赤脛散的化學成分研究

周志紅，梁敬鈺，陽利龍，李雙杰，趙　昕，蔣志平，何周康*

(1.湖南省兒童醫院，長沙　410007；2.中國藥科大學，南京　210009)

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赤脛散的化學成分研究

周志紅1，梁敬鈺2，陽利龍1，李雙杰1，趙昕1，蔣志平1，何周康1*

(1.湖南省兒童醫院，長沙410007；2.中國藥科大學，南京210009)

摘要：目的研究赤脛散的化學成分。方法利用多種色譜方法對赤脛散進行系統的化學成分研究，應用波譜學技術和理化常數對照等方法鑒定其結構。結果從赤脛散干燥根分離鑒定12個化合物：沒食子酸(1)；3,3′-二甲基鞣花酸(2)；3,3′,4′-三甲基鞣花酸(3)；3,3′-二甲基鞣花酸-4′-O-β-D-葡萄糖苷(4)；3-甲基鞣花酸-4′-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(5)；3,3′-二甲基鞣花酸-4′-O-(6″-沒食子酰基)-β-D-葡萄糖苷(6)；短葉蘇木酚(7)；短葉蘇木酚酸乙酯(8)；短葉蘇木酚酸(9)；二十四烷酸(10)；β-谷甾醇(11)；β-胡蘿卜苷(12)。結論化合物5, 7, 8, 9, 10和11為首次從該植物中分離得到。

關鍵詞：赤脛散；酚酸；化學成分

赤脛散為蓼科蓼屬植物缺腰葉蓼(PolygonumruncinatumBuch.-Ham. ex D. Don)或華缺腰葉蓼(PolygonumruncinatumBuch.-Ham. ex D. Don var. sinense Hemsl)的干燥根莖，別名花蝴蝶、花臉蕎、散血蓮、土三七、血當歸、血見草等，根及全草入藥；性寒，味苦、澀，無毒，歸肝、心、胃、大腸經；主治痢疾、泄瀉、吐血咯血、痔瘡出血、赤白帶下、毒蛇咬傷、勞傷腰痛及跌打損傷等，外用治乳腺炎、癰癤腫毒等，具有清熱解毒、活血、舒筋、消腫之功效[1-3]?，F代藥理學研究表明，赤脛散的醇提物水溶液對G-志賀氏痢疾桿菌具有明顯的抑制作用[4]，其醇提物具有較強的抗氧化活性[5]。文獻報道赤脛散中主要含有酚酸及揮發油類成分[6-8]，其中沒食子酸具有抗腫瘤、抗菌、抗氧化等功效[9]，鞣花酸類化合物具有抗腫瘤、抗氧化等作用[10]。為進一步研究赤脛散的藥效物質基礎，本實驗對赤脛散乙醇提取物進行了系統研究，分離鑒定了12個化合物，分別為沒食子酸(gallic acid, 1)；3,3′-二甲基鞣花酸(3,3′-di-O-methylellagic acid, 2)；3,3′,4′-三甲基鞣花酸(3,3′4′-tri-O-methylellagic acid, 3)；3,3′-二甲基鞣花酸-4′-O-β-D-葡萄糖苷(3,3′-di-O-methylellagic acid-4′-O-β-D-glucopyranoside, 4)；3-甲基鞣花酸-4′-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(3-O-methylellagic acid-4′-O-α-L-rhamnopyranoside, 5)；3,3′-二甲基鞣花酸-4′-O-(6″-沒食子酰基)-β-D-葡萄糖苷(3,3′-dimethylellagic acid-4′-O-(6″-galloyl)-β-D-glucoside,6)；短葉蘇木酚(brevifolin, 7)；短葉蘇木酚酸乙酯(ethyl brevifolin-carboxylate, 8)；短葉蘇木酚酸(brevifolin-carboxylic acid, 9)；二十四烷酸(tetracosanoic acid, 10)；β-谷甾醇(β-sitosterol, 11)；β-胡蘿卜苷(β-daucosterin, 12)。其中化合物5，7， 8， 9， 10和11為首次從該植物中分離得到。

