康復新液與順鉑、伊立替康聯用對大腸癌HCT116荷瘤小鼠腫瘤生長和造血系統的影響＊

鄒俊波，熊永愛

（成都中醫藥大學藥學院 中藥材標準化教育部重點實驗室 四川省中藥資源系統研究與開發利用重點實驗室省部共建國家重點實驗室培育基地 成都 610075）

康復新液與順鉑、伊立替康聯用對大腸癌HCT116荷瘤小鼠腫瘤生長和造血系統的影響＊

鄒俊波＊＊，熊永愛

（成都中醫藥大學藥學院 中藥材標準化教育部重點實驗室 四川省中藥資源系統研究與開發利用重點實驗室省部共建國家重點實驗室培育基地 成都 610075）

目的：考察康復新液與順鉑、伊立替康等用人結腸癌細胞HCT116荷瘤小鼠的聯合用藥效果。方法：SPF級C57BL/6小鼠110只，分別腹水接種HCT116制備種鼠模型，6-7天后，分離腫瘤組織制備HCT116荷瘤小鼠模型90只，隨機分為模型組、康復新液組、順鉑組、康復新液聯合順鉑組、伊立替康組、康復新液聯合伊立替康組共6組，按實驗方案給藥16天，期間每3天測定一次動物體質量，16天后荷瘤小鼠摘眼球取血，測定血常規，處死后剝離腫瘤組織，測定腫瘤體積，計算小鼠FBW/IBW比值，分取骨髓，測定骨髓DNA含量，觀察造血祖細胞集落，流式細胞儀檢測骨髓細胞CD34+抗原的表達。結果：與模型組相比，各給藥組瘤重均顯著減輕（P＜0.05），康復新液及聯合用藥組動物PLT、RBC、HGB水平均顯著升高（P＜0.05，P＜0.01），順鉑組、伊立替康組小鼠血常規各項水平和骨髓DNA含量、造血祖細胞集落數量以及骨髓細胞CD34+抗原表達率均顯著下降（P＜0.05，P＜0.01）；與順鉑組、伊立替康組相比，與康復新液聯合使用可明顯抑制化療藥物導致的體質量下降（P＜0.05），升高實驗動物血常規水平（P＜0.05，P＜0.01），提升小鼠骨髓DNA含量、造血祖細胞集落數量以及骨髓細胞CD34+抗原表達率（P＜0.05，P＜0.01）。結論：康復新液具有明顯抑制HCT116荷瘤小鼠腫瘤生長的作用，且與順鉑、伊立替康聯合應用，可有效改善后二者引起的骨髓抑制作用，康復新液聯合一線抗腫瘤藥物的應用前景廣闊。

康復新液 結腸癌 順鉑 伊立替康 聯合用藥

近年來，中藥對抗化療方案引起的副作用具有顯著的效果[1]。康復新液為美洲大蠊提取物制備的國家二類新藥，最主要用于消化系統潰瘍，如胃潰瘍、十二支腸潰瘍、結腸炎等以及外部創傷，如燒燙傷、金創傷等的修復。康復新液在抗腫瘤方面的應用受到越來越多的重視，眾多學者的研究表明其對呼吸系統腫瘤、生殖系統腫瘤、消化系統腫瘤等均具有明顯的抑制作用。

由此推測，康復新液既具有良好的修復作用，還對腫瘤細胞生長具有一定的抑制作用。因此，具備與化療藥物聯合用藥的理論基礎。日本學者研究[1]表明，中藥在對抗化療方案引起的副作用方面，具有顯著的效果。本實驗擬開展康復新液與順鉑、伊立替康等藥物聯合用于異體移植結腸癌小鼠的實驗研究，相關研究未見國內外文獻報道。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

SPF級C57BL/6小鼠，體質量16-20 g，雌雄各半，由成都達碩生物科技有限公司提供，動物合格證號：川實動管質SCXK（川）2013-24。由成都中醫藥大學藥學院動物觀察室飼養，實驗動物設施條件合格證號：川實動管使第2009-124號。

