Bcl-2和Bcl-6在胃癌患者中的表達(dá)及意義

何興楨，鄒兵，李曦，楊安

（1.安徽醫(yī)科大學(xué)北京大學(xué)深圳醫(yī)院臨床學(xué)院，廣東 深圳 518036；2.北京大學(xué)深圳醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東 深圳 518036）

Bcl-2和Bcl-6在胃癌患者中的表達(dá)及意義

何興楨1，鄒兵2，李曦2，楊安2

（1.安徽醫(yī)科大學(xué)北京大學(xué)深圳醫(yī)院臨床學(xué)院，廣東 深圳 518036；2.北京大學(xué)深圳醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東 深圳 518036）

目的 觀察B淋巴細(xì)胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴細(xì)胞瘤-6(Bcl-6)在胃癌患者中的表達(dá)情況，并探討其臨床意義。方法選取2013年1月至2014年1月期間在北京大學(xué)深圳醫(yī)院就診并診斷為胃癌的患者30例(胃癌組)及正常對(duì)照者30例，采用免疫組化的方法檢測(cè)并比較兩組受檢者Bcl-2和Bcl-6的表達(dá)情況。結(jié)果胃癌組患者Bcl-2表達(dá)為(0.588±0.210)，明顯高于正常組的(0.397±0.171)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；胃癌組患者Bcl-6表達(dá)為(0.255±0.083)，明顯低于正常組的(0.334±0.112)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論Bcl-2和Bcl-6的表達(dá)水平與胃癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，為胃癌的診斷、治療提供新的靶點(diǎn)。

胃癌；B淋巴細(xì)胞瘤-2；B淋巴細(xì)胞瘤-6；臨床意義

胃癌是最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤[1]，我國(guó)作為胃癌的高發(fā)國(guó)家，每年新發(fā)胃癌病例數(shù)約占全球的40%，發(fā)病率以及死亡率均高于世界平均水平的兩倍。有數(shù)據(jù)顯示，在中國(guó)至2005年胃癌已經(jīng)成為發(fā)病率和死亡率居首位的惡性腫瘤，顯然也成為嚴(yán)重威脅人民身體健康的疾病[2-3]。胃癌的發(fā)病機(jī)制未完全闡明，已知與感染、環(huán)境、飲食、遺傳等因素有關(guān)[4]。近年來(lái)，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與細(xì)胞凋亡的關(guān)系越來(lái)越受到關(guān)注。腫瘤最為明顯的特點(diǎn)是細(xì)胞增殖和凋亡的平衡被打破，表現(xiàn)為細(xì)胞正常的凋亡程序被抑制，而增殖能力被增強(qiáng)[5]。已有研究表明胃癌的發(fā)生、發(fā)展與細(xì)胞凋亡調(diào)控機(jī)制異常密切相關(guān)[6]。Bcl-2(B-cell lymphoma-2)和Bcl-6(B-cell lymphoma-6)都屬于B細(xì)胞淋巴瘤(B cell lymphoma，Bcl)家族基因，是凋亡相關(guān)的基因。本研究采用免疫組織化學(xué)法對(duì)胃癌患者及健康對(duì)照組Bcl-2和Bcl-6的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)后對(duì)比分析，進(jìn)一步探討胃癌的發(fā)生機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月至2014年12年在北京大學(xué)深圳醫(yī)院行內(nèi)鏡檢查，內(nèi)鏡下診斷為胃癌并且最終經(jīng)過(guò)病理診斷明確的30例患者作為胃癌組，以30例內(nèi)鏡下表現(xiàn)正常，且沒(méi)有糜爛或潰瘍，或萎縮等其他表現(xiàn)者(活檢最終符合病理診斷)作為對(duì)照組。胃癌組患者的平均年齡(47.7±12.5)歲，對(duì)照組平均年齡(38.6±9.6)歲。在選取研究對(duì)象時(shí)，使胃癌組和對(duì)照組男女比例1：1。提取患者血清5 mL備檢測(cè)，本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)和患者的知情同意。

