UHPLC/Q-TOF-MS/MS快速鑒定瓜馥木化學成分研究*

★　李曉芳　劉翔　李立芳　鄧紅　張建康　葉鳳玉　歐陽輝　葉喜德*　(.江西中醫藥大學附屬醫院　南昌0006；.江西湘雅萍礦合作醫院　江西 萍鄉 700；.江西撫州醫科研究所　江西 撫州 000；.江西中醫藥高等?？茖W校　江西 撫州 000；.江西中醫藥大學　南昌 000)

*基金項目：江西省衛生廳中醫藥科研計劃項目(2012A140)。

**第一作者：李曉芳，女，研究方向：中藥化學成分。

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UHPLC/Q-TOF-MS/MS快速鑒定瓜馥木化學成分研究*

★李曉芳1**劉翔2李立芳3鄧紅1張建康4葉鳳玉5歐陽輝5葉喜德5***(1.江西中醫藥大學附屬醫院南昌330006；2.江西湘雅萍礦合作醫院江西 萍鄉 337003；3.江西撫州醫科研究所江西 撫州 344000；4.江西中醫藥高等?？茖W校江西 撫州 344000；5.江西中醫藥大學南昌 330004)

*基金項目：江西省衛生廳中醫藥科研計劃項目(2012A140)。

**第一作者：李曉芳，女，研究方向：中藥化學成分。

摘要：目的：利用超高效液相色譜-飛行時間質譜(UHPLC/Q-TOF-MS/MS)聯用技術，對瓜馥木根和藤莖的化學成分進行分析。方法：采用Welch C18色譜柱(100 mm×2.1 mm，1.7μm)，以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)為流動相梯度洗脫進行色譜分離；質譜采用電噴霧(ESI)離子源，在正離子模式下采集數據，運行時間40 min，使用質譜分析軟件中的目標化合物篩查法，通過保留時間、精確相對分子質量和二級質譜裂解碎片鑒定化學成分。結果：初步鑒定了44個化學成分。結論：該方法快速、簡單，可作為瓜馥木化學成分的一種快速鑒定方法。

關鍵詞：瓜馥木；超高效液相色譜-飛行時間質譜；化學成分

瓜馥木(Fissistigmaoldhamii(Hemsl.)Merr.)，又名鉆山風，為番荔枝科瓜馥木屬植物，多生于低海拔山谷旁、溪旁、潮濕的疏林中。該屬植物在全球約75種，我國就占有23種[1]，主要分布在福建、臺灣、浙江、江西、湖南、廣東、廣西、海南及云南等省市。瓜馥木多用根和藤莖入藥，味辛性溫，具祛風除濕、活血化瘀、鎮痛消腫等功效,主治風濕痹痛，腰痛，胃痛及跌打損傷。該植物中主要成分為次生代謝產物，即包括以阿樸菲類為主的生物堿，該生物堿具有抗炎、鎮痛的作用[2]，是自然界中分布較為廣泛且具有重要生物活性[3]。此外，瓜馥木中還含有黃酮類、有機酸等化學成分。現有的文獻對瓜馥木化學成分研究不多，這不利于我們深入研究瓜馥木的物質基礎，筆者利用超高效液相色譜與飛行時間質譜聯用(UHPLC/Q-TOF-MS/MS)[4-5]技術，對瓜馥木進行了化學成分研究，希望為其進一步開發提供參考。

1儀器與材料

超高效液相色譜串聯四級桿飛行時間質譜(AB SCIEX Triple TOF 5600+；Foster City，CA)；島津超高效液相色譜儀(Nexera LC-30A，日本)，含在線真空脫氣機，高壓二元梯度泵，自動進樣器，柱溫箱；Welch C18色譜柱(100 mm×2.1 mm，1.7μm)；KQ-500DE 型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；Sartorious BT25S型十萬分之一電子分析天平(賽多利斯公司，德國)。

甲酸(色譜純，美國TEDIA公司)；甲醇、乙腈(色譜純，美國Fisher公司)；水為Milli-Q系統純化水(美國Millipore公司)，其余試劑為分析純。

瓜馥木根莖購買于江西省樟樹藥材市場，經江西中醫藥大學黃小方老師鑒定為瓜馥木(Fissistigmaoldhamii(Hemsl.)Merr.)的根莖。

2實驗方法

2.1質譜條件離子源為電噴霧離子化源(ESI)，正離子模式；質量掃描范圍m/z 100～1 250；噴霧電壓：5500 V，霧化氣溫度：550℃，氣簾氣：172.36 kPa，霧化氣和輔助氣：344.74 kPa；去簇電壓(DP)：100 V；采用TOF-MS-IDA-MS/MS方法采集數據，TOF/MS一級預掃描和觸發的二級掃描TOF/MS/MS離子累積時間分別為200、100 ms，CE碰撞能量為-65eV，CES碰撞能量疊加為(65±15)eV，觸發二級的方法為IDA，多重質量虧損(MMDF)和動態背景扣除(DBS)為觸發二級的條件，滿足該條件的優先進行二級掃描。

