血小板微粒在血栓性疾病中的診斷價值

楊正亮，金　紅，李　琪，陳宏娟 綜述， 閆海潤 審校

(牡丹江醫學院紅旗醫院檢驗科，黑龍江牡丹江 157011)

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血小板微粒在血栓性疾病中的診斷價值

楊正亮，金紅，李琪，陳宏娟 綜述， 閆海潤△審校

(牡丹江醫學院紅旗醫院檢驗科，黑龍江牡丹江 157011)

血小板微粒； 血栓性疾病；血栓形成

在血栓形成過程中，血管內皮細胞的受損起著非常重要的作用。內皮受損后暴露的膠原激活人體的凝血因子引起血小板聚集，引發凝血過程。血小板在活化的同時釋放血小板微粒，血小板微粒具有促凝功能。目前，血小板微粒的檢測方法主要是通過流式細胞技術，具有非常高的精確度。血小板微粒在冠心病、腦梗死、慢性阻塞性肺疾病、糖尿病等多種血栓性疾病的發病及病程發展過程中都發揮著重要作用。現就血栓形成過程、血小板微粒的生理功能、血小板微粒的檢測方法以及血小板微粒在血栓性疾病形成過程中的作用進行論述。

1　血栓的形成過程

在人體血液中存在凝血與抗凝血兩大系統。人體正常的生理狀態下，游離在血液中的凝血因子持續被有限地激活，激活的凝血因子產生凝血酶，然后催化纖維蛋白原形成少量的纖維蛋白并在心血管內膜上沉積。與此同時，這些沉積的纖維蛋白又持續被激活的纖維蛋白溶解系統所溶解。被激活的凝血因子在發揮作用后又不斷被單核巨噬細胞吞噬。這種凝血系統和纖維蛋白溶解系統在血液中所維持的動態平衡，既維持了血液潛在的可凝固性，又保證了血液的流體狀態[1]。但是，在一些能夠觸發血液凝固的影響因素作用下，以上動態平衡很快被打破，一旦觸發了人體的凝血機制，就會導致血栓形成[2]。

2　血小板微粒的生理功能

1967 年，Wolf 率先報道了血小板微粒的存在，并且將它定義為“血小板塵埃”[3]。血小板微粒是從血小板質膜中脫落而來的細小顆粒，有完整的血小板膜蛋白以及膜脂質等結構[4]，主要在血栓的形成、促炎性反應以及調節血管功能方面發揮作用[5-6]。

血小板微粒包含著一個特殊的蛋白質子集，Kim等[7]用異硫氰酸熒光素(FITC)標記血小板微粒的膜聯蛋白V，然后把一部分用FITC標記的血小板微粒膜蛋白V再用細胞膜紅色熒光探針(DiI-C18)標記，通過標記的DiI-C18可以表明一些血小板微粒是由幼稚的血小板衍生而來。此外，用GPⅡb抗體標記所有血小板衍生的微粒，發現被GPⅡb抗體標記的微粒比被DiI-C18標記的微粒占的比例要高，這表明血小板微粒由幼稚和成熟的血小板衍生而來。

血小板微粒是無生物學活性的細胞代謝物[8]，但最近研究發現血小板微粒也可能在炎癥、血栓形成以及血管收縮功能中發揮重要作用[9]。血小板微粒濃度增高提示血液處于高凝狀態，發生靜脈血栓的風險明顯增高，患者的預后不良[10]。此外，血小板微粒是血液循環中組織因子的主要載體，組織因子是血栓形成的主要刺激物。Ramacciotti等[11]在小鼠靜脈血栓模型中發現微粒的濃度與組織因子活性有密切的聯系。含有組織因子的微粒很可能成為一種有用的血栓形成特異性生物標志物。最近的研究發現微粒可攜帶RNA和DNA。在人體外，微粒可攜帶細胞核RNA和DNA，也可以攜帶細胞質RNA和DNA，尤其是相對分子質量低的RNA。微粒可以將相對分子質量低的RNA從內皮祖細胞轉運到內皮細胞，來刺激血管的生成[12]。

在血小板微粒的生理功能中，最具有特征性的是血小板微粒可以通過提供陰離子磷脂表面和組織因子參與血液凝固。研究表明，血管壁受損傷后，血管內皮細胞脫落而導致內皮組分暴露，其中膠原、板層素、微纖維及血管性血友病因子將會引起血小板的黏附、聚集和活化反應，產生血栓素A2和內皮素，使血管呈持續收縮狀態[13]。而當血小板黏附、聚集或活化時，釋放出來的血小板激活因子的活性源自血小板微粒，血小板激活因子在其他激活途徑下也多數與血小板微粒相關[14]，這說明了血小板微粒有很強的促凝活性。此外，研究還發現存在于血小板微粒膜上的磷脂酰絲氨酸可形成陰離子磷脂，能促進凝血酶的產生并增強組織因子的催化活性，表現出對凝血反應的促進。

在臨床上，血栓的形成是心血管事件發生非常關鍵的環節，也是導致患者致死率和致殘率居高不下的直接原因[15]。在對冠狀動脈疾病發病機制的研究過程中，血小板微粒的作用正在引起臨床醫生的注意，大量的臨床試驗正在對它們之間的關系進行研究。血小板微粒可能會干擾相關組織因子的表達，組織因子是人體外源性凝血途徑的引發因子，血小板微粒通過這一途徑可引發血栓性疾病[16]。