1.2 實驗藥物及試劑

康復新液（100 mL/瓶，湖南中南科倫藥業有限公司，批號：M140937）；鹽酸伊立替康注射液（40 mg/支，美國輝瑞制藥有限公司，批號：15050611）；順鉑注射液（30 mg/支，太極集團四川太極制藥有限公司，批號：14080014）；重組人粒細胞集落刺激因子（Recombinant Human Granulocyte-Colony Stimulating Factor，rhG-CSF）注射液（齊魯制藥有限公司，國藥準字：S19990049，批號：140812）；重組小鼠干細胞因子（Recombinat Mouse Stem Cell Factor，rmSCF）、重組小鼠白介素3（Recombinant Mouse Interleukin-3，rmIL-3）、重組小鼠促血小板生成素（Recombinant Mouse Thrombopoietin，rmTPO）（以色列ProSpec公司，批號分別為CYT-275、CYT-371 CYT-346）；鼠抗人CD34+單克隆抗體（北京博奧森公司，批號：BA0763）；胎牛血清（Fetal Calf Serum，FBS）、PBS緩沖液（美國Hyclone公司，批號分別為：SH30084.03、AWJ20601）；青鏈霉素雙抗，青霉素10 000 U·mL-1，鏈霉素10 000 μg·mL-1（北京友康基業生物科技有限公司，批號：RS0008；牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin，BSA）、L-谷氨酰胺、二巰基乙醇（美國sigma公司，編號分別為：sigma7888、sigma49419、M3148；RPMI 1640培養基（美國Gibco公司，批號：12633012）。

1.3 腫瘤細胞

人結腸癌HCT116腫瘤細胞，由四川大學華西醫學中心腫瘤生物治療實驗室提供。

1.4 實驗儀器

十萬分之一分析天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；BPH-300倒置相差顯微鏡（上海比目儀器有限公司）；MEK6318K全自動血細胞分析儀（上海廣電醫用電子儀器有限公司）； BD FACSCalibur流式細胞儀（北京東迅天地醫療儀器有限公司）。

2 實驗方法

2.1 HCT116荷瘤小鼠模型制備

將HCT116腫瘤細胞從液氮罐中取出，37℃迅速解凍，將濃度調整至1×108個/mL以供注射。腹腔接種HCT116細胞小鼠6-7 天后腹水形成明顯[1]，將生長7天的腹水模型種鼠頸椎脫臼處死，蠟版固定，用碘伏、75%乙醇腹部局部消毒，在無菌條件下取出乳白色濃稠活體腹水，與生理鹽水注射液1:3稀釋，移植于用75%乙醇消毒的受試小鼠，每只小鼠按照0.2 mL接種于右腋下皮膚[2]。

2.2 動物分組及給藥

小鼠接種腫瘤細胞后次日按照體質量隨機分為 6組，每組15只，即模型組（0.5% CMC-Na溶液）、康復新液組、順鉑組、康復新液聯合順鉑組、伊立替康組、康復新液聯合伊立替康組。給藥劑量及方式見表1。

表1 康復新液聯合用藥實驗藥物給藥方案

2.4 抑瘤率的測定

按表1給藥方案給藥。第16 天處死小鼠，取腫瘤組織稱瘤重，計算抑瘤率。

抑瘤率（%）=（模型組的平均瘤重-治療組平均瘤重）/模型組的平均瘤重×100%

2.5 小鼠給藥前后體質量、體質量比值（FBW / IBW）、死亡情況

IBW為給藥前小鼠體質量，FBW為16天時小鼠去除瘤重的體質量。采用FBW/IBW比值大小衡量藥物的毒性作用大小。FBW/IBW＞0.85，提示藥物的毒副作用不明顯，小鼠能耐受；比值小于0.85則提示藥物對小鼠有一定的毒副作用；治療期間如給藥組動物死亡超過20%，表示藥物具有毒性反應。

2.6 血常規測定

各組動物摘眼球取血，至于含EDTA-2K的抗凝管中，測定血常規。

2.7 骨髓細胞DNA含量

各組實驗動物脫頸處死后，以75%酒精浸泡5 min，在超凈工作臺取左側股骨，用0.005 mol·L-1CaCl2沖洗骨髓至3 mL 淋巴細胞分離液中，2 000 r·min-1離心20 min。收集單個核細胞層細胞，用無鈣、鎂離子PBS 液洗滌3次后配成每管109/L 的細胞懸液，離心棄上清，各管加入0.5 mL 碘化丙啶（PI）染液，置4℃冰箱30 min 混勻，用300目尼龍網過濾后待測。

