丙型肝炎病毒抗體雙抗原夾心法的臨床研究

冀敏 郭新菊

丙型肝炎病毒抗體雙抗原夾心法的臨床研究

冀敏 郭新菊

目的探討丙型肝炎病毒(HCV)抗體雙抗原夾心法的臨床作用。方法190份血液篩查陰性標本及190份質控血液標本,應用雙抗原夾心法對HCV抗體進行檢測,分析其檢測效果。結果ChironRIBA確認試劑檢測127份HCV抗體陽性標本中通過雙抗原夾心法顯示陽性126份,1份陰性,敏感性為99.21%。結論HCV抗體雙抗原夾心法檢測具有較高準確性,敏感性高,值得臨床推廣應用。

丙型肝炎病毒抗體；雙抗原夾心法

HCV是在輸血后導致肝炎發生的一個重要因素,往往經血液或血液制品進行傳播,經調查發現,HCV感染具有世界性分布特點,為了能夠避免HCV通過血液進行擴散,需對每個獻血者實施抗-HCV指標檢測［1］。通常選取間接酶聯免疫法進行檢測,此方法操作時包被抗原的組成及質量具有關鍵作用［2］。目前對抗-HCV間接酶聯免疫法試劑進行單獨檢測時顯現陽性,且處于臨界值相鄰樣本,以雙抗原夾心酶聯免疫法試劑進行檢測時則呈現陰性,伴隨臨床醫學發展,雙抗原夾心酶聯免疫吸附實驗(ELISA)對于HCV血清學診斷具有較為顯著的改善作用,效果明顯［3］。本文選取190份血液篩查陰性標本,分析雙抗原夾心法作用,現報告如下。

1 材料與方法

1.1試驗材料 選取本院2012年6月～2014年12月190份血液篩查陰性標本,同時采集190份質控血液標本。

1.2方法 將所選取的380份血液標本進行嚴格檢測,應用雙抗原夾心法檢測HCV抗體。在檢測時所應用試劑有吉比愛、Ortho丙肝病毒抗體酶聯免疫診斷試劑,ChironRIBA確認試劑。

1.2.1抗原制備 嵌合表位抗原經包涵體的形式表達,采取離子交換層析措施進行純化,然后通過SephadexG-50柱凝膠完成過濾采集,應用SDS-PAGE將抗原蛋白進行仔細鑒定。

1.2.2雙抗原夾心法 應用50 mmol/L碳酸鹽緩沖液對抗原予以稀釋處理,多肽抗原具體濃度為：結構處多肽151 g/ml,NS4處多肽0.51 g/ml,NS5處多肽0.251 g/ml,所應用到的基因工程表達抗原具體濃度有c7應用1 g/ml,C11應用1 g/ml。每個孔內均加進100 μl,在37℃狀態中持續保存1 h,然后放置到4℃冰箱內過夜,應用30%小牛血清PBST實施封閉處理,在每個孔內加進200 μl,37℃狀態中保存1 h,然后去除封閉液,應用50 μl樣品稀釋液,每個孔內加進5 μl,37℃狀態中保存30 min,然后應用PBST進行5次沖洗。選擇最為適宜酶稀釋度,通過棋盤滴定方法在每個孔內加進50工作濃度的酶標記抗原,37℃條件下放置15 min,經PBST沖洗5次,每孔加入50 μl底物緩沖液及50 μl顯色劑,在37℃狀態中保存10 min,使之能夠完全顯色。然后在每個孔內加進50 μl 2 mol/L硫酸,停止反應,應用酶標儀于450 nm波長條件下實施吸光度效果檢測,若檢測結果≥臨界值者則表示陽性,反之則表示陰性。

2 結果

應用雙抗原夾心法檢測標本,顯示126份為陽性標本,1份為陰性標本,應用ChironRIBA確認試劑檢測顯示其均呈現陽性,雙抗原夾心法檢測敏感性為99.21%。見表1。

表1 雙抗原夾心法檢測結果分析(n)

3 討論

對患者HCV抗體進行檢測是確定其是否發生感染的初步階段,主要有用作篩檢工作的酶免疫檢測(EIA)以及用作確證工作的重組免疫印跡試驗(RIBA),其中RIBA由于需要較高費用且并未建立嚴格試驗標準,目前在臨床診療中并無較多應用［4］。由于EIA存在較為明顯的便利性及穩定性、自動化功能強、價格較低等優點,在臨床中應用到血液篩查及檢測工作較為廣泛。目前EIA發展至第三代,依然實施間接法予以檢測,因其方法學存在一定固有缺陷性,極易導致結果出現假陽性及漏檢情況［5］。目前在臨床中將雙抗原夾心ELISA法檢測試劑作為發展方向具有較為明顯應用價值,夾心法可使得酶標記的特異性抗原將間接法檢測時酶標記的抗體進行取代由此完成整個檢測,與間接ELISA法進行比較,其對于樣品檢測存在雙特異性選擇特點,可以將血清內出現的抗HCV的總抗體完成檢測,有效防止間接ELISA法所存在的檢測弊端,確保檢測結果具有更高的敏感性與特異性,而且因為HCV抗原所具有的分子量較小,以酶進行HCV抗原的直接性標記,往往使得空間位阻情況發生,導致抗體與抗原無法輕易結合,存在較為明顯抑制作用,因此HCV抗原的標記是建立抗HCV抗體的雙抗原夾心ELISA檢測方法的一個較為重要的難點［6］。

在本文研究中,雙抗原夾心法檢測顯示陽性為126份,陰性為1份,雙抗原夾心法檢測無需對血清產品予以稀釋,也不會因類風濕因子等不良因素而受到干擾,存在較為理想的特異性,而且能夠對血清中各種抗體予以檢測,尤其免疫球蛋白M(IgM)類抗體可以明顯減少自病毒感染至應用ELISA法檢測到抗體間的“窗口期”。所以采取雙抗原夾心ELISA法檢測確保HCV感染診斷試劑存在較高特異性,其檢出率明顯上升,有效縮短檢測時間,具有較高臨床推廣應用價值。

［1］李文新.不同方法試劑檢測丙型肝炎病毒抗體結果分析.中國輸血雜志,2014,27(6):622-624.

［2］龍宏洋,葉玉芬,朱學強,等.丙型肝炎病原學不同檢測方法的臨床應用價值對比分析.檢驗醫學與臨床,2015,12(5):597-599.

［3］孟慶玲,魯健,邱豐,等.丙型肝炎IgG抗體ELISA診斷試劑比對分析.中華實驗和臨床病毒學雜志,2013,27(3):221-223.

［4］鮮玉萍,楊紅英.丙型肝炎核心抗原檢測的臨床意義.檢驗醫學與臨床,2012,9(18):2320-2321.

［5］張健,劉宜仲,楊珊,等.HCV核心抗原檢測在血液篩查中的初步研究.現代檢驗醫學雜志,2012,27(2):110-111.

［6］趙璐,馮悅,夏雪山.HCV基因型的差異性流行與進化.遺傳,2012,34(6):666-672.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.04.013

2015-05-07］

453000 河南省新鄉市婦幼保健院檢驗科