雙歧三聯活菌膠囊治療潰瘍性結腸炎的療效及其對CD4 +CD25 +調節性T細胞和IL-10 的影響

賴潔瑩，郝麗萍，宋思宇

(珠海市第二人民醫院消化內科，廣東珠海519000)

雙歧三聯活菌膠囊治療潰瘍性結腸炎的療效及其對CD4 +CD25 +調節性T細胞和IL-10 的影響

賴潔瑩，郝麗萍，宋思宇

(珠海市第二人民醫院消化內科，廣東珠海519000)

目的探討雙歧三聯活菌膠囊輔助治療潰瘍性結腸炎(UC)的臨床療效及其對CD4+CD25+調節性T細胞和IL-10的影響。方法選取潰瘍性結腸炎患者87例，采用隨機數表法分為觀察組45例和對照組42例。對照組給予抗生素及5-氨基水楊酸制劑奧沙拉嗪鈉膠囊進行常規對癥治療，觀察組在常規對癥治療基礎上加用雙歧三聯活菌膠囊治療。比較兩組患者治療前后的結腸炎癥評分、CD4+CD25+調節性T細胞和IL-10變化及臨床療效。結果治療后觀察組的總有效率為86.67%，明顯高于對照組的69.05%，差異有統計學意義(P＜0.05)；治療前兩組結腸癥狀評分比較差異無統計學意義(P＞0.05)，治療后觀察組結腸癥狀評分明顯低于對照組，差異有顯著統計學意義(P＜0.01)；治療前兩組CD4+CD25+調節T細胞占CD4+T細胞比例及IL-10水平值比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，治療后觀察組CD4+CD25+調節T細胞占CD4+T細胞比例及IL-10水平均明顯高于對照組，差異均有顯著統計學意義(P＜0.01)。結論歧乳桿菌三聯活菌膠囊輔助治療UC患者療效確切，且CD4+CD25+調節性T細胞比例及IL-10水平均有明顯升高，在改善患者腸道內微生物平衡中具有顯著作用，值得推廣應用。

雙歧三聯活菌膠囊；潰瘍性結腸炎；調節性T細胞；影響

潰瘍性結腸炎(Ulcerative colitis，UC)屬炎性腸病之一，病變局限于大腸黏膜及黏膜下層，乙狀結腸、直腸是病發主要部位。該病病程漫長，且復發率搞，不易根治[1]。調查顯示，近年來UC發病率逐年上升且多發于20～30歲人群[2]。UC患者腸道中存在菌群失調，臨床治療的關鍵在于為機體正常菌群提供良好的內微生態環境，阻止致病病菌、病毒侵入，進而逐步減輕或改善患者腸道炎癥[3]。目前，微生態制劑在潰瘍性結腸炎的治療作用及其機制已倍受醫療界廣泛關注和重視。臨床研究[4]指出，雙歧三聯活菌膠囊由長型雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、糞腸球菌3種細菌組成，在改善UC患者腸道內微生物平衡具有顯著的效果。基于此，近年來我院在UC患者治療中應用雙歧三聯活菌膠囊進行治療，并取得了顯著的療效，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2012年6月至2014年10月期間我院收治的87例UC患者作為研究對象。所有患者均結合內鏡、病理組織學檢查及臨床表現確診，且符合《中國炎癥性腸病診斷治療規范的共識意見》[5]中潰瘍性結腸炎的診斷標準；同時排除感染或其他非感染性結腸炎等患者。87例UC患者中男性41例，女性46例；年齡21～65歲，平均(42.84±3.21)歲；病程0.4～8.9年，平均(1.43±0.83)年；根據D'Haens等[6]改良的嚴重程度分型標準，對UC患者病情進行評估，其中輕度28例，重度59例。在患者及其家屬知情同意并簽署《知情同意書》下，采用隨機數表法將所有患者隨機分為觀察組45例和對照組42例。觀察組中男性18例，女性27例；年齡21～64歲，平均(43.09±2.78)歲；病程0.4～8.6年，平均(1.45±0.79)年；病情輕度13例，重度32例。對照組中男性23例，女性19例；年齡22～65歲，平均(42.28±2.63)歲；病程0.5～8.9年，平均(1.43±0.66)年；病情輕度15例，重度27例。兩組患者的性別、年齡、病程、病情程度等一般資料比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法(1)對照組：給予常規對癥治療，選用抗生素及5-氨基水楊酸制劑奧沙拉嗪鈉膠囊(浙江眾益藥業有限公司，批準文號：國藥準字H20010061，生產批號：20120218，規格：0.25 g)溫水口服，1.0 g/次，每天一次。連續治療6個月。(2)觀察組：在常規對癥治療基礎上，加用微生物制劑雙歧乳桿菌三聯活菌膠囊(晉城海斯制藥有限公司，批準文號：國藥準字S19993065，生產批號：20120919，規格：210mg)溫水口服，2.0 g/次，2次/d。連續治療6個月。