2.8 造血祖細胞集落觀察

2.8.1 單個有核細胞懸液（BMC）制備及計數

取小鼠脛骨，6號針頭RPMI 1640沖出骨髓細胞，4號針頭過濾制成骨髓單個有核細胞懸液，用培養液調配成1×106/mL有核細胞懸液，置于4℃冰箱備用。

2.8.2 造血祖細胞培養

將造血祖細胞粒單系祖細胞（CFU-GM）、紅系祖細胞（BFU-E、CFU-E）、巨核系祖細胞（CFUMeg）培養于96孔培養板中培養，每組8孔，培養條件見下表2。將培養板放于在37℃、5% CO2、飽和濕度條件下培養7天，并于第3天倒置顯微鏡計數CFU-E細胞集落數，于第7天分別計數CFU-GM、BFU-E、CFU-Meg。其中，BFU-E、CFU-GM以多于50個細胞為一個集落，CFU-E以8-32個細胞為一個集落，CFU-Meg以多于3個細胞為一個集落。

2.9 骨髓細胞CD34+抗原表達檢測

用含0.2%牛血清白蛋白的PBS 1640緩沖液沖洗小鼠右側股骨骨髓細胞，取約106個細胞混懸液，離心，棄去上清液，加30 μL 正常小鼠血清以封閉非特異結合位點，再加入10 μL FITC 標記的大鼠抗小鼠CD34+抗體，對照管加入10 μL 相應對照抗體，4℃避光反應30 min。加入2 mL 紅細胞裂解液，作用5 min，洗滌細胞2次，加入終濃度為3 μg·mL-1的PI 染液，采用流式細胞儀檢測骨髓細胞CD34+抗原表達。

表2 造血祖細胞培養體系

2.10 統計方法

圖1 康復新液聯合用藥對HCT116 結腸癌荷瘤小鼠體質量（含瘤重）的影響

3 實驗結果

3.1 抑瘤率測定結果

由表3可知，康復新液（3.9 mL·kg-1）連續灌胃給藥15天，可顯著減輕瘤重（P＜0.01），抑瘤率為30.14%，表明康復新液具有較好的抑制HCT116腫瘤生長的作用；順鉑抑瘤率為41.45%，具有明顯抑瘤作用（P＜0.05），康復新液聯合順鉑可顯著減輕瘤重（P＜0.01），抑瘤率54.78%；伊立替康可顯著減輕瘤重（P＜0.01），抑瘤率42.90%，康復新液聯合伊立替康組瘤重顯著減輕（P＜0.01），抑瘤率為56.23%。康復新液聯合用藥后具有增加順鉑、伊立替康抑制腫瘤作用的趨勢。

3.2 小鼠給藥前后體質量變化結果

由圖1可知，實驗結束時體質量與模型組相比，順鉑、伊立替康組實驗動物體質量自第3天開始，即第2次稱量動物體質量時明顯下降（P＜0.05），隨著時間推移，體質量下降幅度越來越大（P＜0.05）；與康復新液聯用后，可明顯抑制化療藥物引起的實驗動物體質量下降（P＜0.05）。

3.3 小鼠給藥前后體質量比值（FBW / IBW）及死亡比例測定結果

由表4可知，順鉑組FBW /IBW值小于0.85，提示順鉑毒副作用明顯，聯合應用康復新液后，FBW / IBW值達到0.85，表明康復新液對順鉑的副作用有明顯改善；伊立替康組FBW /IBW值小于0.85，提示其有副作用，與康復新液聯合應用后FBW /IBW值顯著提高至0.86，表明康復新液對伊立替康的副作用減少。各給藥組連續灌胃給藥16天，康復新液組因動物打架意外致死1只，伊立替康組因接種操作的失誤（可能由于接種時腫瘤細胞液外漏），致使1只小鼠無腫瘤生長，順鉑組及相關聯合用藥組動物各死亡2只，進行數據統計時未計入這些小鼠的體質量數據。

