降鈣素原乳膠增強免疫比濁法與免疫熒光法的相關性

楊澤權

(云南省曲靖市馬龍縣人民醫院檢驗科，云南曲靖 655199)

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降鈣素原乳膠增強免疫比濁法與免疫熒光法的相關性

楊澤權

(云南省曲靖市馬龍縣人民醫院檢驗科，云南曲靖 655199)

摘要:目的探討乳膠增強免疫比濁法與免疫熒光法定量檢測降鈣素原(PCT)的分析性能。方法乳膠增強免疫比濁法采用美國貝克曼庫爾特公司AU5800全自動生化分析儀，免疫熒光法采用mini VIDAS全自動熒光免疫分析儀，檢測相應配套高值、低值質控品，計算日內及日間的精密度，檢測相應試劑非同批號定值標準品的偏倚程度，對2組檢測方法的相關性進行分析評價。結果乳膠增強免疫比濁法檢測PCT高值質控品日內精密度及日間精密度分別為2.89%、3.84%，低值質控品日內精密度及日間精密度分別為1.81%、3.77%；免疫熒光法檢測PCT高值質控品日內精密度及日間精密度分別為2.42 %、3.83%，低值質控品分別為2.03%、3.43%；乳膠增強免疫比濁法檢測PCT高值定值標準品與低值定值標準品的偏倚分別為3.30%、-2.49%，免疫熒光法檢測PCT高值定值標準品與低值定值標準品的偏倚分別為2.88%、3.63%；乳膠增強免疫比濁法在檢測范圍內線性良好(Y=1.028 1X-0.289 4，R2=0.994 7)，免疫熒光法在檢測范圍內線性良好(Y=1.079 8X+0.179 4，R2=0.992 8)，2種方法相關性良好(Y=0.357 2X+0.284 5，R2=0.994 2)。結論乳膠增強免疫比濁法檢測PCT性能良好，靈敏度高，操作簡便，且由于其成本低，更值得臨床推廣應用。

關鍵詞:降鈣素原；乳膠增強免疫比濁法；免疫熒光法；相關性

降鈣素原(PCT)作為檢測感染性疾病的一項重要炎性標志物，PCT與其他炎性指標相比較，具有較高的特異度和靈敏度。因此，實現PCT的快速檢測具有重要意義。本研究按照美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)制定的EP15-A2和EP9-A2文件要求[1]，對本院所使用的兩個不同PCT檢測系統(乳膠增強免疫比濁法與免疫熒光法)的相關性進行評價，以期為合理選擇PCT檢測系統提供依據。

1材料與方法

1.1標本來源選擇2014年12月至2015年2月本院門診、急診及住院患者的血清標本300份，均無黃疸、脂血及溶血。其中來自男性患者176份，女性患者124份，患者年齡76～82歲，平均(51.75±17.88)歲；所選研究對象中包括輕、中、重度炎癥患者及一定數量的健康人。

1.2方法

1.2.1檢測方法乳膠增強免疫比濁法檢測選用寧波美康生物科技股份有限公司提供的PCT檢測試劑盒(批號20040105)，采用美國貝克曼庫爾特公司AU5800全自動生化分析儀；免疫熒光法選用法國生物梅里埃股份有限公司提供的mini VIDAS全自動熒光分析儀，以及配套試劑、定標液；質控品(批號173339-03)來自德國羅氏診斷有限公司。標準品(批號083113)來自安徽大千生物工程有限公司。嚴格按照2種檢測方法的操作手冊進行相關操作，并準確記錄實驗結果。

1.2.2日內與日間精密度檢測日內精密度的檢測：2 h內對高值、低值質控品連續檢測20次；日間精密度：連續20 d，每天一次檢測高值、低值質控品；數據處理，計算平均值、標準偏差及變異系數(CV)[2]。

1.2.3準確度檢測2種檢測方法對不同批號的標準品進行檢測，將測得的結果導入線性范圍得出的公式中，求出檢測值，比較標準品定值與檢測值之間的偏倚。

1.2.4線性范圍檢測將高濃度和低濃度標本按照等比關系配制成具有梯度濃度的血清，2種檢測方法每個標本平行檢測3次，記錄結果，理論值為X，求得均值為Y。

1.2.5相關性分析選取檢測結果都在線性范圍的標準，以mini VIDAS檢測結果為Y，以AU5800檢測結果為X，進行相關性分析[3]。

1.3統計學處理采用SPSS17.0統計軟件與Excel2007軟件進行數據處理及統計學分析，對相關數據進行描述統計；采用Bland-Altman法進行偏倚計算；采用Pearson法進行相關性評價。

