芻議血液進(jìn)行核酸檢測(cè)的重要性

時(shí)玲玲河南省焦作市中心血站獻(xiàn)血辦，河南焦作　454000

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芻議血液進(jìn)行核酸檢測(cè)的重要性

時(shí)玲玲
河南省焦作市中心血站獻(xiàn)血辦，河南焦作454000

［摘要］改革開放帶了的不僅僅是科技的發(fā)展和經(jīng)濟(jì)的進(jìn)步，而且還帶來(lái)了一些新型的病毒，例如HIV病毒，乙肝病毒等，特別是HIV病毒，即艾滋病患者攜帶的病毒，到現(xiàn)在為止，依然沒(méi)有辦法治愈艾滋病，沾染了HIV就相當(dāng)于宣告了死亡，HIV的傳播途徑中，有一項(xiàng)是血液傳播，而且，每年因?yàn)檠航佑|而患上艾滋病的不再少數(shù)，所以對(duì)血液進(jìn)行核算檢測(cè)是十分重要的。為了分析血液進(jìn)行核酸檢測(cè)的重要性，該院對(duì)2015年上半年未進(jìn)行核酸檢測(cè)和下半年進(jìn)行核算建成進(jìn)行對(duì)比，并得出結(jié)果對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者進(jìn)行的核酸檢測(cè)，不但降低了輸血的風(fēng)險(xiǎn)，而且降低了血液浪費(fèi)。下面首先介紹我血戰(zhàn)所做的研究與所得到的結(jié)果，其次介紹血液核酸檢測(cè)的一般方法，最后介紹核酸檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)。

［關(guān)鍵詞］血液；核酸檢測(cè)；重要性

核酸檢測(cè)已經(jīng)成為發(fā)達(dá)國(guó)家和發(fā)展中國(guó)家獻(xiàn)血者傳染病篩查的重要內(nèi)容，核酸檢測(cè)主要是通過(guò)對(duì)某些病毒的DNA進(jìn)行檢測(cè)，以鑒定血液中是否存在這些病毒。核酸檢測(cè)可以有效地縮短病毒特異抗原和抗體免疫測(cè)定的“窗口期”，從而減少輸血風(fēng)險(xiǎn)，提高輸血安全。所謂窗口期是指人感染病毒后到外周血液中能夠檢測(cè)中該病毒抗體的這段時(shí)間。核酸檢測(cè)一般檢測(cè)的病毒有：（1）乙肝病毒，乙肝核酸檢測(cè)不僅可以縮短乙肝病毒感染的窗口期，而且還可以減少乙肝病毒攜帶者以及乙肝病毒變異的漏診率；（2）丙肝病毒，核酸檢測(cè)既可以將感染的檢測(cè)的窗口期，還可以減少免疫靜默感染的漏檢；（3）人類免疫缺陷病毒，即HIV病毒，可以縮短HIV感染檢測(cè)的窗口期［1］。

1　該血站血液核酸檢測(cè)中實(shí)踐與效果

國(guó)內(nèi)血站血液檢測(cè)大部分采用ELISA檢測(cè)方法，由于該方法本身的局限性，使臨床輸血傳播風(fēng)險(xiǎn)依舊存在。2010年我國(guó)部分血站開始核酸檢測(cè)試點(diǎn)，2012年原衛(wèi)生部頒布血站技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，將核酸檢測(cè)（NAT）納入血液檢測(cè)項(xiàng)目，開啟了我國(guó)血液NAT檢測(cè)時(shí)代。NAT可明顯縮短病毒檢測(cè)的“窗口期”，由于NAT檢測(cè)與ELLSA檢測(cè)組成的檢測(cè)系統(tǒng)可優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，提高了血液篩查的質(zhì)量，降低了輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)，但由于核酸檢測(cè)代價(jià)高，使部分血站不愿意進(jìn)行核酸檢測(cè)。該血站于2015年7月在省內(nèi)率先進(jìn)行核算檢測(cè)，先將該站的研究結(jié)果匯報(bào)：通過(guò)研究對(duì)比得出，上半年不合格人數(shù)占上半年采血量的1%，下半年不合格人數(shù)占下半年采血量的0.5%，下半年不合格人數(shù)只占全年不合格人數(shù)的34%，充分說(shuō)明進(jìn)行核酸檢測(cè)后：①減少了血液浪費(fèi)，保證了獻(xiàn)血隊(duì)伍。②縮短了窗口期，阻斷部分因ELLSA檢測(cè)“窗口期”漏檢而導(dǎo)致的輸血傳染病發(fā)生，從而降低輸血傳播性疾病風(fēng)險(xiǎn)，血液安全得到了大幅度的提升。③避免了假陽(yáng)性的的出現(xiàn)，因獻(xiàn)血者得知自己如果是陽(yáng)性病人時(shí)，由于對(duì)傳染病的認(rèn)識(shí)不夠，會(huì)造成生活，工作，家庭面臨著巨大的壓力［2］。④從目前國(guó)內(nèi)部分血站的檢測(cè)數(shù)據(jù)看：HBV、HCV和HIV檢測(cè)的窗口期縮短，并且檢出了一定數(shù)量上ELISA試劑陰性的陽(yáng)性樣品，從理論上分析可以在一定程度上減少輸血傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)。⑤目前該省已進(jìn)行集中化檢測(cè)，該站接受來(lái)自省內(nèi)附近地市如安陽(yáng)、濮陽(yáng)、濟(jì)源、鶴壁的血樣，大大降低了血液檢測(cè)成本［3］。