表3 康復新液聯合用藥對HCT116 結腸癌荷瘤小鼠抑瘤率的影響（±s）

表3 康復新液聯合用藥對HCT116 結腸癌荷瘤小鼠抑瘤率的影響（±s）

注：與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與順鉑組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與伊立替康組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01，下同。

組別 劑量（mg/kg） 動物數量（n） 瘤重（g） 抑瘤率（%）模型組 -- 15 3.45±0.88 0.00康復新液組 3.9 ml 14 2.41±0.99** 30.14**順鉑組 10 13 2.02±0.72* 41.45*康復新液聯合順鉑組 等劑量聯用 13 1.56±0.93** 54.78**伊立替康組 44.5 14 1.97±0.64** 42.90**康復新液聯合伊立替康組 等劑量聯用 15 1.51±1.02** 56.23**

3.4 實驗動物外周血象測定結果

由表5、6可知，①PLT水平：與模型組相比，康復新液聯合用藥組動物PLT水平顯著升高（P＜0.05，P＜0.01），與順鉑組、伊立替康組相比，康復新液聯合用藥組動物PLT水平顯著升高（P＜0.05，P＜0.01）。②HGB水平：與模型組相比，康復新液組以及康復新液聯合用藥組HGB水平顯著升高（P＜0.05，P＜0.01），順鉑、伊立替康組HGB水平顯著下降（P＜0.01），聯用康復新液后顯著升高（P＜0.05，P＜0.01）。③RBC水平：與模型組相比，康復新液及聯合用藥組RBC水平顯著升高（P＜0.05，P＜0.01），與順鉑、伊立替康組相比，聯合應用康復新液后動物RBC水平顯著升高（P＜0.01）。④WBC水平：與模型組相比，康復新液均可顯著升高實驗動物WBC水平（P＜0.05，P＜0.01），順鉑、伊立替康組WBC水平顯著下降（P＜0.05，P＜0.01），聯用康復新液可顯著提高順鉑、伊立替康導致的WBC水平下降（P＜0.01）。⑤NEU水平及NEU百分比：與模型組相比，各實驗組無顯著差異（P＞0.05），與順鉑、伊立替康組組相比，康復新液組實驗動物NEU水平及NEU百分比顯著升高（P＜0.05，P＜0.01）。

3.5 骨髓DNA含量測定結果

由圖2可知，與模型組比較，順鉑組、伊立替康組小鼠骨髓DNA極含量顯著下降（P＜0.01）；與順鉑組比較，康復新液聯合順鉑組小鼠骨髓DNA含量顯著升高（P＜0.05）；與伊立替康組相比，康復新液聯合伊立替康組小鼠骨髓DNA含量顯著升高（P＜0.05）。

圖2 康復新液聯合用藥對HCT116 結腸癌荷瘤小鼠骨髓DNA含量的影響（±s）

表4 康復新液聯合用藥對HCT116 結腸癌荷瘤小鼠體質量及死亡比例的影響（±s）

表4 康復新液聯合用藥對HCT116 結腸癌荷瘤小鼠體質量及死亡比例的影響（±s）

組別 劑量/mg?kg-1 動物數量/n 體質量/g FBW/IBW FBW IBW模型組 -- 15 16.12±1.86 18.32±1.11 0.88±0.14康復新液組 3.9 ml 14 16.02±1.56 18.41±1.43 0.87±0.32順鉑組 10 13 14.89±1.11 18.38±2.51 0.81±0.77康復新液聯合順鉑組 等劑量聯用 13 15.86±2.37 18.66±2.63 0.85±0.89伊立替康組 44.5 14 11.22±1.94 18.01±2.17 0.62±0.57康復新液聯合伊立替康組 等劑量聯用 15 15.90±2.33 18.49±2.05 0.86±0.82

表5 康復新液聯合用藥對HCT116 結腸癌荷瘤小鼠外周血象的影響（±s）

表5 康復新液聯合用藥對HCT116 結腸癌荷瘤小鼠外周血象的影響（±s）

血象指標PLT/109·L-1 HGB/g·L-1 RBC/×1012·L-1模型組 836.46±23.93 93.92±5.30 5.54±0.37康復新液組 902.59±25.28 137.26±7.04** 7.73±0.46*順鉑組 883.90±26.94 49.62±4.99** 3.63±0.39**康復新液聯合順鉑組 933.87±21.03*## 121.08±13.00**## 7.59±0.86*#伊立替康組 637.07±19.10** 56.22±3.57** 4.75±0.34**康復新液聯合伊立替康組 896.03±25.48**ΔΔ 117.16±11.20**Δ 8.04±0.41**ΔΔ組別