1儀器與材料

1.1儀器ZF-20C暗箱式紫外分析儀(杭州大衛科教儀器有限公司)；HP-100型質譜儀(LC/MSD System, ESI Mode)；Brucker ACF-300, 500 型核磁共振波譜儀(瑞士Brucker公司)；X-4型雙目鏡顯微熔點測定儀(北京泰克儀器有限公司)。

1.2材料薄層色譜硅膠GF254柱色譜硅膠(青島海洋化工廠)；葡聚糖凝膠Sephadex LH-20(Pharmacia 公司)；聚酰胺(浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠)；所用試劑均為分析純(南京化學試劑廠)；實驗藥材產于福建，經中國藥科大學濮社班副教授鑒定為赤脛散，為蓼科植物華缺腰葉蓼Polygonum runcinatum Buch.-Ham. ex D. Don var. sinense Hemsl的干燥根莖。

2提取分離

取赤脛散的干燥根1.25 kg，粉碎，用體積分數為80%的乙醇浸泡24 h后回流提取4次(每次4 h)，合并提取液，回收溶劑至無醇味；依次用等體積的二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取4次，回收溶劑，得相應浸膏。二氯甲烷浸膏(5 g)過正相硅膠柱，采用二氯甲烷/甲醇洗脫，流份再過Sephadex LH-20凝膠柱，得到：化合物2(16 mg),3(10 mg),10(3 mg),11(8 mg),12(21 mg)；乙酸乙酯浸膏(20 g)使用大孔吸附樹脂D101進行粗分，用乙醇-水梯度洗脫，流份進一步通過硅膠、聚酰胺、Sephadex LH-20凝膠柱色譜及重結晶等方法，得到：化合物1(4 mg),4(23 mg),5(8 mg),6(3 mg),7(9 mg),8(12 mg),9(10 mg)。

3結構鑒定

化合物1無色透明針狀晶體(甲醇)。ESI-MSm/z: 168.8 [M-H]-,124.8[168.8-CO2]-;1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6)δ: 12.17 (1H,brs,COOH),9.13 (3H,brs,3,4,5-OH),6.92 (2H,s,H-2,6)。其數據與文獻[11]報道的沒食子酸基本一致，故鑒定該化合物為沒食子酸 (gallic acid)。

化合物2黃色針晶 (DMSO)。ESI-MSm/z: 329.0[M-H]-,313.9[329.0-CH3]-;1H-NMR (300 MHz,DMSO-d6)δ: 10.73 (2H,s,4,4′-OH),7.52 (2H,s,H-5,5′),4.04 (6H,s,3,3′-OCH3);13C-NMR (75 MHz,DMSO-d6)δ: 158.4 (2C,C-7,7′),152.2 (2C,C-4,4′),141.2 (2C,C-2,2′),140.2 (2C,C-3,3′),112.1 (2C,C-6,6′),111.6 (2C,C-1,1′),111.4 (2C,C-5,5′),60.9 (2C,3,3′-OCH3)。其數據與文獻[12]報道的3,3′-二甲基鞣花酸基本一致，故鑒定該化合物為3,3′-二甲基鞣花酸(3,3′-di-O-methylellagic acid)。