1.2 標(biāo)本的采集和處理 所有標(biāo)本來(lái)自于胃鏡活檢的取得的病理組織標(biāo)本，石蠟進(jìn)行包埋。

1.3 Bcl-2和Bcl-6的表達(dá)及其吸光度檢測(cè) 采用常規(guī)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Bcl-2和Bcl-6表達(dá)，并測(cè)定吸光度值。具體如下：石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟，10 min× 2遍；100%、95%、85%、75%、50%梯度酒精水化5 min；PBS沖洗5 min×3遍；3%H2O2液室溫下封閉10 min；高溫抗原修復(fù)；磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗5 min；置入免疫組化封閉液山羊血清室溫下孵育30 min；加入一抗，4℃過(guò)夜。PBS沖洗5 min×3遍；加入二抗室溫下孵育30 min；PBS沖洗5 min×3遍，DBA顯色，PBS沖洗；蘇木素復(fù)染；脫水、透明、封片；每張切片在高倍視野下光鏡隨機(jī)觀察3個(gè)部位，并測(cè)定該部位吸光度值，取平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同胃組織標(biāo)本中Bcl-2和Bcl-6的表達(dá)水平比較 免疫組化結(jié)果提示胃癌組織中Bcl-2表達(dá)明顯高于正常組織；胃癌組織(d)中Bcl-6表達(dá)明顯低于正常組織，見(jiàn)圖1。

圖1 不同胃組織標(biāo)本中Bcl-2和Bcl-6的表達(dá)水平(×100)

2.2 不同胃組織標(biāo)本中Bcl-2和Bcl-6表達(dá)的吸光度比較 本研究利用吸光度間接反應(yīng)Bcl-2和Bcl-6的表達(dá)水平。Bcl-2：胃癌組織吸光度(0.588± 0.210)明顯高于正常組(0.397±0.171)(t=3.049，P= 0.003)，提示胃癌組織中Bcl-2表達(dá)明顯高于正常組織，見(jiàn)圖2；Bcl-6：胃癌組織吸光度(0.255±0.083)明顯低于正常組織(0.334±0.112)(t=2.430，P=0.016)，提示胃癌組織中Bcl-6表達(dá)明顯低于正常組織，見(jiàn)圖2。

圖2 不同胃組織標(biāo)本中Bcl-2和Bcl-6表達(dá)的吸光度

3 討論

細(xì)胞凋亡是由基因調(diào)控的細(xì)胞自主性死亡過(guò)程，具有維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的作用。已有研究表明細(xì)胞凋亡和細(xì)胞增殖在腫瘤的形成過(guò)程中發(fā)揮重要作用[7]。

Bcl-2作為第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的抑制細(xì)胞凋亡的基因，該基因及其表達(dá)的蛋白均可增加細(xì)胞抵抗力，抑制組織細(xì)胞凋亡，延長(zhǎng)細(xì)胞壽命[8]。已有研究發(fā)現(xiàn)Bcl-2蛋白在口腔鱗狀細(xì)胞癌、胰腺癌、乳腺癌等腫瘤細(xì)胞異常高表達(dá)[9-11]。同時(shí)，在小鼠前列腺癌模型中發(fā)現(xiàn)，抑制Bcl-2表達(dá)可使腫瘤縮小，Bcl-2能促進(jìn)腫瘤發(fā)生[12]。國(guó)內(nèi)外研究表明胃癌形成與Bcl-2高表達(dá)相關(guān)[13-14]。胃癌患者血清Bcl-2表達(dá)明顯高于正常組，可能與Bcl-2在胃癌細(xì)胞中被激活，參與抑制腫瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)胃癌組患者Bcl-2表達(dá)明顯高于正常組，與國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果相一致，表明細(xì)胞凋亡機(jī)制參與腫瘤的發(fā)生。研究Bcl-2促進(jìn)胃癌的發(fā)病機(jī)制有利于為胃癌的早期診斷提供新方向；下調(diào)Bcl-2的表達(dá)，縮小腫瘤，有望成為胃癌治療的新手段。