表6 康復新液聯合用藥對HCT116 結腸癌荷瘤小鼠外周血象的影響（±s）

表6 康復新液聯合用藥對HCT116 結腸癌荷瘤小鼠外周血象的影響（±s）

血象指標NEU/109·L-1 NEU/% WBC/109·L-1模型組 7.25±0.48 52.04±1.68 5.99±0.39康復新液組 7.49±0.74 53.21±1.59 9.45±0.71*順鉑組 3.72±0.43* 35.04±1.89* 3.47±0.21**康復新液聯合順鉑組 7.46±0.78# 46.27±3.45## 7.83±0.57**#伊立替康組 3.81±0.54** 34.75±1.51* 2.08±0.16**康復新液聯合伊立替康組 7.79±0.65Δ 58.09±3.81Δ 7.21±0.72**ΔΔ組別

3.6 對造血祖細胞的影響

由表7可知，與模型組相比，順鉑組、伊立替康組以及相關聯合用藥組骨髓CFU-GM、BFU-E、CFU-E與CFU-Meg集落數量均顯著下降（P＜0.05，P＜0.01）；與順鉑組相比，康復新液聯合順鉑組能顯著升高骨髓CFU-GM、BFU-E、CFU-E與CFU-Meg集落數（P＜0.05，P＜0.01）；與伊立替康組相比，康復新液聯合伊立替康組能顯著升高BFU-E、CFU-GM、CFU-E與CFU-Meg集落數（P＜0.05，P＜0.01）。

3.7 骨髓細胞CD34+表達率測定結果

由圖3可知，與模型組比較，除康復新液組外，其余各組小鼠骨髓細胞CD34+表達率顯著下降（P＜0.05，P＜0.01）；與順鉑組比較，康復新液聯合順鉑組骨髓細胞CD34+表達率明顯升高（P＜0.05）；與伊立替康組比較，康復新液聯合伊立替康組骨髓細胞CD34+表達率極顯著升高（P＜0.01）。各實驗組小鼠骨髓造血干細胞CD34+流式細胞檢測分別見圖4-9。

圖3 康復新液聯合用藥對HCT116 結腸癌荷瘤小鼠骨髓細胞CD34+表達率的影響（±s）

4 討論

大腸癌，又稱結腸癌，是常見的消化道惡性腫瘤，可發生在結腸的任何部位。在北美、西歐發病率有較高，美國結腸癌占全部癌死亡原因的第2位。在中國大部分省市死亡率占全部惡性腫瘤死亡率的第5-6位，近年來有上升趨勢。其發病率隨年齡而增長，從40歲開始上升，60-75歲達到峰值。

大腸癌目前常用的治療方案仍為單一藥物化療，較為有效的化療藥物主要包括順鉑類（DDP）、伊立替康（CPT-11）、氟尿嘧啶類、亞硝脲類、絲裂霉素（MMC）、蒽環類抗生素等，但這些藥物的療效仍有一定的局限。

如順鉑是以二價鉑同兩個氯原子和兩個氨分子結合的重金屬絡合物，類似于雙功能烷化劑，可抑制DNA的復制過程[2-4]。骨髓抑制為最主要的劑量限制性毒性[5]。1995年WHO（世界衛生組織）對上百種化療藥進行綜合排名，順鉑名列第2；另據統計在中國以順鉑為主的化療方案或含順鉑的聯合化療方案占所有化療方案的70%-80%[6]。

伊立替康是喜樹堿的半合成衍生物。中性粒細胞減少癥為該藥的劑量限制性毒性[7]。在伊立替康單藥治療中：78.7%的患者均出現過中性粒細胞減少癥，嚴重者（中性粒細胞計數＜500/mm3）占22.6%。在可評價的周期內，18%出現中性粒細胞計數＜1 000/mm3，其中7.6%中性粒細胞計數＜500/mm3。通常在第22天完全恢復正常。62%的患者，按周期為17%，出現嚴重中性粒細胞減少癥合并發熱。10.3%的患者（按周期為2.5%）出現感染；5.3%的患者（按周期為1.1%）出現嚴重中性粒細胞減少癥引起的感染，2例出現過中性粒細胞減少癥，嚴重者（中性粒細胞計數＜500/mm3）占22.6%。