1.3 觀察指標

1.3.1 結腸炎癥評分治療前后均在患者病變處取活檢6塊，由兩位經驗豐富的病理學專家讀片，取3個高倍鏡視野觀察指標的平均值作為最終結果：0級為正常，計0分；1級表現為上皮及黏膜下出現輕微的炎性滲出、水腫、片狀黏膜糜爛及毛細血管擴張，計1分；當標本1級特征出現超過50%為2級，計2分；3級表現為潰瘍深達黏膜肌層或黏膜下層并伴以中性粒細胞為主的滲出，計3分；當標本3級特征超過50%為4級，計4分。

1.3.2 外周血CD4+CD25+調節性T細胞的檢測采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞(Peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，離心后觀察組PBMC加入2 μl抗人CD4-FITC和CD25-APC，對照組加入APC標記的鼠抗人IgG-1和FITC標記的鼠抗人IgG-1各20 μl；避光處孵育30 min；去除未結合的抗體，將加入破膜固定劑孵育1 h，用磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗2次，后用200 μl PBS溶液重懸，利用流式細胞測定儀測定PBMC中CD4+CD25+調節性T細胞占CD4+T細胞的比例。

1.3.3 血清IL-10的檢測所有患者取清晨空腹肘靜脈血5 ml，置于-20℃冰箱內待測，采用ELISA法測量血清IL-10含量，(試劑盒購于美國BD公司；IL-10單克隆抗體購于美國Santacruz公司)，本研究所有操作嚴格按照儀器說明書或試劑盒說明書進行。

1.4 療效判斷標準根據文獻[7]并結合治療后患者臨床癥狀改善及內鏡檢查情況擬定：(1)治愈：患者臨床癥狀完全消失，內鏡檢查結果顯示腸黏膜恢復正常；(2)有效：患者臨床癥狀基本消失，胃鏡檢查結果顯示部分腸黏膜基本恢復正常；(3)無效：患者臨床癥狀及內鏡檢查均無改善甚至有加重現象。總有效率=治愈率+有效率。

1.5 統計學方法應用SPSS19.0統計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差(±s)表示，采用t檢驗；計數資料用百分比表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 臨床療效比較經治療，兩組患者病情均有明顯好轉，觀察組總有效率為86.67%，明顯高于對照組的69.05%，差異具有統計學意義(χ2=3.951，P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患者的臨床療效比較[例(%)]

2.2 治療前后結腸炎癥評分比較治療前兩組患者的結腸炎癥評分比較差異無統計學意義(P＞0.05)。治療后，兩組結腸炎癥癥狀均有明顯改善(P＜0.05)，且觀察組的改善明顯優于對照組，差異有顯著統計學意義(P＜0.01)，見表2。