化合物3黃白色固體(甲醇)。ESI-MSm/z: 343.0 [M-H]-,327.9[343.0-CH3]-;1H-NMR (300 MHz,DMSO-d6)δ:10.77 (1H,s,4′-OH),7.64 (1H,s,H-5′),7.54 (1H,s,H-5),4.06 (3H,s,3′-OCH3)；4.05 (3H,s,3-OCH3)；4.00 (3H,s,4′-OCH3); 13C-NMR (75 MHz,DMSO-d6)δ: 158.5 (C-7′),158.3 (C-7),153.8 (C-4′),152.7 (C-4),147.6 (C-2′),140.9 (C-2),140.8 (C-3′),140.2 (C-3),113.4 (C-6′),112.5 (C-1′),111.9 (C-6),111.7 (C-5),111.2 (C-1),107.5 (C-5′),61.2 (3′-OCH3),60.9 (3-OCH3),56.7 (4′-OCH3)。其數據與文獻[13]報道的3,3′,4′-三甲基鞣花酸基本一致，故鑒定該化合物為3,3′,4′-三甲基鞣花酸(3,3′4′-tri-O-methylellagic acid)。

化合物4白色固體(甲醇)。ESI-MS m/z: 491.1 [M-H]-,476.0 [491.1-CH3]-,327.9[491，1-C6O5H11]-,312.9 [491.1-C6O5H11-CH3]-; 1H-NMR (300 MHz,DMSO-d6)δ: 10.78 (1H,s,4-OH),7.81 (1H,s,H-5′),7.51 (1H,s,H-5),5.14 (1H,brs,H-1″),4.09 (3H,s,3′-OCH3),4.05 (3H,s,3-OCH3);13C-NMR (75 MHz,DMSO-d6)δ: 158.4 (C-7′),158.3 (C-7),152.8 (C-4′),151.6 (C-4),141.81 (C-2′),141.6 (C-2),140.9 (C-3′),140.2 (C-3),114.1 (C-6 ′),112.7 (C-1′),111.9 (C-6),111.9 (C-5),111.6 (C-5′),111.1 (C-1),101.4 (C-1″),77.3 (C-3″),76.5 (C-5″),73.3 (C-2″),69.5 (C-4″),61.7 (3′-OCH3),61.0 (3-OCH3),60.6 (C-6″)。其數據與文獻[14]報道的3,3′-二甲基鞣花酸-4′-O-β-D-葡萄糖苷基本一致，故鑒定該化合物為3,3′-二甲基鞣花酸-4′-O-β-D-葡萄糖苷(3,3′-di-O-methylellagic acid-4′-O-β-D-glucopyranoside )。

化合物5白色固體(甲醇)。ESI-MSm/z: 460.9[M-H]-,447.0[460.9-CH3]-,314.8[460.9-C6O4H10]-,299.8[460.9-C6O4H10-CH3]-;1H-NMR (300 MHz,DMSO-d6)δ: 11.10 (1H,s,3′-OH),10.78 (1H,s,4-OH),7.75 (1H,s,H-5′),7.54(1H,s,H-5),4.04 (3H,s,3-OCH3),5.48 (1H,brs,H-1″),4.00 (1H,brs,H-2″),3.84 (1H,m,H-3″),3.32 (1H,m,H-4″),3.54 (1H,m,H-5″),1.13 (3H,d,J=7.5 Hz,H-6″);13C-NMR (75 MHz,DMSO-d6)δ: 158.7(C-7′),158.7(C-7),152.7(C-4),146.4 (C-4′),141.8(C-3′),140.1 (C-3),140.1(C-2′),136.2(C-2),113.0(C-6′),111.6 (C-1′),111.6 (C-5′),111.4 (C-1),111.3 (C-5),107.1 (C-6),100.1(C-1″),71.7(C-4″),70.0(C-3″),69.9 (C-2″),69.8(C-5″),60.9(3-OCH3),17.8 (C-6″)。其數據與文獻[11]報道的3-甲基鞣花酸-4′-O-α-L-吡喃鼠李糖苷基本一致，故鑒定該化合物為3-甲基鞣花酸-4′-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(3-O-methylellagic acid-4′-O-α-L-rhamnopyranoside)。