2　血液核酸檢測(cè)的一般方法

2.1聚合酶連反應(yīng)擴(kuò)增方法

聚合酶連反應(yīng)，即PCR，它是一種在體外模擬人體內(nèi)DNA的復(fù)制過(guò)程，從而擴(kuò)增核酸的數(shù)量，最早使用電泳的方式擴(kuò)增核酸，這種電泳方式不與外界隔離，所以目標(biāo)核酸容易被污染，這種方式基本已經(jīng)被淘汰了。目前臨床上最常使用的是，利用熒光定量PCR，不僅可以用于各種傳染病的診斷，還可以對(duì)疾病治療之后的效果進(jìn)行評(píng)估。利用熒光標(biāo)記探針，然后與目標(biāo)核酸雜交，就可以在PCR增值擴(kuò)張之后，找到目標(biāo)核酸，減少其他污染的核酸帶來(lái)的干擾，這樣就提高了核酸檢測(cè)的靈敏度和特異度［4］。

2.2轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)法

這種方法包括TMA和核酸序列依賴擴(kuò)增系統(tǒng)，TMA是利用一種特殊的逆轉(zhuǎn)錄酶和一種RNA多聚酶，在一定的溫度下，對(duì)RNA和DNA進(jìn)行擴(kuò)增的方法，其原理是：在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以病毒的核酸為模板，轉(zhuǎn)錄出另一條核酸，然后利用逆轉(zhuǎn)錄酶的功能將，原來(lái)模板與轉(zhuǎn)錄的核酸分離降解，然后利用RNA多聚酶，轉(zhuǎn)錄出多個(gè)RNA。核酸序列依賴擴(kuò)增系統(tǒng)與TMA基本上相同，只不過(guò)是在核酸提取以及增值產(chǎn)物的方法上有所不同。這兩種方法相比較PCR來(lái)說(shuō)，更加簡(jiǎn)單，因?yàn)樗枰臏囟仁呛愣ǖ模苑磻?yīng)過(guò)程簡(jiǎn)單，效率相對(duì)較高［5］。

TMA與PCR有一些不同之處，主要表現(xiàn)在：第一，TMA是一種等溫的增值，它不需要PCR擴(kuò)張技術(shù)中解鏈、退火、延伸三個(gè)過(guò)程中所需要的不同溫度；第二，TMA的技術(shù)產(chǎn)物是核酸即RNA，而PCR的產(chǎn)物是核糖核酸，即DNA；第三，TMA模擬的是DNA轉(zhuǎn)錄RNA的過(guò)程，而PCR模擬DNA復(fù)制為DNA的過(guò)程。兩種方法各有各的優(yōu)點(diǎn)，國(guó)內(nèi)大多都使用熒光標(biāo)記PCR的技術(shù)，但是仍然有一些漏檢，所以學(xué)者還需要在血液篩查的技術(shù)上多做研究［6］。

3　核酸檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)

核酸檢測(cè)是直接將病毒的核酸做檢測(cè)的一系列技術(shù)的合稱，它的方法比較復(fù)雜，需要用到物理、化學(xué)、生物等多門學(xué)科的理論知識(shí)，通過(guò)把某種核酸增值，或?qū)⒑怂崴鶖y帶的信號(hào)放大，讓含量極少的核酸，變成可以直視的、形象的表現(xiàn)，從而判斷樣本中是否存在該種病毒［7］。

3.1提高檢出率，從而使輸血更加安全

國(guó)內(nèi)外做過(guò)大量的核酸檢測(cè)的研究，基本可以證明，核酸檢測(cè)可以減少各種原因?qū)е碌牟《韭z，從而使采集到的血液更加安全，也不會(huì)污染其他血液［8］。

3.2可以減少疾病再次傳播

核酸檢測(cè)的結(jié)果與第三代酶免檢測(cè)相結(jié)合可以反映出獻(xiàn)血者是否感染傳染病，以及獻(xiàn)血者的感染狀況，通過(guò)對(duì)核酸檢測(cè)陽(yáng)性的獻(xiàn)血者，進(jìn)一步檢查，追蹤尋訪，可以發(fā)現(xiàn)一些處于窗口期的獻(xiàn)血者，不僅保障血液的安全性，而且可以提醒獻(xiàn)血者及早就醫(yī)，降低獻(xiàn)血者因?yàn)椴恢槎鴤魅窘o他人的風(fēng)險(xiǎn)［9］。

