安徽漢族人群血小板膜糖蛋白Ⅱb基因多態性與冠心病的相關性

張 志， 劉 萍

1.安徽省第二人民醫院內六科，合肥 200041 2.安徽醫學高等專科學校臨床醫學系，合肥 230061

研究簡報

安徽漢族人群血小板膜糖蛋白Ⅱb基因多態性與冠心病的相關性

張 志1， 劉 萍2

1.安徽省第二人民醫院內六科，合肥 200041 2.安徽醫學高等專科學校臨床醫學系，合肥 230061

冠心病；基因多態性；血小板膜糖蛋白；糖蛋白Ⅱb

近年來，我國冠心病(coronary heart disease，CHD)的發病率呈上升趨勢，嚴重威脅人們的健康。血栓形成易導致冠狀動脈閉塞，引起心肌梗死、心絞痛，是CHD患者病情加重的主要始發因素[1]。血小板膜糖蛋白(glycoprotein,GP) 覆蓋在血小板質膜表面，在血小板活化和血栓形成中發揮關鍵作用[2-3]。目前已發現GP的5種血小板膜受體；GP與受體在一定條件下形成復合體，調節血小板性血栓的形成，其中GPⅡb HPA-3基因具有重要作用[4]。HPA-3基因長17.2 kb，含30個外顯子，編碼1 039個氨基酸，其中第26外顯子上存在I843S多態性，形成HPA-3血型[5]。因此，本研究對安徽漢族人群GPⅡb HPA-3基因多態性進行研究，探討其與冠心病發生的相關性，為后續研究奠定基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年1月至2011年12月在安徽省立醫院和安徽省第二人民醫院心內科就診的CHD患者74例，其中男性39例，女性35例。CHD診斷符合世界衛生組織(WHO)AHA/WH的診斷標準[6]。患者年齡41～86歲，平均(64.8±12.2)歲。另選健康對照組60例，為安徽醫科大學第一附屬醫院、安徽省立醫院和安徽省第二人民醫院門診健康體檢者，其中男性38例，女性22例，年齡42～82歲，平均(60.2±9.8)歲。兩組人群年齡構成、性別比例、吸煙量及血脂水平差異無統計學意義，具有可比性。本研究通過醫院醫學倫理委員會審核，所有研究對象均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 血小板膜GP基因檢測及測序鑒定 取研究對象外周靜脈血2 mL，用全血基因組DNA抽提試劑盒(上海生工生物工程有限公司)提取DNA，紫外分光光度計測定DNA濃度，-80℃保存備用。PCR擴增外周血基因組DNA，引物序列如下:上游引物5′-CTC AAG GTA AGA GCT GGG TGG AAG AAA GAC-3′，下游引物5′-CTC ACT ACG AGA ACG GGA TCC TGA AGC CTC -3′。擴增目的基因片段長度為253 bp，引物均由上海生工生物工程有限公司合成。PCR反應體系如下：在EP管中加入試劑，使終末濃度分別為1×buffer，MgCl22.8 mmol/L、dNTP 200 μmol/L、基因組DNA 400 ng、Taq酶2 U、引物0.25 pmol/μL，總體積為50 μL。

進行PCR擴增，程序如下：在96 ℃下進行預變性，時間維持在5 min，然后在96 ℃下進行變性，時間為90 s，變性過后在60.5 ℃進行退火處理，時間90 s，在72 ℃下延伸(持續180 s)，然后72 ℃ 40 個循環，7 min。用1×TBE緩沖液進行電泳，在100 V下電泳約30 min，待點樣液在凝膠上行進至2/3處時停止電泳。在紫外透射儀下觀察結果，通過PCR產物的條帶與DNA Marker的對比，分析PCR產物電泳結果。病例組及對照組共134例標本全部進行PCR擴增，擴增產物行凝膠電泳，條帶均清晰說明PCR擴增成功。將PCR產物送上海生物科技有限公司測序，分析是否存在GPⅡb HPA-3基因多態性。

1.3 統計學處理 采用SPSS 19.0統計軟件。計數資料組間比較采用χ2檢驗。檢驗水準(α)為0.05。

2 結 果

2.1 兩組患者GPⅡb HPA-3基因型分析 PCR擴增后GPⅡb HPA-3的基因產物經2%的瓊脂糖凝膠電泳，觀察到產物為253 bp的片段，符合預期大小。測序結果(圖1)顯示：在GPⅡb HPA-3基因T18809G發生變異，導致絲氨酸取代異亮氨酸，造成I843S(Ile843Ser)多態性。

圖1 GPⅡb基因測序結果

A: GPⅡb HPA-3的第843位點的堿基是T; B: GPⅡb HPA-3的第843位點的堿基是G; C: GPⅡb HPA-3的第843位點的堿基是T/G

2.2 兩組人群等位基因的分布頻次分析 74例冠心病患者中，GPⅡb HPA-3形成了3種基因型：HPA-3aa、HPA-3ab、HPA-3bb。病例組a等位基因出現的頻數為80，b等位基因出現的頻數為68；對照組a等位基因出現的頻數為86，b等位基因出現的頻數為34。與對照組相比，病例組aa和ab基因型分布明顯增多，a等位基因出現的頻率也較高，差異均有統計學意義(P<0.05，表1)。

表1 兩組患者GPⅡb HPA-3的基因多態性分析

3 討 論

GPⅡb/Ⅲa作為細胞表面黏附蛋白受體超基因家族中的成員，在血栓形成中發揮重要作用，這種受體在抑制血小板聚集方面發揮一定作用，是目前研究的熱點。但是，目前關于CHD與GPⅡb基因相關性的研究較少，且研究結果不盡相同[6-8]。因此，本研究針對與我國漢族人群關聯最大的HPA-3基因進行分析，為后續研究奠定基礎。

本研究發現,CHD人群GPⅡb等位基因攜帶者頻數較對照組高，差異有統計學意義(P<0.05)。結果提示：冠心病的發生與GPⅡb基因多態性存在著一定的相關性。這種基因多態性可能是CHD患者的遺傳易感因子。由于本研究樣本量較小，相關研究結論仍需進一步的大樣本研究證實。

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[本文編輯] 葉 婷， 曉 璐

Correlation study of platelet glycoproteinⅡb gene polymorphism and coronary heart disease in Anhui Han population

ZHANG Zhi1, LIU Ping2

1.Department of Internal Medicine Ⅵ, Anhui No.2 Province People’s Hospital, Hefei 200041, Anhui, China 2.School of Clinical Medicine, Anhui Medical College, Hefei 230061, Anhui, China

coronary heart disease; gene polymorphism; platelet membrane glycoprotein; glycoproteinⅡb

2016-03-31[接受日期]2016-10-20

安徽省教育廳科研項目 (KJ2009B188Z).Supported by Research Project of Provincial Education Board of Anhui (KJ2009B188Z).

張 志，主治醫師.E-mail:583763687@qq.com

10.12025/j.issn.1008-6358.2016.20160390

R 541.4

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