HPLC法同時測定馬來酸依那普利與尼群地平的含量

王　星，王　琳，張廷劍，孟繁浩*

HPLC法同時測定馬來酸依那普利與尼群地平的含量

王星a，王琳b，張廷劍b，孟繁浩b*

[摘要]目的建立以高效液相色譜法測定復方尼群地平片中馬來酸依那普利與尼群地平含量的方法。方法色譜柱為Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，甲醇-磷酸鹽緩沖液(0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液，用磷酸調pH值為3.0)(65∶35)為流動相，流速0.8 mL/min，檢測波長為215 nm，柱溫50 ℃，進樣量為20 μL。結果馬來酸依那普利在10.16~193.04 mg/L濃度范圍內線性關系良好(R2=0.999 7)，平均加樣回收率為100.28%；尼群地平在20.96~338.24 mg/L濃度范圍內線性關系良好(R2=0.999 8)，平均加樣回收率為99.54%。結論該方法可用于同時測定復方尼群地平片中馬來酸依那普利、尼群地平的含量。

[關鍵詞]高效液相色譜法；復方尼群地平片；馬來酸依那普利；尼群地平；含量

[Abstract]ObjectiveTo establish an HPLC method for the content determination of enalapril maleate and nitrendipine in compound nitrendipine tablet.MethodsSamples were determined on a Kromasil C18column (4.6 mm×250 mm,5 μm),the mobile phase consisted of methanol-phosphate buffer (0.01 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution adjusted with phosphoric acid to a pH of 3.0) (65∶35) with flow rate at 0.8 mL/min,the UV detection wavelength was 215 nm,column temperature was 50 ℃,and sample size was 20 μL.ResultsThe linear range of enalapril maleate was 10.16~193.04 mg/L (R2=0.999 7),the average recovery rate was 100.28%;the linear range of nitrendipine was 20.96~338.24 mg/L (R2=0.999 8),the average recovery rate was 99.54%.ConclusionThe method is accurate for the simultaneous determination of enalapril maleate and nitrendipine in the compound nitrendipine tablet.

收稿日期：2015-04-18

通信作者*

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201512023

Content determination of enalapril maleate and nitrendipine by HPLCWANG Xinga,WANG Linb,ZHANG Ting-jianb,MENG Fan-haob*(a.Department of Central Laboratory,b.Department of Medicinal Chemistry,School of Pharmacy,China Medical University,Shenyang 110122,China)

Key words：HPLC;Compound nitrendipine tablets;Enalapril maleate;Nitrendipine;Content

0引言

復方尼群地平片為自制制劑，西班牙已于2002年批準Grupo Vita公司的復方產品ENEAS (Enalapril maleate/nitrendipine)上市，用于對單獨用依那普利或尼群地平無應答的原發性高血壓患者的治療，提高患者順應性，降低不良反應。國內合用馬來酸依那普利和尼群地平的臨床報道也較多[1-4]。馬來酸依那普利(Enalapril maleate)對輕中度高血壓效果較好，對于高血壓患者具有良好的靶器官保護和心血管終點事件預防作用[5-7]。尼群地平(Nitrendipine)對心血管系統具有保護效應，腦卒中發生率較對照組降低40%，同時，心血管事件、癌癥、出血等不良反應沒有明顯增加[8]。中國藥典對處方中的單一成分制劑含量測定的方法均采用HPLC法[9]，國內文獻報道多為HPLC法測定單一成分制劑或與其他成分組成制劑的含量[10-16]。為提高其質量標準，有效控制制劑質量，本文采用HPLC法對復方尼群地平片中馬來酸依那普利和尼群地平進行含量測定，結果較為理想。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent 1200系列高效液相色譜儀(美國安捷倫科技有限公司)，Kromasil C18色譜柱(北京迪馬科技公司)，CP214電子分析天平[奧豪斯國際貿易(上海)有限公司]，pH計(FE20K，梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.2試藥復方尼群地平片(批號：131001、131002、131003；規格：30 mg)，自制。馬來酸依那普利對照品(批號：100705-201301)，尼群地平對照品(批號：100585-201301)，均為中國藥品生物制品檢定所提供。甲醇(色譜純)、磷酸(分析純)、磷酸二氫鉀(分析純)，均由山東禹王實業總公司化工廠提供。

