Ki-67、P53、LAT1在食管癌及癌前病變組織中的表達及其臨床意義

趙朋月 周會行 李軍紅

·臨床醫學·

Ki-67、P53、LAT1在食管癌及癌前病變組織中的表達及其臨床意義

趙朋月 周會行 李軍紅

目的分析增殖細胞核抗原Ki-67、腫瘤抑制基因P53、L型氨基酸轉運載體1(LAT1)在食管癌及癌前病變組織中的表達及其臨床意義。方法采用免疫組化SP法測定食管癌組織(31例,食管癌組)、癌前病變組織(65例,癌前病變組)、食管癌或癌前病變組織周圍的正常組織(22例,正常組)中Ki-67、P53、LAT1的表達,并分析其相關性。結果癌前病變組、食管癌組Ki-67(49.2%、83.9%)、P53(32.3%、67.7%)、LAT1(36.9%、77.4%)陽性表達率均明顯高于正常組,差異均具有統計學意義(P<0.05),食管癌組Ki-67、P53、LAT1陽性表達率明顯高于癌前病變組,差異均具有統計學意義(P<0.05)。經等級檢驗發現 Ki-67、P53、LAT1在食管癌組織中的表達呈正相關(r=0.319,P<0.05)。結論Ki-67、P53和LAT1聯合檢測可能對食管癌早期診斷、篩選食管癌癌前高危個體具有積極作用。

食管癌；癌前病變組織；增殖細胞核抗原；腫瘤抑制基因；L型氨基酸轉運載體1

食管癌是消化道常見的惡性腫瘤之一,其發病機制是一個多種基因異常表達參與的過程。研究表明,細胞增殖異常、癌相關基因突變及細胞凋亡過程異常均參與了食管癌的發生和進展［1］。另外,腫瘤的增長需消耗大量的氨基酸。LAT1是一種可轉運較大的中性氨基酸的轉運載體,它不受鈉離子濃度的影響。近期有文獻報道,LAT1高表達與人多種腫瘤的發生及進展有關,但其在食管癌中的表達少見報道［2］。本研究收集31例食管癌患者及65例癌前病變患者,采用免疫組化SP法測定收集的標本中LAT1基因、腫瘤抑制基因P53和增殖細胞核抗原Ki-67的蛋白表達水平,以探討食管癌的發生機制,以尋找一種有效的食管癌早期診斷和預后評估的指標,具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2012年5月～2015年4月在本院接受食管癌手術切除及胃鏡活檢檢查的患者96例,其中食管癌31例(食管癌組),癌前病變65例(癌前病變組)；另外采集食管癌或癌前病變組織周圍的正常組織標本22例作為正常組。上述患者未接受術前放化療,均經病理檢查證實。

1.2 方法

1.2.1 實驗試劑 選用鼠抗人Ki-67、P53單克隆抗體及免疫組化試劑盒,均由上海麥倉生物科技有限公司提供,兔抗人LAT1抗體由上海盈公試劑有限公司提供。

1.2.2 SP實驗方法 用4%甲醛固定標本,石蠟包埋切片,蘇木精-伊紅染色,4 μm連續切片,脫蠟后用SP染色,采用二氨基聯苯胺(DAB)顯色,蘇木素復染、脫水,中性樹膠封固,嚴格根據試劑盒說明書進行操作。

1.3 染色結果判定 Ki-67、P53蛋白陽性染色定位于細胞核,染色呈胞核棕黃色或棕褐色顆粒為陽性信號。LAT1分布于包膜和胞漿,染色后包膜和胞漿呈棕黃色。由2名有經驗病理科醫生進行盲法閱片。各切片隨機選5個高倍視野(×400),每個視野計數100個腫瘤細胞,取5個視野的陽性細胞的平均值為細胞陽性率。根據細胞陽性率及顯色深度判斷：細胞陽性率<10%為陰性(-)；10%～25%為弱陽性(+),顯色淺,顆粒細；26%～50%為中度陽性(++),顯色較深；>50%為強陽性(+++),顯色深,顆粒粗。由2名有經驗的病理科醫生分別進行盲法判讀。

