膽囊切除術后兔血清CCK8 的變化及意義

劉振華 王寧 張帥民 徐賢剛 黎濤 石承先△

(1.貴州省人民醫院肝膽外科，貴州 貴陽 550002；2.貴州省骨科醫院，貴州 貴陽 550002)

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膽囊切除術后兔血清CCK8 的變化及意義

劉振華1王寧2張帥民1徐賢剛1黎濤1石承先1△

(1.貴州省人民醫院肝膽外科，貴州 貴陽 550002；2.貴州省骨科醫院，貴州 貴陽 550002)

膽囊切除術； CCK8； oddi括約肌； 兔

Oddi括約肌(SO)生理運動在維持正常膽道動力學中起著重要作用 ,其主要受神經、體液因素調節。CCK作為胃腸肽類激素之一對SO的調節具有重要作用[1]。在CCK家族中，縮膽囊素八肽(CCK8)生理作用最大。CCK可直接作用SO內的縮膽囊素A受體(CCKAR)發揮作用。膽囊切除術后綜合癥(PCS)概念的提出使得SO的病理生理受到高度重視，部分病因為SO功能障礙(SOD)[2]，本實驗通過觀察膽囊切除術后兔血清CCK8濃度的變化，探討CCK8與SO生理活動的關系。

1 材料與方法

1.1 實驗材料與儀器 日本大耳白兔20只(購于貴州醫科大學動物實驗中心)，兔CCK-8 ELISA試劑盒(武漢華美生物技術有限公司)，LGR10-4.2 離心機(北京醫用離心機廠)，PZF-6021型干燥箱(中國上海)，BCD-00A型冰箱(青島海信)，ELx800UV型酶標儀(Bio-Tek公司)

1.2 各組動物處理 20只日本大耳白兔，雌雄不限，體質量(2.5±0.5) kg,經適應性飼養1周后隨機分成A、B兩組，每組10只。A組為對照組；B組為膽囊切除組。術前禁食12 h，禁水4 h，稱重后以25%烏拉坦經耳緣靜脈注射麻醉(2.5 mL/kg)。將兔固定于實驗臺上，剪去腹部體毛，常規消毒術野、鋪敷。取上腹正中切口5 cm，逐層止血，經腹白線進入腹腔，甲狀腺拉鉤牽拉腹壁，以生理鹽水紗布推開胃十二指腸，暴露兔肝門部，在右上腹部肝臟中找到膽囊。A組行單純觸摸膽囊后分兩層關腹；B組，開腹在膽囊三角中分清結構后，膽囊管與膽囊動脈一并結扎，順逆結合切除膽囊。術后飼養1個月，取下腔靜脈血留置標本。

1.3 兔縮膽囊素八肽的測定 推開十二指腸，10 mL注射器取下腔靜脈血5 mL，在生化速凝管冷凝約30 min，3 000 r/min離心機離心5 min，取上層血清2 mL，貯于-80 ℃冰箱保存待測CCK-8濃度。取完標本后經耳緣靜脈注射40 mL空氣處死兔。嚴格按照兔CCK-8 Elisa試劑盒說明書操作，用酶標儀在 450 nm 波長測量各孔的光密度(OD值)。

2 結 果

兩組兔血清中CCK8濃度的比較，A組血清CCK-8濃度為(195.69±23.07) pg/mL，B組兔血清CCK8濃度為(117.72±26.55) pg/mL，B組較A組顯著降低(P<0.01)。

3 討 論

膽囊、膽總管和SO三者是統一、協調的結構，在消化系統中起著重要作用。膽胰腸結合部是人體解剖結構和生理調控最為復雜的區域之一，SO是位于膽管、胰管和十二指腸結合部位的神經肌肉復合體，是膽汁和胰液的最終流出道，膽囊平滑肌的收縮和SO開放是一組協同的過程, 也是排出膽囊內容物以及排空膽囊的生理基礎。這一運動除了受豐富的內臟運動神經來支配外，還受膽囊收縮素和促胰液素等體液因素調節。

CCK最早由Ivy和 Oldberg 首先在小腸黏膜抽提液中發現,并因其有促進膽囊收縮的功能而得名[3]。根據肽段的長度不同，目前發現的CCK有CCK83,CCK58,CCK39,CCK22,CCK8,CCK1等[4]，其中CCK8的生理效應最大。生理條件下 ,由十二指腸黏膜分泌的CCK使膽囊收縮時也伴有SO舒張,而膽囊舒張時則SO呈收縮狀態。有研究[5]顯示餐后生理劑量CCK通過非腎上腺素能—非膽堿能抑制性神經元介導抑制SO的周期性收縮和降低SO基礎壓 ,促使膽囊排空；此外,刺激迷走神經使膽囊收縮而SO松弛。相反,切斷迷走神經后膽囊擴張而SO收縮。這種膽囊與SO活動在功能上的協調關系受神經和體液的雙重調節。Q.Zheng等[6]對家兔進行膽囊空腸吻合后SO緊張性收縮加強,而自發性收縮減弱,其原因為手術后SO對激素作用的敏感性下降了，提示在SOD的病人行膽囊空腸吻合可能起不了治療作用。但膽囊切除術后，膽囊與oddi括約肌的這種協調關系是否受影響并不清楚。G.T.Krishnamurthy等[7]研究發現 ,括約肌痙攣病人在使用CCK8后膽囊收縮，膽汁返流入肝內外膽管，而停止注射時膽汁返流人膽囊。然而在臨床上可見到，在膽囊切除術后，在除外膽管結石及上腹其他疾病后，仍有近10%的患者發生類似膽絞痛的癥狀，一般稱為PCS，其原因并不十分清楚。本實驗顯示，膽囊切除術后CCK8的濃度明顯下降。這種下降是否會使Oddi括約肌緊張度增加，松弛不夠，是否就是膽囊切除術后暴飲暴食后膽汁排出受限而誘發膽絞痛的原因，有待進一步研究。

[1] 徐華, 吳叔明. Oddi氏括約肌的運動功能及影響因素[J]. 國外醫學：消化系疾病分冊,2003,23(4):239-242.

[2] Toouli J. The sphincter of Oddi and acute pancreatitis-revisited[J]. HPB (Oxford),2003,5(3):142-145.

[3] Tusher V G, Tibshirani R, Chu G. Significance analysis of microarrays applied to the ionizing radiation response.[J]. Proc Natl Acad Sci USA,2001,98(9):5116-5121.

[4] 陳大慶, 倪宏. 縮膽囊素生物學作用的多樣性[J]. 國外醫學：兒科學分冊,2002,29(3):164-166.

[5] Dong M, Sonoda Y, Kawamoto M, et al. Duodenum is important for the sphincter of Oddi motor response to cholecystokinin octapeptide in conscious dogs[J]. J Gastroenterol,2005,40(4):389-395.

[6] Zheng Q, Chen Y. The Effects of Cholecystojejunostomy and Biliary Drainage on Biliary Motor[J].Huazhong UnivSci Technolog Med Sci，2002,22:144-147.

[7] Kurishnamurthy GT.Kurishnamurthy S，Waston RD.Characterization of basal hepatic bile flow and the effects of intravenous cholecystokinm on the live.sphincter.and gallbladder in patients with sphincter of Oddi spasm[J].Eur J Nucl Med Mol Imaging，2004，31：85-93.

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