黨參多糖可溶性粉對肉仔雞血清ND抗體水平、IgG及腸道SIgA含量的影響

石軼男，楊絨娟，扆妍妍，孫 娜，孫耀貴，李宏全

(山西農業大學動物科技學院， 山西太谷 030801)

黨參多糖可溶性粉對肉仔雞血清ND抗體水平、IgG及腸道SIgA含量的影響

石軼男，楊絨娟，扆妍妍，孫 娜，孫耀貴，李宏全*

(山西農業大學動物科技學院， 山西太谷 030801)

為了研究黨參多糖可溶性粉對肉仔雞免疫功能的影響。將300只羅斯308白羽肉仔雞分為黨參多糖可溶性粉高、中、低劑量組，陽性藥對照組，疫苗對照組和空白對照組，每組50只。黨參多糖可溶性粉在每千克飲水中添加0.4、0.2和0.1 g藥物，陽性藥對照組在每千克飲水中添加0.2 g黃芪多糖粉，疫苗對照組和空白對照組不添加任何藥物。除空白對照組外，7日齡首免用雞新城疫低毒力活疫苗(La Sota株)滴鼻點眼，21日齡二免，在每次免疫的同時給藥，連續三天。結果顯示，黨參多糖可溶性粉可顯著增加肉仔雞胸腺、脾臟和法氏囊指數；顯著提高接種新城疫(ND)疫苗后肉仔雞血清中ND抗體水平、免疫球蛋白G(IgG)含量和腸道分泌型免疫球蛋白A(SIgA)含量(P<0.05)。此外，飲水中添加黨參多糖可溶性粉對肉仔雞有明顯增重作用(P<0.05)。因此，黨參多糖可溶性粉不僅有增強肉仔雞免疫功能的作用，而且對肉仔雞體重增長有一定促進作用；其中以中劑量藥物組，即在每千克飲水中添加0.2 g黨參多糖可溶性粉效果最好。

黨參多糖可溶性粉；免疫調節；肉仔雞

黨參是桔梗科黨參屬多年生纏繞性草本，根供藥用。黨參之名，中國最早見于清吳儀洛著《本草從新》。中國東北、華北、西北各地都有分布，朝鮮及蘇聯遠東地區也有，山西潞安(今長治縣)栽培的“潞黨參”較為有名。黨參根含皂苷、糖類及微量生物堿[1]。多糖是廣泛存在于植物體內，經過提取分離得到的一類天然大分子活性物質，由單糖之間脫水形成糖苷鍵，并以糖苷鍵線性或分枝連接而成的多于20個糖基的鏈狀聚合物[2]，已被認為有免疫調節和抗腫瘤的作用，其作用于免疫效應細胞如淋巴細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞和自然殺傷細胞，參與固有免疫和適應性免疫[3-5]。黨參多糖可溶性粉的有效成分為多糖，本研究通過給肉仔雞飲用不同濃度的黨參多糖可溶性粉，觀察抗體效價、免疫器官指數、體重、免疫球蛋白G(IgG)和腸道分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的變化，探討黨參多糖可溶性粉對肉仔雞免疫功能的影響，為黨參多糖可溶性粉在臨床中的應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 藥物 黨參多糖可溶性粉：實驗室自制。規格：每1 g含黨參多糖大于500 mg。

陽性對照藥：黃芪多糖粉，規格100 g/袋，每1 g含黃芪多糖不得少于450 mg，北京生泰爾科技股份有限公司生產，批準文號：獸藥字(2014)010635236，批號：1506181。新城疫疫苗及檢測抗原：雞新城疫低毒力活疫苗(La Sota株)，青島易邦生物工程有限公司，批準文號：獸藥生字 (2010)150132007，批號：150185001；新城疫檢測抗原，中國獸醫藥品監察所，批準文號：獸藥生字(2012)150138082，批號：2015001。

1.2 試驗動物 1日齡羅斯308健康白羽肉仔雞450只，購于文水縣錦繡農牧發展有限公司。飼養于山西農業大學動物科技試驗站實驗動物房內。3層籠養、自由采食和飲水。

1.3 動物分組處理 健康羅斯雞飼養至7日齡時，按體重相近的原則，取300只隨機分為6組，每組50只，分組與處理見表1。

表1 試驗動物分組及處理

1.4 檢測項目

1.4.1 血清ND抗體效價 分別于首免當天(7日齡)及首免后第 7(14日齡)、14(21日齡)、21(28日齡)和28天(35日齡)，每組隨機抽取 10只，心臟采血，分離血清，用 β-微量法檢測血凝抑制抗體效價。