表2 治療前后兩組結腸炎癥評分比較（±s，分）

表2 治療前后兩組結腸炎癥評分比較（±s，分）

組別治療前治療后t值P值觀察組(n=45)對照組(n=42) t值P值2.76±0.39 2.65±0.42 1.267＞0.05 0.79±0.21 2.34±0.41 22.411＜0.01 29.035 3.480＜0.01＜0.05

2.3 治療前后血清CD4+CD25+調節性T細胞和IL-10值比較治療前兩組患者的血清CD4+CD25+調節性T細胞占CD4+T細胞的百分比及IL-10水平比較差異均無統計學意義(P＞0.05)；治療后兩組患者的上述指標均有明顯升高(P＜0.05)，且觀察組的升高更加顯著與對照組比較差異均有顯著統計學意義(P＜0.01)，見表3。

表3 治療前后兩組患者的血清CD4+CD25+調節性T細胞和IL-10值比較(±s)

表3 治療前后兩組患者的血清CD4+CD25+調節性T細胞和IL-10值比較(±s)

注：與治療前比較，aP＜0.01，bP＜0.05。

組別CD4+CD25+調節性T細胞比例(%) IL-10(ng/L)治療前治療后治療前治療后觀察組(n=45)對照組(n=42) t值P值5.54±0.86 5.73±0.91 1.001＞0.05 9.63±0.92a6.88±0.65a15.998＜0.01 15.34±1.09 14.99±1.78 1.114＞0.05 18.73±1.47a16.01±1.56b8.383＜0.01

3 討論

UC屬慢性炎性腸病，發病機制至今尚未明確，臨床主要表現為該病患者主要伴有腹瀉、腹痛及黏液濃血便等臨床癥狀，且具有病程長、易反復等特征，長期影響患者健康及生活質量。研究發現UC病發可能與感染、免疫機制、遺傳及環境因素等多種因素密切相關，尤其是腸道黏膜免疫系統異常[8]。研究顯示，因UC病變累及結、直腸黏膜及黏膜下層，久治不愈易引發腸穿孔、炎性息肉及癌變發生[9]。

奧沙拉嗪鈉膠囊由兩分子的5-ASA偶合而成，是新型5-ASA衍生物，可抑制引起炎癥的前列腺素的合成及增強細胞膜通透性，在改善UC患者病情具有一定效果。但一旦停止服用患者病情則易反復，而長期服藥情況下易增強患者耐藥性、并發軟便及腹瀉等并發癥，療效不穩定。由于UC患者存在免疫異常現象，而微生態制劑對機體的免疫功能有一定的調節作用，因此微生態制劑對UC的療效可能與患者免疫系統功能相關[10]。既往報道，CD4+CD25+調節性T細胞具有免疫抑制性和免疫無能性兩大功能特征，其機制是通過抑制自身T細胞的免疫反應，降低T細胞活性，促進抑制性細胞因子的活化，如IL-10、TGF-β1等，在自身免疫疾病的發生中起到重要的作用[11]。目前，微生態制劑在潰瘍性結腸炎的治療作用及其機制已倍受醫療界廣泛關注和重視。雙歧三聯活菌膠囊是由長型雙歧桿菌、保加利亞乳桿菌及嗜熱鏈球菌猿3種細菌組成，能夠促進患者腸道正常菌群的繁殖，有利于維持腸內微生態平衡，阻止致病菌及病毒入侵，進而緩解腸道炎癥反應。