1.4 統計學方法 采用SPSS21.0統計學軟件處理數據。計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗；用Spearman等級檢驗進行相關性分析。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 三種標本Ki-67、P53、LAT1陽性表達情況比較 正常組無Ki-67、P53、LAT1的陽性表達,癌前病變組、食管癌組Ki-67、P53、LAT1陽性表達率均明顯高于正常組,差異均具有統計學意義(P<0.05),食管癌組Ki-67、P53、LAT1陽性表達率明顯高于癌前病變組,差異均具有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2 Ki-67、P53、LAT1 在食管癌組織中表達的相關性 經等級檢驗發現 Ki-67、P53、LAT1在食管癌組織中的表達呈正相關(r=0.319,P=0.000<0.05)。見表2。

表1 三種標本Ki-67、P53、LAT1陽性表達情況比較［n(%)］

表2 Ki-67、P53、LAT1在食管癌組織中表達的相關性(n)

3 討論

食管癌的發生及進展是由許多蛋白一起作用的結果,其與有絲分裂過程的激活、凋亡過程的失活等有關［3］。Ki-67是目前使用最廣的標記細胞增殖活性的指標,其標記的增殖指數可準確反映細胞的增殖活性,是癌變較好的預測指標。P53作為抑癌基因之一,它通過阻滯G1/G0期細胞進入S期,抑制細胞增殖而起到抗腫瘤作用［4-7］。在胃癌、乳腺癌、肺癌、膀胱癌等惡性腫瘤中,約有超一半患者存在P53基因突變。突變型P53蛋白凋亡時間延長,其在胞核內過量沉積,故采用SP法能檢出。李昀等［4］報道,P53表達水平與腫瘤細胞分化、浸潤程度、淋巴結轉移呈正相關。LAT1是一種可溶性載體,能影響mTOR通路參與細胞的增殖,其高表達與肺癌、乳腺癌、前列腺癌等多種腫瘤的發生和進展有關,且有研究證實［5］,LAT1作為miR-126的靶基因參與了肺癌的侵襲及轉移過程。

本研究發現,正常食管黏膜組織中無Ki-67、P53和LAT1的陽性表達,而在癌前病變組織中及食管癌組織中均有較高的陽性表達,尤其是食管癌組織中的表達率更高,Ki-67的表達水平與組織學分級呈正相關,Ki-67水平越高,說明細胞增殖活性越高。P53基因及LAT1基因表達上調在食管癌的發生和進展中起著重要作用。同時結果還顯示,三種基因在食管癌組織中的表達呈正相關,表明Ki-67表達水平的上調能明顯增強食管癌的增殖能力,且此過程可能同時存在P53基因和(或)LAT1基因的表達上調,從而更加增強細胞的增殖與分化或抑制凋亡,使得食管癌的病情惡化。

綜上所述,Ki-67、P53和LAT1具有作為食管癌治療特異性靶點的潛力,其聯合檢測對食管癌早期診斷、篩選食管癌癌前高危個體具有積極作用。

［1］陳建洲,陳創珍,李德銳,等.非手術治療食管癌臨床分期的驗證.中國腫瘤,2012,21(5):374-378.

［2］Hayashi K,Jutabha P,Endou H,et al.LAT1 is a critical transporter of essential amino acids for immune reactions in activatedhuman T cells.J Immunol,2013,191(8):4080-4085.

［3］王軍,景紹武,于金明.食管癌分子靶向治療研究進展.中華放射腫瘤學雜志,2013,22(5):39-42.

［4］李昀,張軍航,安軍,等.PLCE1調控p53誘導食管癌細胞凋亡的實驗研究.中國藥理學通報,2015,31(1):82-86.

［5］杜博,魏海峰,趙雪梅,等.Ki-67、P53、LAT1在食管癌及癌前病變組織中的表達及其臨床意義.中國免疫學雜志,2014(11): 1543-1545.

［6］徐文鑫,楊俊榮,王秋實,等.Ki-67、p53、 Survivin在食管癌及癌前病變組織中的表達意義.中國醫師雜志,2015,17(2): 224-226.

［7］張沛剛,陳永宏,陳鋼,等.Ki-67、c-myc、p53在食管癌中的表達及其意義.腫瘤研究與臨床,2014,26(8):544-546.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.19.022

2016-09-05］

471000 河南鄭州大學附屬洛陽中心醫院病理科