子苷30μg、葛根素20μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取裝量差異項下的梔子膠囊，研細，取約0.1g，精密稱定，置50mL量瓶中，加50%乙醇適量，超聲處理(功率200W，頻率50kHz)50分鐘，放冷，加50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

測定方法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀。

2.3流動相的選擇分別采用甲醇-水和乙腈-水不同比例進行考察，發現采用C18色譜柱YMC(4.6mm×250mm,5μm)在乙腈-水(11∶89)的比例，梔子苷和葛根素分離度均較好，故采用乙腈-水(11∶89)作為該制劑中梔子苷和葛根素的含量測定時流動相。

2.4提取方法考察

2.4.1提取溶劑的選擇取樣品(批號：1211001)0.2g，分別精密稱定至50mL量瓶中，分別加入適量的甲醇、乙醇、50%甲醇溶液和50%乙醇溶液，超聲30min，放置，加相應的溶液至刻度，搖勻，濾過，即得。結果見表1。

結果選取50%乙醇溶液做為該樣品的提取溶劑。由于此兩種成分峰面積均較高，故減小該樣品的取樣量進行進一步研究。

2.4.2提取方法及時間的選擇取樣品(批號：1211001)0.1g，分別采用超聲和水浴回流的方法用50%乙醇溶液進行超聲40，50，60min，回流30，50，60min進行比較提取方法和時間對結果的影響，結果見表2。

結果顯示超聲方法和回流方法在不同時間的提取效果RSD梔子苷為0.89%，葛根素為0.72%，說明兩種方法并沒有顯著性差異，從方便操作和節能綜合考慮，擬采用超聲50min作為提取的方法及時間。

表2　梔子膠囊提取時間的選擇　mg/g

2.5方法學考察

2.5.1色譜系統性實驗按梔子膠囊制備方法制備缺梔子和葛根的雙陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性樣品溶液。

在以上條件下，梔子苷和葛根素與其它相鄰組分分離度大于1.5，且缺梔子和葛根的陰性對照在相同保留時間下無吸收峰，說明陰性無干擾，見圖1-3。

2.5.2線性關系的考察取梔子苷和葛根素對照品適量，精密稱定，加50%乙醇制成含梔子苷0.531mg/mL，葛根素0.288 mg/mL的混合對照品溶液。分別精密吸取上述對照品溶液1mL至5，10，25，50，100mL量瓶中，并用50%乙醇稀釋至刻度，得到以下濃度的對照品溶液，分別吸入10μL注入液相色譜儀，測定，記錄峰面積，結果見表3。

表3　梔子膠囊梔子苷與葛根素線性關系表

以對照品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，分別繪制標準曲線，并進行回歸，計算標準曲線的回歸方程及相關系數，其中，梔子苷回歸方程為Y=14.502X+0.9963(r=1)，葛根素回歸方程為Y=34.698X-2.7179(r=1)，以上結果表明：梔子苷在0.0531～5.31μg/mL、葛根素在0.0288～2.88μg/mL范圍內均呈良好的線性關系。