2結果

2.12種檢測方法日內和日間精密度乳膠增強免疫比濁法檢測PCT高值質控品日內精密度及日間精密度分別為2.89%、3.84%，低值質控品分別為1.81%、3.77%；免疫熒光法檢測PCT高值質控品日內精密度及日間精密度分別為2.42%、3.83%，低值質控品分別為2.03%、3.43%，見表1～2。

2.22種檢測方法準確度檢測乳膠增強免疫比濁法檢測PCT高值定值標準品與低值定值標準品的偏倚分別為3.30%、-2.49%，免疫熒光法檢測PCT高值定值標準品與低值定值標準品的偏倚分別為2.88%、3.63%，均小于±10%，2種檢測方法均在臨床檢驗科可接受范圍，見表3。

表1　　乳膠增強免疫比濁法日內精密度

表2　　免疫熒光法日內精密度與日間精密度(n=20)

表3　　2種檢測方法準確度的檢測

2.3相關分析7份梯度濃度血清的理論濃度由低到高依次為：0.052、0.64、3.02、15.02、29.85、44.82、60.24 ng/mL，生理鹽水為0 ng/L，標準曲線選用這8個不同濃度的標本，乳膠增強免疫比濁法得到線性回歸方程為Y=1.028 1X-0.289 4，R2=0.994 7，線性范圍0.05～60.00 ng/mL；免疫熒光法檢測的線性回歸方程為Y=1.079 8X+0.179 4，R2=0.992 8，線性范圍0.05～200.00 ng/mL。2種檢測方法相關良好(Y=0.357 2X+0.284 5，R2=0.994 2)。

3討論

PCT是一種無激素活性的糖蛋白，含有116個氨基酸的降鈣素前體，臨床上常被用來作為鑒別感染性疾病的標志物。PCT的檢測有助于診斷敗血癥、菌血癥及血行感染，評價治療效果及預后，為抗菌藥物的用藥指導提供了重要的參考[4]。臨床上常用PCT的檢測方法有放射免疫法、雙抗夾心酶聯免疫吸附試驗、膠體金法、電化學發光法等。

乳膠增強免疫比濁法中，聚苯乙烯顆粒表面修飾有抗體，當檢測樣品中有抗原存在時，基于免疫沉淀反應原理形成不溶性免疫復合物。免疫熒光法是基于熒光標簽修飾的單克隆抗體與樣品中存在的抗原結合形成復合物，待檢測的抗原量越多，熒光信號上升[5]。本研究結果顯示，2種檢測方法均有較好的精密度和準確度，而且2種檢測系統的檢測結果具有良好的相關性(Y=0.357 2X+0.284 5，R2=0.994 2)。熒光免疫法雖然具有靈敏度高，特異度強的特點，但成本較高，限制了臨床使用。乳膠增強免疫比濁法操作簡單，反應過程快速，可使用生化分析儀進行檢測，成本較低，能較好地滿足臨床需求。

綜上所述，乳膠增強免疫比濁法和免疫熒光法檢測PCT均有較好的精密度和準確度，相關性良好。然而，乳膠增強免疫比濁法成本低，性能良好，靈敏度高，操作簡便，更適合臨床推廣應用。

參考文獻

[1]戴婉茹，周歡，林燕輝，等.AU5800全自動生化分析儀檢測降鈣素原的方法學評價[J].醫學信息，2014,27(4)：176-177.

[2]戴婉茹，周歡，林燕輝，等.免疫投射比濁法在AU5800全自動生化分析儀檢測降鈣素原的方法學評價[J].檢驗醫學與臨床，2015,12(10)：1447-1448.

[3]方亮，周蕓，唐偉，等.乳膠增強免疫比濁法檢測降鈣素原方法學評價及臨床意義[J].國際檢驗醫學雜志，2014,35(24)：3401-3403.

[4]耿伏生.國產熒光免疫分析儀檢測降鈣素原在急診科的應用[J].醫藥論壇雜志，2014,35(8)：158-159.

[5]楊文杰，柯振符，黎舒，等.乳膠增強免疫比濁法檢測降鈣素原的方法評價[J].廣東醫學院學報，2015,33(1)：88-91.

(收稿日期：2015-10-25)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.03.061

文獻標識碼：B

文章編號：1673-4130(2016)03-0416-02