Bcl-6是Ye等[15]從染色體異常的淋巴瘤細(xì)胞中克隆得到的。其編碼的鋅指蛋白作為一種轉(zhuǎn)錄抑制因子，在細(xì)胞分化、細(xì)胞周期發(fā)育中具有重要的功能。已有研究發(fā)現(xiàn)其在惡性淋巴瘤中高表達(dá)[16]，具有導(dǎo)致淋巴瘤的作用[17]。但是由于胃組織與淋巴組織功能、結(jié)構(gòu)、機(jī)制等存在差異，因此Bcl-6在胃癌的發(fā)生過(guò)程中是否具有作用需要進(jìn)一步研究證實(shí)。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)法測(cè)量并比較胃癌患者組和正常對(duì)照組Bcl-6的表達(dá)情況。發(fā)現(xiàn)胃癌組患者Bcl-6表達(dá)明顯低于正常組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Toney等[18]的研究結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)一致。Hirata等[19]發(fā)現(xiàn)Bcl-6在體細(xì)胞惡性腫瘤中表達(dá)，且與組織分型相關(guān)，并且首次報(bào)道了Bcl-6在未分化的胃癌組織中低表達(dá)。這些結(jié)果表明Bcl-6是胃癌腫瘤發(fā)展過(guò)程中的重要調(diào)節(jié)因素。具體機(jī)制尚未闡明，考慮與Bcl-6抑制炎癥趨化因子有關(guān)[18]，而炎癥因子具有抑制機(jī)體免疫、促進(jìn)胃癌細(xì)胞進(jìn)展的作用。但是也有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)Bcl-6在一些實(shí)體腫瘤包括卵巢癌、膽囊癌、腸癌[20-22]中異常高表達(dá)，與Bcl-6在胃癌中的表達(dá)相反，表明Bcl-6在胃癌中的作用機(jī)制與其他腫瘤存在差異，有待進(jìn)一步研究證實(shí)。由于本實(shí)驗(yàn)是對(duì)胃癌組織Bcl-6表達(dá)的初步探討，收集的標(biāo)本數(shù)量有限。同時(shí)本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化法測(cè)定Bcl-6蛋白表達(dá)，與Western-blot方法相比存在局限性。后期可以加大樣本量同時(shí)將胃癌標(biāo)本根據(jù)病理類(lèi)型、分化程度、分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等條件分組，分別測(cè)量并比較Bcl-6的表達(dá)情況，進(jìn)一步分析Bcl-6與胃癌發(fā)病的關(guān)系。

總之，Bcl-2、Bcl-6在胃癌患者組織中差異性表達(dá)，可能參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。進(jìn)一步加深了解Bcl-2、Bcl-6凋亡相關(guān)蛋白與胃癌的關(guān)系，可為胃癌的診斷、治療、判斷預(yù)后以及監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)提供新的方向。

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Expression and significance of Bcl-2 and Bcl-6 in patients with gastric cancer.

HE Xing-zhen1,ZOU Bing2,LI Xi2, YANG An2.1.Peking University Shenzhen Hospital/Clinical College of Anhui Medical University,Shenzhen 518036, Guangdong,CHINA;2.Department of Gastroenterology,Peking University Shenzhen Hospital,Shenzhen 518036, Guangdong,CHINA

ObjectiveTo observe the expression of B-cell lymphoma-2(Bcl-2)and B-cell lymphoma-6 (Bcl-6)in patients with gastric cancer,and to discuss its clinical significance.MethodsThirty patients diagnosed as gastric cancer(gastric cancer group)and 30 normal controls(normal group)in Peking University Shenzhen Hospital from January 2013 and January 2014 were selected.The expression levels of Bcl-2 and Bcl-6 were detected by immunohistochemical SP method and compared between the two groups.ResultsThe expression of Bcl-2(0.588±0.210)in gastric cancer group was significantly higher than that in normal group(0.397±0.171),and the difference was statistically significant(P＜0.05).The expression of Bcl-6(0.255±0.083)in gastric cancer group was significantly lower than that in normal group(0.334±0.112),and the difference was statistically significant(P＜0.05).ConclusionThe expression of Bcl-2 and Bcl-6 may be closely related to the occurrence and development of gastric cancer,which provides a new target for the diagnosis and treatment of gastric cancer.

Gastric cancer;B-cell lymphoma-2(Bcl-2);B-cell lymphoma-6(Bcl-6);Clinical significance

R735.2

A

1003—6350（2016）19—3112—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.19.005

2016-04-23)

廣東省深圳市衛(wèi)生計(jì)生系統(tǒng)科研項(xiàng)目(編號(hào)：201507019)

鄒兵。E-mail：zb0909@aliyun.com