表7 康復新液聯合用藥對HCT116 結腸癌荷瘤小鼠造血祖細胞的影響（±s）

表7 康復新液聯合用藥對HCT116 結腸癌荷瘤小鼠造血祖細胞的影響（±s）

組別 CFU-GM（×105） BFU-E（×105） CFU-E（×105） CFU-Meg（×105）模型組 86.61±2.07 39.82±2.43 64.36±2.02 159.46±5.64康復新液組 87.40±1.74 40.86±1.37 67.88±1.33 158.36±3.52順鉑組 30.85±0.46** 19.66±0.68** 35.79±0.75* 46.38±1.73**康復新液聯合順鉑組 62.43±1.70**## 31.80±1.38*## 62.33±1.57*# 144.82±4.24*#伊立替康組 34.14±1.03** 19.85±2.19** 35.12±3.10* 52.63±2.92**康復新液聯合伊立替康組 59.07±2.77*Δ 31.51±2.06*ΔΔ 55.44±0.94*Δ 141.79±1.03**ΔΔ

近年來，在這些藥物基礎上制定了針對結腸癌的化療方案，主要包括FM方案、5-FU/CF方案、5-FU/LV和5-FU/CF/LV方案，上述方案成本高昂，帶給患者沉重的經濟負擔，更重要的是化療藥物引起的副作用嚴重影響了患者的生活質量，其中最突出的仍是骨髓抑制作用，表現為骨髓造血功能低下，血細胞前體活性下降，周圍血細胞數量減少，骨髓抑制進一步限制了相關化療藥物的臨床使用，目前尚無理想應對方案。

圖4 模型組小鼠骨髓細胞CD34+抗原表達

圖5 康復新液組小鼠骨髓細胞CD34+抗原表達

圖6 順鉑組小鼠骨髓細胞CD34+抗原表達

圖7 康復新液聯合順鉑組小鼠骨髓細胞CD34+抗原表達

圖8 伊立替康組小鼠骨髓細胞CD34+抗原表達

圖9 康復新液聯合伊立替康組小鼠骨髓細胞CD34+抗原表達

目前康復新液最主要用于消化系統潰瘍，如胃潰瘍、十二支腸潰瘍、結腸炎等以及外部創傷，如燒燙傷、金創傷等的修復。近年來其在抗腫瘤方面的應用受到越來越多的重視，有學者研究表明康復新液具有誘導胃癌BGC-823細胞凋亡的作用，且抑制作用呈時間濃度依賴關系[8]，美洲大蠊提取物通過上調Fas、Fas R和P53等凋亡基因，下調Bcl-2抑制凋亡基因，阻止細胞于G0/G1期從而抑制細胞增殖，誘導細胞凋亡而顯著抑制3LL細胞肺癌在小鼠體內的生長[9]，通過線粒體途徑誘導該細胞凋亡抑制人肝癌細胞Bel-7402的增殖[10]，下調小鼠血管內皮生長因子的表達，抑制腫瘤血管生成從而抑制H22肝癌小鼠腫瘤生長[11]。尚有研究表明美洲大蠊醇提取物對白血病細胞和生殖系統腫瘤細胞具有顯著的細胞毒性，可明顯抑制相關腫瘤細胞的增殖[12-13]。

從本實驗可知，康復新液（3.9 ml/kg）連續給藥15 d，均具有明顯抑制HCT116荷瘤小鼠腫瘤生長的作用，且與順鉑、伊立替康聯合應用，可有效改善后二者引起的骨髓抑制，也可改善順鉑、伊立替康導致的骨髓抑制狀況。