3.3檢測(cè)模式更加優(yōu)化

核酸檢測(cè)可以使血液檢測(cè)的模式更加優(yōu)化，提高了檢測(cè)的檢出率，防止攜帶病毒的獻(xiàn)血者的血液污染其他質(zhì)量合格的血液，核酸檢測(cè)可以取代一些其他的血液檢測(cè)，例如可以取代2次第三代酶免檢測(cè)中的一次，或許也能取代谷丙轉(zhuǎn)氨酶的檢測(cè)。所以說(shuō)核酸檢測(cè)可以將血站血液檢測(cè)的過(guò)程簡(jiǎn)化，而不耽誤檢測(cè)的準(zhǔn)確度，可以減少浪費(fèi)，提高血站的工作效率。

3.4對(duì)輸血的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估

因?yàn)楹怂釞z測(cè)的高靈敏性，可以彌補(bǔ)第三代酶免檢測(cè)中的漏洞，能夠?qū)⒌谌该鈾z測(cè)漏檢的樣本重新檢測(cè)出來(lái)，并且通過(guò)計(jì)算機(jī)計(jì)算，可以得出我國(guó)經(jīng)過(guò)輸血傳播疾病的殘余風(fēng)險(xiǎn)，核酸檢測(cè)獲得的參與風(fēng)險(xiǎn)數(shù)據(jù)，可以作為金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)或校正數(shù)學(xué)模型推算出來(lái)的參與風(fēng)險(xiǎn)的準(zhǔn)確性，這樣也可以促進(jìn)數(shù)學(xué)模型的進(jìn)化。

雖然說(shuō)核酸檢測(cè)有很多的優(yōu)點(diǎn)，但也有很多因素影響血液核酸檢測(cè)的結(jié)果。在檢測(cè)過(guò)程中要注意：第一，我國(guó)乙肝病毒的患者和攜帶者都比較多，所以，應(yīng)該十分重視乙肝病毒的核酸檢測(cè)；第二，要重視核酸檢測(cè)工作的管理，在選擇篩選的試劑時(shí)，一定要選擇靈敏度和特異度都比較高的的試劑，尤其是乙肝病毒的篩選，一定要比其他病毒的篩選更加靈敏；第三，有的時(shí)候，為了降低檢測(cè)的成本，會(huì)將樣本混合檢測(cè)，這種檢測(cè)雖然降低成本，但是一旦其中有一個(gè)樣本有病毒，那么整個(gè)血液都會(huì)被浪費(fèi)掉，所以要減少混合樣本的數(shù)量［10］。

4　結(jié)語(yǔ)

傳染病中有很大一部分都是通過(guò)血液傳播的。所以輸血的安全性是全世界都在關(guān)注的焦點(diǎn)，核酸檢測(cè)是一種檢測(cè)出獻(xiàn)血者是否攜帶病毒的有效的方式之一。該血站研究結(jié)果表明，核酸檢測(cè)可明顯縮短病毒檢測(cè)的“窗口期”，由于NAT檢測(cè)與ELLSA檢測(cè)組成的檢測(cè)系統(tǒng)可優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，提高了血液篩查的質(zhì)量，降低了輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)。核酸檢測(cè)的方法最常見的為聚合酶連反應(yīng)擴(kuò)增方法以及轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)法，兩種方法目的一致，但是，過(guò)程有一些不同。核酸檢測(cè)具有提高檢出率，從而使輸血更加安全、可以減少疾病再次傳播、檢測(cè)模式更加優(yōu)化、對(duì)輸血的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估等優(yōu)點(diǎn)，但是因?yàn)檠汉怂釞z測(cè)的特殊性，我們?cè)跈z測(cè)血液核酸時(shí)，也應(yīng)關(guān)注其影響因素把不利因素隆到最低。

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Discussion on the Importance of Nucleic Acid Detection in Blood

SHI Ling-ling
Henan Province Jiaozuo City Blood Donation Office，Jiaozuo，Henan Province，454000 China

［Abstract］With the policy of reform and opening to the outside world is not only the progress of science and technology and the development of economy，but also bring some new virus，like HIV，hepatitis B virus，especially HIV，the AIDS patients carrying the virus，up to now，still do not have the means to cure AIDS，was infected with the HIV is a declaration of death，the routes of HIV transmission，is a blood borne，and the annual because of exposure to blood from AIDS is no longer a few，so the blood were accounting detection is very important.The importance of nucleic acid detection in order to analyze the blood，our hospital to 2015 half a year without nucleic acid detection and the second half of the accounting built were compared，and the result﹕nucleic acid detection of unpaid blood donors，not only reduces the risk of blood transfusion，and reduces the waste of liquid blood.Below introduces my bloody research and the obtained results，followed by the introduction of the general method of nucleic acid blood tests，finally introduces the advantages of nucleic acid detection.

［Key words］Blood；Nucleic acid detection；Importance

［中圖分類號(hào)］R450

［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A

［文章編號(hào)］1672-5654（2016）03（a）-0107-03

DOI：10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.07.107

［作者簡(jiǎn)介］時(shí)玲玲（1980.6-），女，河南原陽(yáng)人，本科，護(hù)師，主要從事輸血招募工作。

收稿日期：（2016-01-05）