豬偽狂犬病毒與豬圓環病毒2型混合感染的診治

韓銀濤　劉劍鋒　王建輝　曹愛巧　魏勇　趙輝

摘要：為了解江蘇省某豬場的感染狀況，本試驗采用復合PCR技術，并結合流行病學調查和臨床癥狀觀察、病理剖檢、病理切片等方法對發病的保育豬進行診斷，結果顯示，PCR方法檢測出豬偽狂犬病毒和豬圓環病毒處有明顯條帶。結果表明該豬場存在豬偽狂犬病毒病與豬圓環病毒病的混合感染，采用經實驗室診斷給出的綜合防治方案治療后，疫情得到控制。本次病例的診治為養豬業可能發生的豬偽狂犬病、豬圓環病毒并的混合感染提供了有效的防治方法和借鑒經驗。

關鍵詞：豬偽狂犬病毒；豬圓環病毒；混合感染；診治

豬偽狂犬病（porcine pseu-dorabies PR）是由豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的豬和其他動物共患的一種急性傳染病，斷奶前后的仔豬發病表現為呼吸困難、咳嗽、流鼻涕、有的嘔吐、腹瀉，部分病豬出現神經癥狀。發病率為20%～40%，死亡率為30%左右。由于豬偽狂犬活疫苗的廣泛使用，在2011年以前，該病在豬群中已經得到較好的控制，發病率很低。然而從2011年開始，華北、華中、華東及東北等部分地區的豬場先后發生豬偽狂犬病流行。

這次的流行的豬偽狂犬病臨床癥狀在仔豬中主要表現為高熱、食欲廢絕、呼吸困難、震顫及流涎等癥狀，后期神經癥狀更明顯，死亡率哺乳仔豬可達95%，保育豬20%～30%。上述臨床癥狀與2011年以前的豬偽狂犬病臨床癥狀相似，但發病更急，發病率和死亡率更高，且常規免疫了豬偽狂犬疫苗的豬場也發病。包括哈爾濱獸醫研究所，南京農業大學動物醫學院等多家科研機構已經證實目前流行的豬偽狂犬病毒為新變異株，且Chaoye等采用高通量測序的方法及進化樹分析表明目前中國新流行PRV毒株屬于基因Ⅱ型，而其他PRV毒株（如歐美分離株）屬于基因Ⅰ型，這一發現也解釋了為什么常規免疫Bartha疫苗（Ⅰ型）的豬場仍然大規模暴發豬偽狂犬病的原因。在針對新型偽狂犬的疫苗上市之前，如何防控新型偽狂犬病顯得尤為重要。2014年底，江蘇一常規免疫了豬偽狂犬疫苗豬場暴發新型豬偽狂犬病，現將診治情況報告如下：

1 發病情況及臨床癥狀

發病豬群來源于江蘇某豬場，1000頭基礎母豬，自2014年11月2015年1月期間，保育豬群出現了高燒（均在40℃以上）、流涎、共濟失調、食欲廢絕等臨床癥狀，后期出現了角弓反張、側臥劃水、癲癇等表現，發病率65%左右，死亡率約73%，發病豬群在轉往生長育肥舍后1月內的死亡率仍高達到4.5%。

2 剖檢變化及顯微變化

選取病死豬剖檢，其主要剖檢變化為：肝臟彌散性白色壞死點（圖1AP84），脾臟少量紅色梗死點，扁桃體有潰瘍呈現（圖1BP84），肺臟背部有少量針尖狀出血點，腦部水腫。摘取病變組織臟器，中性福爾馬林固定，制作石蠟切片，HE染色觀察顯微變化，主要病理變化有：扁桃體炎性細胞嚴重缺失（圖2AP84）；腦部呈現包括衛星現象，噬神經元現象在內的典型非化膿性腦炎組織病變（圖2BP84）；肝細胞變性，著色不均，竇狀隙增寬，充血，炎性細胞浸潤（圖2CP84）；肺臟間質增寬（圖2DP84）。

3 病原檢測

選取發病豬的肺臟，大腦皮質層，腹股溝淋巴結混合勻漿，采用天凈沙系列柱式動物DNAOUT提取試劑盒按說明書提取DNA以及柱式動物RNAOUT提取試劑盒按說明書提取RNA。所提取的DNA進行豬偽狂犬病毒、豬圓環病毒及豬鏈球菌PCR檢測。所提取RNA反轉錄后進行PRRSV和CSFV的PCR檢測。采用25μL反應體系（10×PCR Buffer：2.5μL；MgCl₂：2μL；dNTP：2μL；上下游引物：各0.2μL；TaqDNA聚合酶：0.2μL；模板DNA：1μL；ddH20：16.9μL）按表1參數進行PCR擴增。擴增完后1%瓊脂糖凝膠電泳觀察結果。

檢測結果：1%瓊脂糖凝膠電泳觀察結果顯示只有豬偽狂犬野毒PRV gE在188處和豬圓環病毒2型PCV2在處有明顯條帶（見圖4），豬藍耳病病毒，豬瘟病毒，豬鏈球菌均為陰性。