本研究中，觀察組即在常規對癥治療基礎上加用雙歧三聯活菌膠囊進行輔助治療，從臨床療效來看，該組患者總有效率高達86.67%，明顯高于對照組(69.05%)(P＜0.05)。提示：雙歧三聯活菌膠囊治療UC療效確切。同時，治療后該組患者結腸炎癥評分較治療前明顯降低(P＜0.05)，且顯著低于對照組(P＜0.01)。提示：雙歧三聯活菌膠囊能循序漸進緩解UC患者臨床癥狀，進一步證實了其改善UC患者病情中效果。此外，治療后觀察組CD4+CD25+調節性T細胞的比例及IL-10水平均出現明顯升高(P＜0.05)，且顯著高于對照組(P＜0.05)。表明：微生物制劑雙歧乳桿菌三聯活菌膠囊可改善UC患者腸道菌群，提高CD4+CD25+調節性T細胞的比例，恢復UC患者IL-10水平，控制腸道炎癥反應，對維持機體正常的免疫機制具有重要的作用。分析原因：CD4+CD25+調節性T細胞在機體內的變化與腸道菌群存在相關[12]，主要表現為以下兩方面：其一，該細胞的產生可能與腸道長時間處于正常菌群下外源性抗原誘導相關；其二，腸道菌群可抑制樹突狀細胞的成熟，促進CD4+CD25+調節性T細胞的增殖與發育，對正常菌群產生免疫耐受。因此，機體內CD4+CD25+調節性T細胞比例變化課提示機體內菌群出現失調[13]。IL-10是具有抑制巨噬細胞、單核細胞作用的生物活性物質，具有控制腸道炎癥的作用，微生態制劑在治療UC患者腸道黏膜免疫紊亂過程中，機體IL-10的分泌增加，使血清及黏膜中的IL-10升高，進一步控制腸道炎癥，這可能是微生態制劑在治療UC的作用機制之一[14]。若血清CD4+CD25+調節性T細胞的比例及IL-10水平均有升高，則表明機體內腸道菌群協調，腸道炎癥控制效果也較佳[15]。觀察組用藥后CD4+CD25+調節性T細胞的比例及IL-10水平均有升高，腸道嚴重改善及控制效果明顯較佳。

綜上所述，微生物制劑雙歧乳桿菌三聯活菌膠囊對UC具有一定輔助治療效果，其作用機制可能與能夠改善腸道菌群，抑制腸道有害菌及條件致病菌生長有關。此外，CD4+CD25+調節性T細胞及IL-10參與UC的發生發展。

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Clinical efficacy of bifidobacteria triple viable capsule and its effects on the levels of CD4+CD25+regulatory Tcells and IL-10 in patients with ulcerative colitis.

LAI Jie-ying,HAO Li-ping,SONG Si-yu.Department of Gastroenterology,the Second Municipal People's Hospital,Zhuhai 519000,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the clinical efficacy of bifidobacteria triple viable capsule and its effects on the levels of CD4+CD25+regulatory T cells and IL-10 in patients with ulcerative colitis(UC).MethodsEighty-seven patients with UC were randomly divided into observation group(45 cases)and control group(42 cases).The control group applied antibiotics and 5-amino salicylic acid for symptomatic treatment,and the observation group was treated with bifidobacteria triple viable capsule based on the control group.The colitis score,CD4+CD25+regulatory T cells and IL-10 changes before and after treatment were compared between the two groups.ResultsThe total effective rate of the observation group was 86.67%,significantly higher than 69.05%of the control group(P＜0.05).The colitis scores had no statistically significant difference between the two groups before treatment(P＞0.05),but the scores in the observation group were significantly lower than those in the control group after treatment(P＜0.01).The ratio of CD4+CD25+regulatory T cells to the total CD4+T cells and IL-10 levels had no statistically significant difference between the two groups before treatment(P＞0.05),but they were significantly higher in the observation group than the control group after treatment(P＜0.01).ConclusionBifidobacteria triple viable capsule has significant clinical efficacy in the treatment of UC.It can significantly increase the ratio of CD4+CD25+regulatory T cells to the total CD4+T cells and IL-10 levels and improve the intestinal microbial balance,which is thus worthy of application and popularization.

Bifidobacteria triple viable capsule;Ulcerative colitis(UC);Regulatory T cells;Influence

R574.62

A

1003—6350（2016）01—0040—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.01.015

2015-02-10)

賴潔瑩。E-mail：laijieyingcandy@126.com