表1　瓜馥木根莖提取物的化學成分鑒定結果

2.2液相條件流動相：0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)，以梯度洗脫，0.1～2 min，1% B；2～5 min，1%～20%B；5～25 min，20%～40% B；25～33 min，40%～90% B；33～37 min，90% B；37.1～40.25 min，10%B。采用Welch C18色譜柱(100 mm×2.1 mm，1.7μm)，體積流量0.25 mL/min，柱溫箱控溫45 ℃，進樣量2 μL。

2.3樣品制備及檢測取瓜馥木根莖50 g，精密稱定，置于回流燒瓶中，加至石油醚500 mL，浸泡12 h，超聲振蕩0.5 h，于40℃的水浴鍋中回流提取3 h，共三次，合并提取液，濃縮，得淺黃色浸膏0.262 g。精確稱取浸膏0.200 g，置于刻度試管10 mL中，加入2 mL石油醚：苯為1∶1(v/v)的溶液當中，充分振蕩，使其完全溶解，然后加至0.1%甲酸水溶液-乙腈1.5 mL，劇烈振蕩2 min，置于40℃水浴鍋中靜置0.5 h，將試管取出冷卻到室溫，加入重蒸餾水至刻度，分層后，取上清液，采用UHPLC/Q-TOF-MS/MS聯用技術對樣品進行分析檢測。

3結果與分析

前期通過Scifinder數據庫，建立瓜馥木屬植物化合物數據庫，并在該數據庫進行檢索瓜馥木中潛在的化學成分。采用Analyst TF1.6和Peakview(Version1.2，AB SCIEX)軟件對瓜馥木提取物的質譜數據進行處理。依據測定相對分子質量與理論精確相對分子質量的偏差小于5×10-6的原則，確定各色譜峰對應化確定各色譜峰對應化合物的分子式，在已建立的瓜馥木植物化學成分數據庫中檢索并匹配化合物。

3.1瓜馥木化學成分的MS/MS分析在瓜馥木根莖提取物中共鑒定出了色譜峰44個，實驗結果見表1。然后對同分異構體進行鑒別，通過二級質譜獲得化合物的碎片信息，推測出離子裂解狀況，結合數據庫中各個化合物結構，區分同分異構體。

4討論

本文在化合物精確相對分子質量的基礎上，利用UHPLC/Q-TOF-MS/MS聯用技術，對瓜馥木化學成分進行了分析，并鑒定出色譜峰44個化合物，該法為研究瓜馥木化學成分提供了相對準確、高效的分析途徑，也能為瓜馥木進一步化學成分分離提供數據參考。實驗結果表明，該方法可快速完成藥材成分分析工作，省去常規方法中由粗提物、分離、純化，到重結晶后方可鑒定化合物的繁瑣過程，節約了研究成本，并且實現了藥材中多組分的良好分離，為瓜馥木藥效物質基礎研究提供了數據支撐。但該法也存在一定的局限性，如不能提供出化合物幾何構型，且不能準確指出空間位置，如果利用該方法為導向，針對性地對首次發現或者潛在新化合物進行定向分離得到單體，進一步配合四大光譜進行結構確證，將為傳統的中藥化學成分分離技術提供新的思路。

參考文獻

[1]中國科學院中國植物志編委會.中國植物志[M].北京:科學出版社.1979，30(2):10.

[2]陳奇，畢明，王明華，等．鉆山風的藥理研究[J].中草藥，1983，14(10)：23-25.

[3]傅春燕，尹文清，周中流.瓜馥木中阿樸菲類生物堿的研究[J].中藥材，2007，30(4)：409-412.

[4]Zhu J B, Guo X J, Fu S P, et al. Characterization of steroidal saponins in crude extracts from Dioscorea zingiberensis C. H. Wright by ultra-performance liquid chromatography/electrospray ionization quadrupoletime-of-flight tandem mass spectrometry[J].Pharm Biomed Anal,2010,53(3):462-474.

[5]Qi L W, Wan H Y, Zhang H, et al. Diagnostic ion filtering to characterize ginseng saponins by rapid liquid chromatography with time-of-flight mass spectrometry[J].J Chromatogr A,2012,1230(23):93-99.

收稿日期：(2015-06-17)編輯：曾文雪

中圖分類號：R284.1

文獻標識碼：A

通信作者：***葉喜德，男，研究方向：中草藥活性成分。