化合物6黃色粉末 (DMSO)。ESI-MSm/z: 643.0 [M-H]-;1H-NMR (300 MHz,DMSO-d6)δ: 7.54 (1H,s,H-5),7.81 (1H,s,H-5′),5.29 (1H,d,J=6.0 Hz,H-1″),3.41 (1H,brs,H-2″),3.41 (1H,brs,H-3″),3.41(1H,brs,H-4″),3.81 (1H,d,J=4.1 Hz,H-5″),4.47 (1H,d,J=10.2 Hz,H-6a″),4.28 (1H,dd,J=12.0,4.8 Hz,H-6b″),6.87 (2H,s,H-2?,6?),4.06 (6H,s,3,3′-OCH3); 13C-NMR (75 MHz,DMSO-d6)δ: 112.0 (C-1),141.7(C-2),140.2(C-3),152.8(C-4),111.6 (C-5),111.1(C-6),158.3 (C-7),112.7 (C-1′),141.0 (C-2′),141.9 (C-3′),151.2 (C-4′),112.1 (C-5′),114.3(C-6′),158.4 (C-7′),101.2(C-1″),73.3 (C-2″),76.1(C-3″),69.5(C-4″),73.9(C-5″),63.0(C-6″),119.2(C-1?),108.6(C-2?,6?),145.3 (C-3?,5?),138.4 (C-4?),165.7(C-7?),61.0 (3-OCH3),61.6(3′-OCH3)。其數據與文獻[7]報道的3,3′-二甲基鞣花酸-4′-O-(6″-沒食子?；?-β-D-葡萄糖苷基本一致，故鑒定該化合物為3,3′-二甲基鞣花酸-4′-O-(6″-沒食子酰基)-β-D-葡萄糖苷(3,3′-dimethylellagic acid-4′-O-(6″-galloyl)-β-D-glucoside)。

化合物7黃色針狀固體(甲醇)。ESI-MSm/z: 246.8[M-H]-，1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6)δ: 9.80 (3H,brs,4,5,6-OH),7.28(1H,s,H-7),3.48 (2H,m,H-10),2.50(2H,m,H-9);13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6)δ: 195.5(C-11),160.5(C-8),149.3(C-2),145.0(C-4),144.2(C-6),141.3(C-5),140.1(C-3a),115.5(C-3),113.2(C-7a),108.0(C-7),33.0(C-10),23.8(C-9)。其數據與文獻[15]報道的短葉蘇木酚基本一致，故鑒定該化合物為短葉蘇木酚(brevifolin)。

化合物8黃色粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:318.9 [M-H]-;1H-NMR(300 MHz,DMSO-d6)δ:10.14(3H,brs,4,5,6-OH),7.30(1H,s,H-7),4.40(1H,dd,J=7.7 Hz,2.0 Hz,H-9),2.98 (1H,dd,J=18.7 Hz,7.9 Hz,H-10),2.44 (1H,dd,J=18.7 Hz,2.0 Hz,H-10),4.08 (2H,q,J=8.0 Hz,H-2′),1.17 (3H,t,J=8.0 Hz,H-3′);13C-NMR (75 MHz,DMSO-d6)δ: 193.0 (C-11),160.1(C-8),149.6 ( C-6),145.8(C-2),143.6(C-4),140.2(C-5),138.5 (C-3),114.9(C-3a),113.0(C-7a),108.0(C-7),40.7 (C-9),37.0 (C-10),172.0 (C-1′),60.6 (C-2′),13.9 (C-3′)。其數據與文獻[16]報道的短葉蘇木酚酸乙酯基本一致，故鑒定該化合物為短葉蘇木酚酸乙酯(ethyl brevifolin-carboxylate)。

