昆蟲抗藥性檢測技術(shù)

趙麗萍（西藏職業(yè)技術(shù)學(xué)院，西藏　拉薩　850000）

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昆蟲抗藥性檢測技術(shù)

趙麗萍
（西藏職業(yè)技術(shù)學(xué)院，西藏拉薩850000）

摘要：隨著各類農(nóng)藥的不斷使用，昆蟲抗藥性水平越來越高，造成的經(jīng)濟(jì)損失也越來越嚴(yán)重。因此，要提前監(jiān)測出昆蟲的抗藥性，就必須有一套簡便、快捷、準(zhǔn)確、合理的檢測方法。本文對常用的生物檢測法、區(qū)分劑量法、生化檢測法及神經(jīng)電生理檢測法進(jìn)行了闡述，并對這些方法的優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行了分析。

關(guān)鍵詞：昆蟲抗藥性；檢測方法；抗性檢測

昆蟲抗藥性是一種普遍的、潛在的、強(qiáng)大的微進(jìn)化現(xiàn)象，該現(xiàn)象卻在很大程度上受到人類活動的影響，同時人類活動控制著抗藥性的發(fā)展速度和嚴(yán)重程度。各類昆蟲在殺蟲劑的高選擇壓力下都會產(chǎn)生抗性。據(jù)相關(guān)報道，自1960年至今，已有超過600種昆蟲對農(nóng)藥產(chǎn)生抗藥性，且造成的損失越來越嚴(yán)重[1]。

昆蟲主要通過改變行為、代謝解毒能力增強(qiáng)、表皮穿透力降低、靶標(biāo)敏感性降低等方式增強(qiáng)抗藥性。要了解昆蟲抗藥性水平就必須先建立一套簡單、快捷、準(zhǔn)確的抗藥性檢測方法，才能準(zhǔn)確的掌握昆蟲抗藥性水平，明確昆蟲產(chǎn)生抗性的農(nóng)藥種類，最終制定出合理的防治方案。目前用到的常規(guī)檢測方法有生物檢測法、區(qū)分劑量法、生物化學(xué)法及神經(jīng)電生理檢測法。

1生物測定法

生物檢測法又稱抗性倍數(shù)法[2]，是通過比較室內(nèi)種群和田間抗性種群的LD50或劑量-反應(yīng)曲線（LD - P1ine）的斜率來描述的，該方法是最經(jīng)典、最基礎(chǔ)的方法，包括浸漬法、點(diǎn)滴法、表面接觸法或藥膜殘留法和飼喂法4種。施德等[3]用浸漬法對浙江地區(qū)褐飛虱抗性水平進(jìn)行了檢測。曹明章等[4]用點(diǎn)滴法測定了2001—2002年浙江等四省水稻二化螟4齡幼蟲對阿維菌素、殺蟲單、氟蟲清和三唑磷的抗性水平。蘭亦全等[5]用點(diǎn)滴法測定了福建省福州市、南平、莆田、廈門等地甜菜夜蛾4齡幼蟲的抗性水平，并比較了3種新型藥劑對6個田間種群的毒力。

生物檢測法可根據(jù)藥劑的理化性質(zhì)及作用特點(diǎn)、害蟲的危害特點(diǎn)及其他生物學(xué)特性等確定，也可根據(jù)情況進(jìn)行適當(dāng)?shù)母倪M(jìn)。該方法也存在一些局限性，檢測的時候需要大量活蟲，費(fèi)時費(fèi)力；獲得的結(jié)果滯后于抗性的發(fā)展速度，不適合用于早期的抗性檢測；不能測出抗性產(chǎn)生的機(jī)制，只能測出抗性水平[6]。

2區(qū)分劑量法

區(qū)分劑量法是利用抗性個體百分率來表示抗性水平的高低，比較好的區(qū)分劑量是用殺死大約99%的敏感個體劑量，使用這個標(biāo)準(zhǔn)作為區(qū)分劑量是允許極少量的敏感個體存活，而又幾乎不殺死更高劑量下可能死亡的抗性個體[7]。于2004年，郭瑩等在研究不同溫度下，小菜蛾對毒死蜱敏感程度時運(yùn)用此方法，發(fā)現(xiàn)在一定范圍的低溫環(huán)境下飼養(yǎng)的小菜蛾對藥劑毒死蜱更敏感[8]。唐振華等在研究淡色庫蚊對馬拉硫磷抗性時，提出可以區(qū)分劑量法來區(qū)分RR、RS和SS個體，并最終測得抗性個體百分率。