與順鉑聯合應用后，康復新液可明顯提高順鉑的抑瘤率，與其所含CⅡ-3等抗腫瘤活性成分相關；同時康復新液修復作用明顯，因此其對順鉑引起的副作用具有一定的干預作用，本實驗中表現為有效緩解動物體質量的下降，提高FBW/IBW值，增加外周血PLT、RBC水平，增加骨髓DNA含量，增加小鼠骨髓細胞CD34+抗原表達，升高骨髓CFUGM、BFU-E、CFU-E與CFU-Meg集落數。與伊立替康聯用后，康復新液同樣表現為在提升抑瘤率的同時，有效緩解化療藥物導致的骨髓抑制情況，具體表現為有效提高實驗動物外周血白細胞水平和中性粒細胞數量，升高骨髓CFU-GM、BFU-E、CFU-E與CFU-Meg集落數，增加骨髓DNA含量，提高小鼠骨髓細胞CD34+抗原的表達。但本實驗未考察康復新液與不同劑量化療藥物的聯用效果，即康復新液可能通過減少順鉑、伊立替康的用量而降低化療藥物的相關副作用，此為后續研究應重點考察的方向。從實驗結果看，康復新液具有與一線抗腫瘤藥物聯合應用的廣闊前景。

1 Mochiki E,Yanai M,Ohno T,et al. The effect of traditional Japanese medicine （Kampo） on gastrointestinal function. Surg Today,2010,40（12）: 1105-1111.

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3 劉敏. 順鉑聯合電離輻射在肺癌細胞殺傷作用機制的研究.吉林大學博士學位論文,2014.

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Impacts of Kangfuxin Decoction Combined with Cisplatin and Irinotecan on Cancer Cell Reproduction and Hemopoietic System in Tumor-Bearing Mice

Zou Junbo,Xiong Yongai

(The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine / Key Laboratory of Systematic Research / Development and Utilization of Chinese Medicine Resources in Sichuan Province Key Laboratory Breeding Base of Co-Founded by Sichuan Province and MOST,Pharmacy College,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610075,China)

This study aimed to investigate the effects of Kangfuxin decoction （KFXD） combined with cisplatin and irinotecan on HCT116 cells reproduction and hemopoietic system in tumor-bearing mice. 110 C57BL/6 mice were implanted with HCT116 cells through abdominal injection,while 90 mice were randomly divided into the model group,the KFXD group,the cisplatin group,KFXD + cisplatin group,the irinotecan group and KFXD + irinotecan group. Mice of each group had been administered by corresponding medication for 16 days. The body weight were detected every 3 days. Blood routine examination were observed,while neoplastic tissues were separated and measured,FBW / IBW was counted,and DNA content of marrow,progenitor colony assay and expression rates of medullary cell CD34+were also measured and analyzed,respectively. It was found that in the medication groups the weights of neoplastic tissues were decreased compared with the model group （P＜ 0.05）,while the levels of WBC,PLT,RBC and HGB of KFXD and the relevant combination groups were obviously increased （P ＜ 0.05,P ＜ 0.01,respectively）. Routine blood indexes,DNA content of marrow,progenitor colony assay and expression rates of medullary cell CD34+in the cisplatin group and the irinotecan group were decreased（P ＜ 0.05,P ＜ 0.01,respectively）. Compared with the cisplatin geoup and the irinotecan group, levels of PLT,RBC and HGB of relevant the combination groups were increased （P ＜ 0.05,P ＜ 0.01,respectively）,DNA content of marrow,progenitor colony assay and expression rates of medullary cell CD34+in the relevant combination groups were also increased （P ＜ 0.05,P ＜ 0.01,respectively）. It was concluded that KFXD inhibited the growth of HCT116 cells in the tumor tissues of mice,and improved the suppressant of bone marrow caused by cisplatin and irinotecan in the drug combination. The prospect of combination of KFXD and initial antitumor drugs were spacious.

Kangfuxin decoction,colorectal cancer,cisplatin,irinotecan,drug combination

10.11842/wst.2016.05.022

R285.5

A

（責任編輯：馬雅靜，責任譯審：朱黎婷）

2015-12-12

修回日期：2016-03-12

＊ 國家自然科學基金委青年項目（30902005）：基于本草挖掘的中藥藥效物質基礎與作用機理研究—蜣螂抗良性前列腺增生癥的實驗研究，負責人：譚承佳；四川省科技廳項目（2014TD0007）：中藥藥理四川省青年科技創新研究團隊，負責人：曾南。

＊＊ 通訊作者：鄒俊波，博士，主要研究方向：中藥藥效與毒理學。