化合物9黃色粉末(甲醇)。ESI-MSm/z:290.9[M-H]-,246.8[M-COO]-;1H-NMR(300 MHz,DMSO-d6)δ: 10.83 (1H,s,4-OH),10.05 (2H,s,5,6-OH),7.30(1H,s,H-7),4.36 (1H,dd,J=7.6,1.6 Hz,H-9),2.99(1H,dd,J=18.7,7.9 Hz,H-10),2.43(1H,dd,J=18.7,1.6 Hz,H-10),12.47(1H,brs,9-COOH);13C-NMR (75 MHz,DMSO-d6)δ: 193.0(C-11),160.2(C-8),149.5(C-6),145.7(C-2),143.8(C-4),140.2 (C-5),139.0(C-3),115.1(C-3a),113.0(C-7a),108.0(C-7),48.6(C-9),37.4(C-10),173.4(9-COOH)。其數據與文獻[15]報道的短葉蘇木酚酸基本一致，故鑒定該化合物為短葉蘇木酚酸(brevifolin-carboxylic acid)。

化合物10白色固體(甲醇)。ESI-MSm/z:367.3[M-H]-;1H-NMR(300 MHz,DMSO-d6)δ:11.90(1H,s,H-1),2.18(2H,t,J=8.5 Hz,H-2),1.48(2H,m,H-23),1.23(40H,s,H-3～22),0.85(3H,t,J=8.5 Hz,H-24)。其數據與文獻[17]報道的二十四烷酸基本一致，故鑒定該化合物為二十四烷酸(tetracosanoic acid)。

化合物11白色片狀結晶(二氯甲烷)，Liebermann-Burchard反應陽性，Molish反應陰性，提示該化合物為三萜或甾體類。其與β-谷甾醇對照品對照，3種溶劑系統展開，10 g·L-1香草醛濃硫酸溶液105 ℃噴霧顯色，在同Rf值處有同樣紫色斑點。且其與β-谷甾醇對照品混合后熔點不下降。故鑒定該化合物為β-谷甾醇 (β-sitosterol)。

化合物12白色絮狀固體(二氯甲烷/甲醇)，無暗斑、無熒光、有碘斑， Liebermann-Burchard反應陽性，Molish反應陽性，提示化合物為三萜或甾體皂苷。其與β-胡蘿卜苷對照品對照，3種溶劑系統展開，10 g·L-1香草醛濃硫酸溶液105 ℃噴霧顯色，在同Rf值處有同樣紫色斑點。且其與β-胡蘿卜苷對照品混合后熔點不下降。故鑒定該化合物為β-胡蘿卜苷 (β-daucosterin)。

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Chemical constituents fromPolygonumruncinatumBuch.-Ham. var. sinense Hemsl

ZHOU Zhihong1, LIANG Jingyu2, YANG Lilong1, LI Shuangjie1, ZHAO Xin1, JIANG Zhiping1, HE Zhoukang1*

(1.Hu′nan Children′s Hospital, Changsha 410007, China；2.China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China)

Abstract:ObjectiveTo study the chemical constituents of Polygonum runcinatum Buch.-Ham. var. sinense Hemsl. MethodsThe chemical constituents of the extract from the roots of Polygonum runcinatum were investigated by various chromatographic techniques, all structures were established by spectroscopic methods and comparison with previously reported data. Results12 compounds were obtained and identified, including: gallic acid (1), 3,3′-di-O-methylellagic acid (2), 3,3′4′-tri-O-methylellagic acid(3), 3,3′-di-O-meth-ylellagic acid-4′-O-β-D-glucopyranoside(4), 3-O-methylellagic acid-4′-O-α-L-rham-nopyranoside(5),3,3′-dimethylellagicacid-4′-O-(6″-galloyl)-β-D-glucoside (6), bre-vifolin (7), ethyl brevifolin-carboxylate(8),brevifolin-carboxylic acid (9),tetr-acosanoic acid (10), β-sitosterol (11), and β-daucosterin (12). ConclusionCompounds 5, 7, 8, 9, 10 and 11 were obtained from this plant for the first time.

Key words:hematite；phenolic acids；chemical constituents

(收稿日期：2015-07-11)

中圖分類號：R284

文獻標志碼：A

文章編號：1004-2407(2016)03-0235-05

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.03.005

*通信作者：何周康，男，副主任藥師

作者簡介：周志紅，女，碩士研究生