區(qū)分劑量法比傳統(tǒng)的生物測定法更簡便，可以進(jìn)行早期的抗性檢測，標(biāo)定準(zhǔn)確的區(qū)分劑量能夠監(jiān)測出初次出現(xiàn)的少數(shù)抗性個體，起到早期的預(yù)警作用。

3生化測定法

昆蟲產(chǎn)生抗藥性主要是由于靶標(biāo)酶對殺蟲劑的敏感能力降低或是解毒酶對殺蟲劑的解毒能力增強(qiáng)有關(guān)，這是對昆蟲抗藥性進(jìn)行生化檢測法的理論依據(jù)。一般對酯酶、多功能氧化酶（包括NADPH -細(xì)胞色素P - 450還原酶、細(xì)胞色素P450、NADH-細(xì)胞色素b - 5還原酶、細(xì)胞色素b - 5、環(huán)氧化物水化酶、芳烴羥化酶及磷脂等）和谷胱甘肽- S -轉(zhuǎn)移酶3種酶進(jìn)行檢測，從而確定昆蟲的抗農(nóng)藥水平。

常用的檢測方法有濾紙斑點(diǎn)法、硝酸纖維素膜斑點(diǎn)法、微量滴定度酶標(biāo)板法。譚維嘉等[9]研究指出，棉蚜對溴氰菊酯的敏感性與酯酶之間存在相關(guān)性，隨著棉蚜對溴氰菊酯的不敏感性增加，棉蚜體內(nèi)的酯酶活力卻在增高。Bu11等[10]研究發(fā)現(xiàn)，煙蚜夜蛾體內(nèi)的谷胱甘肽- S -轉(zhuǎn)移酶活力隨著煙蚜夜蛾對甲基對硫磷的抗性升高而增高。劉永杰等[11]發(fā)現(xiàn)，甜菜夜蛾抗性品系體內(nèi)的細(xì)胞色素P450含量比敏感品系的高。楊帆等[12]研究表明，桃蚜高效氯氰菊酯抗性品系比敏感品系體內(nèi)的乙酰膽堿酯酶活性高。生化檢測法與傳統(tǒng)的生物測定法相比，生化測定法更加準(zhǔn)確、快速，可以對單頭昆蟲進(jìn)行抗性檢測，能夠較早的監(jiān)測出昆蟲的抗性情況。

4神經(jīng)電生理檢測法

用神經(jīng)電生理方法比較害蟲的敏感性或抗性已經(jīng)越來越多地被國內(nèi)外學(xué)者所采用。該主要應(yīng)用于研究敏感與抗性昆蟲的神經(jīng)靶標(biāo)敏感性差異以及藥劑的聯(lián)合作用。電壓鉗技術(shù)和細(xì)胞膜片鉗技術(shù)是神經(jīng)電生理技術(shù)的兩個最基本最直接的方法。細(xì)胞膜片鉗技術(shù)的不斷完善，對神經(jīng)電生理技術(shù)起到了巨大的推動作用。Pichon等[13]用電壓鉗技術(shù)研究了美洲大蠊大軸突的殺蟲劑的作用機(jī)理和電生理學(xué)特性，結(jié)果表明，殺蟲劑的作用在與電壓相關(guān)的鈉、鉀通道上。還有研究證明，煙葉蛾的神經(jīng)不敏感性是對擬除蟲菊酯產(chǎn)生抗藥性的重要原因[14]。Amar等[15]利用細(xì)胞膜鉗技術(shù)研究了溴氰菊酯對蜚蠊胚胎神經(jīng)細(xì)胞的作用，表明胚胎神經(jīng)元靜息電位較低，具有電不敏感性。

雖然神經(jīng)電生理檢測方法更加快捷、操作起來很方便，但是電生理測得的結(jié)果必須與室內(nèi)測定及田間試驗(yàn)結(jié)果相結(jié)合，這樣才能具有更高的可靠性。利用電生理技術(shù)直接快速地測定害蟲抗藥性，還需要進(jìn)一步的研究。

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收稿日期：2015—10—22