2方法與結果

2.1色譜條件色譜柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相：甲醇-磷酸鹽緩沖液(0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液，用磷酸調pH值為3.0)(65∶35)，檢測波長：215 nm，流速：0.8 mL/min，柱溫：50 ℃，進樣量：20 μL。理論板數按尼群地平峰計算不低于3 000。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備避光操作。分別精密稱取馬來酸依那普利、尼群地平對照品適量，加甲醇溶解并稀釋至刻度，再精密量取適量加流動相定量制成每1 mL中約含0.2 mg馬來酸依那普利和0.1 mg尼群地平。

2.2.2供試品溶液的制備避光操作。取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當于馬來酸依那普利100 mg，尼群地平50 mg)置50 mL量瓶中，加甲醇超聲使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液1 mL，加流動相溶解稀釋至10 mL，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3陰性對照溶液的制備按處方比例及制備工藝稱取除主藥以外的所有輔料，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

2.3專屬性試驗精密移取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各20 μL，分別測定，結果陰性對照溶液在主成分峰處未見干擾。對照品、樣品和陰性對照色譜圖見圖1。

2.4線性關系考察分別精密稱取馬來酸依那普利對照品與尼群地平對照品適量，加甲醇溶解并稀釋至不同刻度，得峰面積(Y)與濃度(C)的回歸方程：馬來酸依那普利Y=25.673 C+120.75 (R2=0.999 7)、尼群地平Y=53.114 C+176.35 (R2=0.999 8)。線性回歸方程表明，馬來酸依那普利在20.16~383.04 mg/L濃度范圍內、尼群地平在12.44~236.36 mg/L濃度范圍內，進樣量與峰面積呈良好的線性關系。

2.5精密度試驗取馬來酸依那普利與尼群地平對照溶液，按上述色譜條件，以20 μL進樣，記錄峰面積，連續進樣5次，結果表明，馬來酸依那普利的RSD為1.33%，尼群地平的RSD為1.00% (n=5)。

2.6重復性試驗取樣品(批號：131001)，制備6份供試品溶液，按上述色譜條件，以20 μL進樣，記錄峰面積，每個樣品進樣2次，結果表明，馬來酸依那普利的RSD為1.15%，尼群地平的RSD為1.19% (n=6)。

圖1　HPLC圖譜

2.尼群地平

2.7穩定性試驗取供試品溶液，按上述色譜條件，以20 μL進樣，記錄峰面積，每隔1 h進樣1次，結果表明，供試品溶液在8 h內穩定(馬來酸依那普利的RSD為0.50%，尼群地平的RSD為0.52%)。

2.8加樣回收率試驗按處方比例稱取輔料數份，分別加入處方量80%、100%、120%的馬來酸依那普利與尼群地平各3份，按上述供試品溶液制備方法制備并測定，結果見表1。

2.9樣品測定分別取對照品溶液和供試品溶液，按上述色譜條件，分別以20 μL進樣，記錄峰面積，以外標法計算供試品中馬來酸依那普利和尼群地平的含量。結果見表2。

3討論

3.1本文首次采用同一液相條件同時測定馬來酸依那普利和尼群地平的含量，為體內藥代動力學研究提供依據。

3.2在200~400 nm處用UV-2100紫外分光光度計掃描，馬來酸依那普利和尼群地平在215 nm處有共同吸收峰，因此選擇此波長作為檢測波長。

表1　加樣回收率試驗結果

表2　樣品含量測定結果(n=3)

3.3馬來酸依那普利顯酸性，用弱酸性流動相可抑制其電離，使峰型穩定，分離度好。本文對多組流動相系統進行了試驗比較，最后選用甲醇-磷酸鹽緩沖液(65∶35)為流動相；對多個pH值進行了試驗比較，發現pH值為3.0時峰型較好且分離度良好。

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·臨床藥學·

作者單位：荊州市第一人民醫院a.藥學部，b.神經外科，湖北 荊州434000