1.4.2 免疫器官指數 分別于首免后第14(21日齡)、28天(35日齡)，每組隨機抽取10只，稱取體重，剖殺，取胸腺、脾臟、法氏囊稱重。

計算器官指數=器官重量(mg)/體重(g)。

1.4.3 免疫球蛋白含量 分別于首免后第14(21日齡)、28天(35日齡)，每組隨機抽取10只，心臟采血并分離血清，屠宰后摘取十二指腸、空腸和回腸(各約3 cm)置于平皿中，縱行剖開，刮取腸黏膜黏液，收集于同一離心管。內容物與生理鹽水按 1∶1(W/V)稀釋，混勻后 3000 rpm，4 ℃，離心15 min，取上清液，-20℃冰箱保存備用。采用雙抗夾心ELISA法檢分別檢測血清中免疫球蛋白G(IgG)和分泌型免疫球蛋白A(sIgA)含量。

1.4.4 平均體重 分別于免疫當天(7日齡)、首免后第14(21日齡)、28天(35日齡)，每組隨機抽取10只，稱取體重，計算平均體重。

1.5 統計分析 采用SPSS17.0軟件進行數據處理和統計分析。以SPSS統計軟件ONE-WAY ANOVA程序計算各組各項指標平均數和標準差，用LSD(最小顯著級差)法和Duncan's多重比較對實驗數據進行統計分析，結果均以均數±標準差(Mean±SD)表示。

2 結果

2.1 血清抗體效價 由表2可知，7日齡時，各組新城疫抗體效價無明顯差異(P>0.05)。除7日齡外不同時間點疫苗對照以及給藥組抗體效價均大于空白對照組(P<0.05)，說明新城疫疫苗免疫成功。14日齡，低劑量組、高劑量組與疫苗對照組抗體效價差異不明顯(P>0.05)；中劑量組抗體效價明顯高于疫苗對照(P<0.05)。21日齡、28日齡、35日齡，低劑量組抗體效價相比于疫苗對照組有升高趨勢但差異不明顯(P>0.05)；中劑量組、高劑量組抗體效價明顯高于疫苗對照組(P<0.05)。中劑量藥物組與陽性藥物組抗體效價比較，差異不明顯(P>0.05)。

表2 黨參多糖可溶性粉對雞血清新城疫抗體效價的影響(以log2表示，n=10)

同列字母相同者，表示差異不顯著(P>0.05)；字母不同者，表示差異顯著(P<0.05)，下同。

2.2 免疫器官指數 由表3可知，低劑量組胸腺指數在21日齡與空白對照組和疫苗對照組無顯著差異(P>0.05)， 35日齡顯著高于空白對照組(P<0.05)，與疫苗對照組無顯著差異(P>0.05)；中劑量組胸腺指數均明顯高于空白對照組和疫苗對照組(P<0.05)；高劑量組胸腺指數在21日齡明顯高于空白對照組和疫苗對照組(P<0.05)，35日齡明顯高于空白對照組(P<0.05)，與疫苗對照組無差異(P>0.05)。中劑量組胸腺指數與陽性藥物組基本相似(P>0.05)。

表3 黨參多糖可溶性粉對雞胸腺指數的影響(mg/g，n=10)

由表4可知，低劑量組脾臟指數在21日齡和35日齡顯著高于空白對照組(P<0.05)，與疫苗對照組組無顯著差異(P>0.05)；中劑量組脾臟指數在21日齡和35日齡顯著高于空白對照組與疫苗對照組(P<0.05)。高劑量組在21日齡明顯高于空白對照組和疫苗對照組(P<0.05)；35日齡明顯高于空白對照組(P<0.05)，與疫苗對照組無差異(P>0.05)。21日齡和35日齡，高劑量組與陽性藥物組相比差異不顯著(P>0.05)；中劑量組在35日齡與陽性藥物組差異不顯著(P>0.05)。

表4 黨參多糖可溶性粉對雞脾臟指數的影響(mg/g，n=10)

由表5可知，低劑量組法氏囊指數在21日齡和35日齡與空白對照組和疫苗對照組無顯著差異(P>0.05)，中劑量組法氏囊指數在21日齡和35日齡顯著高于空白對照組與疫苗對照組(P<0.05)；高劑量組法氏囊指數在21日齡顯著高于空白對照組和疫苗對照組(P<0.05)，35日齡顯著高于空白對照組(P<0.05)，與疫苗對照組無差異(P>0.05)；21日齡和35日齡，高劑量組與陽性藥物組相比差異不顯著(P>0.05)；中劑量組在35日齡與陽性藥物組差異不顯著(P>0.05)。