4 控制措施及療效

根據檢測結果，判斷為豬偽狂犬感染，制定以下治療方案：①淘汰弱小發病豬；②疫苗免疫：Bartha-K61gE缺失苗：保育和生長豬緊急免疫，肌肉注射1頭份/頭，間隔1個月加強免疫一次，產房現有哺乳仔豬在21日齡斷奶時肌肉注射免疫1頭份（包括已達到21日齡但還未轉群的仔豬，該豬場21日齡斷奶，28日齡轉保育）；③修改原有豬偽狂犬常規免疫程序為：經產母豬和公豬：每年普免4次，每3月1次；育肥豬：1～2日齡，滴鼻1頭份/頭，分兩個鼻孔滴鼻，56日齡肌肉注射1頭份/頭，100～110日齡肌肉注射1頭份/頭；④預防繼發感染：發病豬群拌料10%替米考星1kg/t+黃芪多糖1kg/t+磺胺間甲氧嘧啶鈉1kg/t+電解多維1kg/t；⑤消毒：酚類消毒劑每周帶豬消毒兩次，轉群或出欄后2%的氫氧化鈉對豬舍墻面、地面、過道及飼養設備等進行徹底消毒，干燥。轉歸：緊急免疫一周后，保育豬和生長豬新發病豬數量顯著下降，原發病豬死亡率顯著降低，新轉入保育的仔豬未見發病；1月后疫情全部控制。

5 討論與小結

近年來，生豬疫病均以多病原混合感染或繼發感染為主要流行形式，在復雜疫病背景下的準確快速診斷是控制生豬疫病的主要瓶頸。更深層次說，準確區分原發病原和繼發病原，主要致病病原及次要病原是精確準斷的前提。在本案例中，根據臨床癥狀及剖檢變化，鎖定了包括鏈球菌，豬偽狂犬病毒，豬呼吸與繁殖綜合征病毒，豬圓環病毒在內的幾種病原，進一步通過病原檢測確定感染病原為豬偽狂犬病毒和豬圓環病毒2型感染。但上述兩種病原哪種才是主要致病病原仍不能明確，這就需要借助病理學分析，組織學觀察顯示該病例有扁桃體壞死非化膿性腦炎，肝臟壞死，間質性肺等主要病變，符合豬偽狂犬病主要病理變化，與豬圓環病毒感染主要病理變化有一定的差異（圓環病毒2型的主要病理變化為淋巴組織及肺臟間質內淋巴細胞大量缺失，巨噬細胞浸潤），所以確定該病例是以豬偽狂犬病毒為主要致病病源，圓環病毒2型為次要病原的混合感染，在防治措施的制定中，要以防治豬偽狂犬病為主。

本案例同樣也是在常規免疫了豬偽狂犬疫苗的情況下出現的。通過剖檢變化和組織學檢測，與新型偽狂犬的病理變化相似，實驗室檢測結果為豬圓環病毒2型及株偽狂犬病毒為陽性。由于豬場常規免疫了勃林格的圓環疫苗，所以，筆者認為雖然PCR檢測出了PCV2病原，但引起該疫情的主要因素仍然是豬偽狂犬病毒。

目前流行的豬偽狂犬毒株是由于抗原變異而致傳統疫苗的保護率有所下降或毒力增強兼抗原變異，致使常規免疫豬偽狂犬活疫苗的豬場依然易發偽狂犬病。研究顯示雖然使用現有疫苗不能完全保護流行毒株的感染，但是增加疫苗免疫次數（每年普免4次）與劑量（為3頭份），仍然可以使豬只獲得免疫保護，不出現偽狂犬病臨床癥狀。解偉濤等也研究了不同免疫策略對豬偽狂犬病防控效果的差異，發現傳統疫苗增加免疫劑量和免疫次數，仍然可以有效防控新流行的PRV野毒。在本案例中，已明確豬偽狂犬病毒為主要致病病原，所以針對豬偽狂犬制定的新免疫程序，達到了良好的免疫效果，很快控制了疫情，進一步證實了現有疫苗對新型豬偽狂犬病毒的免疫保護力。由于圓環病毒確定為次要病原，且豬場已經常規免疫了勃林格的圓環苗，所以未針對圓環病毒調整免疫方案，但由于上述兩種病原均為免疫抑制性疾病，容易造成其他細菌的繼發感染，故針對該階段豬易感染的副豬嗜血桿菌，鏈球菌，放線桿菌，巴氏桿菌等制定了抗生素給藥方案，達到了良好的預防效果。

總結：在豬偽狂犬病毒為主要致病病原的混合感染中，偽狂犬疫苗免疫尤為重要，然而疫苗免疫并不能清除病毒，豬一旦感染偽狂犬病病毒便終生帶毒。所以，對豬場豬偽狂犬的監測同樣重要。建議，每季度檢測1次免疫抗體，每半年檢測1次PRV gE抗體。采血檢查的比例根據群體大小而定，一般大于300頭基礎母豬的豬場不少于10%，低于300頭母豬的豬場絕對數量不低于30份。檢測出抗體水平合格，gEELISA鑒別診斷為陰性的定為健康豬群；抗體水平不合格，gE-ELISA鑒別診斷為陰性的豬只，應立即補注疫苗；gE-EusA鑒別診斷為陽性者及隱性感染帶毒者，一律淘汰處理，不能當做種豬飼養。

（編輯：狄慧）