表5 黨參多糖可溶性粉對雞法氏囊指數的影響(mg/g，n=10)

2.3 免疫球蛋白含量 由表6可知，低劑量組血清免疫球蛋白G(IgG)在21日齡與空白對照組和免疫對照組無顯著差異(P>0.05)，35日齡時明顯高于空白對照組(P<0.05)，與疫苗對照組無明顯差異(P>0.05)；中劑量組IgG在21日齡和35日齡明顯高于空白對照組與疫苗對照組(P<0.05)；高劑量組IgG在21日齡與空白對照組和疫苗對照組無差異(P>0.05)，35日齡均明顯高于空白對照組和疫苗對照組(P<0.05)；中劑量組和高劑量組與陽性藥物組IgG含量差異不顯著(P>0.05)。

表6 黨參多糖可溶性粉對雞血清免疫球蛋白G(IgG)的影響(g/L，n=10)

由表7可知，低劑量組腸道分泌型免疫球蛋白A(sIgA)在21和35日齡顯著高于空白對照組(P<0.05)，與疫苗對照組組無顯著差異(P>0.05)；中劑量、高劑量組在21日齡和35日齡均顯著高于空白對照組與疫苗對照組(P<0.05)；中劑量組與陽性藥物組相比sIgA含量差異不顯著(P>0.05)。

表7 黨參多糖可溶性粉對雞腸道分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的影響(mg/g，n=10)

2.4 體重變化 由表8可知，7日齡時，各組之間體重差異不顯著(P>0.05)。低劑量組體重在21日齡與空白對照組和疫苗對照組對照組相比無顯著差異(P>0.05)，35日齡時，低劑量組體重明顯高于空白對照組(P<0.05)，與疫苗對照組無顯著差異(P>0.05)；中劑量、高劑量組體重在21日齡和35日齡均明顯高于空白對照組與疫苗對照組(P<0.05)。中劑量組和高劑量與陽性藥物組相比差異不顯著(P>0.05)。

表8 黨參多糖可溶性粉對雞體重的影響(g，n=10)

3 討論與小結

3.1 黨參多糖可溶性粉對ND抗體效價的影響 新城疫(newcastle disease，ND)是由新城疫病毒引起的一種急性、熱性、敗血性和高度接觸性傳染病，又稱為禽副粘病毒1型(APMV-1)[6]，其特征是高熱、呼吸困難、下痢和出現神經癥狀。新城疫是危害雞和最嚴重的疫病之一，易感雞群一旦傳入新城疫，傳 播很快，于數天內波及全群，造成毀滅性流行，發病率和死亡率可達90%以上，因此在集約化的養雞場提高新城疫疫苗的抗體效價顯得尤為必要。體液免疫是由B細胞介導通過分泌抗體來進行免疫應答，新城疫抗體水平是反應新城疫疫苗免疫后雞特異性免疫反應功能的指標[7]，多糖通過與B淋巴細胞表面不同受體結合激活下游的信號通路，從而激活B淋巴細胞分泌細胞因子及抗體[8]。刺五加多糖與B淋巴細胞表面的toll樣受體結合激活MAPKs(ERK2、JNK和p38)，從而激活B淋巴細胞[9]。本研究表明，ND抗體效價在7日齡到35日齡低劑量組與免疫對照組無顯著差異；中劑量組與免疫對照組相比抗體水平顯著升高；高劑量組在14日齡到35日齡與免疫對照組相比抗體水平顯著升高。表明黨參多糖可溶性粉與新城疫低毒力活疫苗配合使用，可顯著提高雞血清ND抗體效價，但黨參多糖與B細胞膜上的哪些受體結合，以及是否會使抗體效價維持在一個較高水平還有待研究。

3.2 黨參多糖可溶性粉對免疫球蛋白(IgG)的影響 免疫球蛋白G(IgG)在脾臟和淋巴結中合成，主要分布在血清和組織液中，是抗細菌、抗毒素和抗病毒抗體的主要組成部分，也是機體抗感染免疫的過程中的重要物質基礎,血清中的免疫球蛋白水平的檢測是檢驗機體免疫狀況的常用指標。多糖的添加可刺激機體產生免疫應答，從而使血清中IgG含量升高[10]。在 21日齡中劑量組與疫苗對照組相比血清中IgG有顯著升高，21日齡、38日齡中劑量、高劑量與疫苗對照組相比顯著升高。表明黨參多糖可溶性粉可以明顯增加血清中IgG的含量，從整體上看中劑量黨參多糖可溶性粉免疫增強效果最好，提示中藥多糖的生物活性不是劑量越大越好。

3.3 黨參多糖可溶性粉對免疫器官指數及體重的影響 胸腺、脾臟和法氏囊是雞主要的免疫器官。胸腺與細胞免疫有關，脾臟與細胞和體液免疫均有關系，法氏囊是禽類的中樞免疫器官，可產生B淋巴細胞從而產生特異性抗體來完成特定的免疫應答。大量研究表明，多糖可提高雞免疫器官指[11-13]。本研究表明，免疫器官指數在21日齡、35日齡中劑量組和高劑量均顯著高于對照組；在7日齡各藥物組肉仔雞體重與疫苗對照組對照組無顯著差異，21、35日齡中劑量組和高劑量顯著高于對照組。表明黨參多糖可溶性粉對肉仔雞免疫器官發育及肉仔雞體重增長有一定的促進作用，且中劑量和高劑量黨參多糖粉效果比較明顯。

3.4 黨參多糖可溶性粉對泌型免疫球蛋白A(SIgA)的影響 腸消化管內含有彌散淋巴組織、孤立淋巴小結、集合淋巴小結以及淋巴細胞、巨噬細胞和漿細胞等，它們參與構成機體免疫防御的第一道防線，當消化管的黏膜受到抗原的作用后，其黏膜內的淋巴組織隨即產生免疫應答并向消化管內分泌免疫球蛋白，即分泌型免疫球蛋白A(SIgA)[14]。SIgA作為粘膜免疫的主要效應因子，不僅能抗細菌抗病毒，而且在腫瘤的發生中也起著重要作用[15-16]。近年來的研究發現，植物多糖可調節腸道粘膜免疫。張芳毓[17]等人證明人參莖葉多糖可提高雛雞小腸SIgA的分泌量；烏賊墨多糖可增加小鼠腸道內SIgA的分泌量[18]。本研究表明，SIgA 在21日齡、35日齡中劑量和高劑量明顯高于對照組，且疫苗對照組明顯高于空白組，證明疫苗免疫后可提高SIgA的分泌量，配合黨參多糖可溶性粉使用則可使分泌量提高。提示黨參多糖可溶性粉可明顯提高肉仔雞腸內sIgA的分泌量，表明黨參多糖可溶性粉可增強肉仔雞的腸粘膜免疫功能。

黨參多糖可溶性粉與新城疫疫苗配合使用可增強疫苗效果，并且對免疫系統有一定的調節作用，且中劑量推薦為最適臨床用量。

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(編輯：陳希)

Effects of Codonopsis Pilosula Polysaccharides Soluble Powder on Broiler Serum Antibody Level of ND, IgG and Intestinal SIgA Content

SHI Yi-nan, YANG Rong-juan, YI Yan-yan, SUN Na, SUN Yao-gui, LI Hong-quan*

(CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine,ShanxiAgriculturalUniversity,Taigu,Shanxi030801 ,China)

The effects of codonopsis pilosula polysaccharides soluble powder on immune function of broilers. 308 Ross 300 broilers were divided into codonopsis pilosula polysaccharides soluble powder high, medium and low dose group, positive control group, immune control group and blank control group, 50 broilers in each group. The codonopsis pilosula polysaccharides soluble high, medium and low dose group added 0.1, 0.2 and 0.4 g drugs per kilogram drinking water. In positive drug control group, 0.2 g astragalus polysaccharide in astragalus was added per kilogram drinking water, and in the immune control group and blank control group ,there were added no drugs. Except for the blank group, at the age of 7 d the others were the first intranasal immunized with Newcastle disease virus live vaccine (La Sota), and at 21 d of age were immunized again according to the first immuninzation, moreover the durgs were simultaneously administrated with the immunization for three consecutive days. The results showed that the drinking water added codonopsis pilosula polysaceharides soluble powder has obvious enhanced the indexes of thymus, spleen and bursa of fabricius and the contents of anti-ND antibody, IgG and SIgA in serum were significantly increased(P<0.05). In addition, were also increased the weight gain of broilers in the codonopsis pilosula polysaceharides soluble powder treatment group(P<0.05). Hence, codonopsis pilosula polysaccharides soluble powder enhanced the immune function of broilers and promoted the body weight growth, and 0.2 g codonopsis pilosula polysaccharides soluble powder added in per kilogram drinking water was the best.

codonopsis soluble powder; immune regulation; broilers

農業科技成果轉化資金項目(2014GB2A300003)

石軼男，碩士研究生，從事中藥調節動物免疫功能及其分子機制方面研究。

李宏全。E-mail: livets@163.com

2016-07-15

A

1002-1280 (2016) 09-0047-06

S853.7