3　血小板微粒的檢測方法

3.1顯微鏡法最原始的檢測血小板是顯微鏡法，使用電子顯微鏡可以比較直觀地看到血小板微粒的外部形態以及其內部結構，但是這種方法操作繁瑣，檢測效率不高，準確性差且檢測的精密度和分辨率不能滿足臨床診斷的要求。

3.2放射性免疫標記單抗體法放射性免疫標記的單抗體法是先把檢測標本(血清或者貧血小板血漿)離心，離心后用磷酸鹽緩沖液進行1～2次洗滌沉淀，在沉淀物中加入用125I標記的抗微粒膜上相關蛋白，待反應后再次進行洗滌，最后用計數儀或膠片曝光測洗滌沉淀物的放射劑量，從而計算出血小板微粒的含量。這種方法使用放射性碘作為標記物，由于這種放射性污染物對操作人員的健康和環境都有危害，已經逐漸被淘汰。

3.3酶聯免疫吸附試驗(ELISA)ELISA的原理是用血小板微粒與制備好的純化CD41和CD42b抗體結合，形成免疫復合物，再經過溫育和洗滌，去除未結合的抗體，加底物顯色。ELISA的敏感性和特異性都非常高，但是由于可溶性抗原對檢測結果干擾較大，容易出現假陽性或假陰性結果。

3.4流式細胞術流式細胞儀應用于醫學領域的研究是醫學發展的一個重要里程碑，流式細胞分析基于細胞自身的物理、化學特性，借助流式細胞儀的單細胞高速、精確分析技術，通過閾值、光電倍增管電壓設定、陰性對照設置、熒光補償調節以及多方式設門等操作步驟對目標細胞的理化特性進行精準分析[17]。

流式細胞技術應用于血小板微粒的檢測，是用FITC標記抗CD41a抗體，用流式細胞儀對標本進行檢測，通過高精密的熒光信號轉化系統和數據分析系統把血小板微粒的數量及濃度計算出來。這種方法最大的優點是高效快速，精密度高，避免了人為原因造成的結果偏差。此外，流式細胞儀可以對選中的細胞群進行數據分析，能有效地避免白細胞和紅細胞對檢測結果的干擾。目前，流式細胞技術已經是血小板微粒檢測應用最實用的方法。

4　血小板微粒與血栓性疾病

4.1冠心病冠心病患者由于不穩定的動脈粥樣硬化斑塊破裂、糜爛以及出血，繼而引發血小板聚集或血栓形成導致冠狀動脈狹窄的程度加劇，或者是冠狀動脈發生痙攣，導致心肌細胞供氧不足，清除心肌細胞代謝所產生的廢物的能力喪失[18]。當冠狀動脈管壁的內皮細胞層破壞后被粥樣斑塊所取代，血小板在粥樣斑塊附近發生聚集，被激活后釋放大量的凝血因子以及血小板微粒，可進一步導致冠狀動脈血管管壁狹窄甚至完全閉塞，造成心肌梗死。有研究表明：與健康患者相比，冠心病患者活化后的血小板釋放更多微粒[19]。目前對冠心病引起血小板微粒水平升高原因的研究傾向于認為與血管內皮功能失調，冠狀動脈血管產生炎性反應以及冠狀動脈內血流剪切力的改變[20]。

4.2腦梗死腦梗死也稱為缺血性腦卒中，它是由于多種原因所引起的大腦血液供應障礙，致使大腦局部組織缺血、缺氧而壞死，最終出現相應的神經功能缺失[21]。目前，臨床上最常用的牛津郡社區卒中研究分型(OCSP)標準把腦梗死分為4型：腔隙性梗死型(LACI)，部分前循環梗死型(PACI)，后循環梗死型(POCI)，完全前循環梗死型(TACI)[22]。根據腦組織缺血壞死的機制，腦梗死分為3種病理生理學類型：腦血栓形成、腦栓塞和血流動力學機制造成的腦梗死[23]。其中，血栓形成是腦梗死最常見的病理生理學類型，而動脈粥樣硬化是血栓形成的根本原因。有關對急性腦梗死患者調查結果顯示:與健康人群相比，急性腦梗死患者血液中血小板微粒濃度明顯增高[20，24]。

4.3慢性阻塞性肺疾病慢性阻塞性肺疾病是一種呼吸道和肺對有毒氣體或顆粒的慢性炎性反應，其發病機制仍然沒有被明確論述，因此臨床上對慢性阻塞性肺疾病的治療僅僅停留在對癥治療的層面。目前，慢性阻塞性肺疾病的發病率和病死率呈逐年上升趨勢，對其發病機制的研究就顯得尤為重要。對慢性阻塞性肺疾病患者血液中血小板微粒水平監測的研究發現，有些患者血液中血小板微粒升高，血液處于高凝狀態，發生血栓的風險比健康人要高[25]。這提示血小板微粒在慢性阻塞性肺疾病的發病過程中起著促炎和促凝的作用。

4.4糖尿病糖尿病是一種由于多種因素引起的以持續性處于高血糖狀態為主要特征的全身性代謝紊亂，糖尿病可以引起多個器官損害，導致眼、腎、神經、心臟和血管等組織器官的慢性進行性病變，最終可以導致器官功能缺陷甚至衰竭。糖尿病患者伴發高凝狀態、冠心病以及動脈粥樣硬化的風險非常高，通過對2型糖尿病患者血液中血小板微粒水平的監測發現[26]，2型糖尿病病史兩年以上的患者其血液中血小板微粒水平與健康人群相比有明顯差異，伴發動脈粥樣硬化的患者其血小板微粒水平的差異程度更大[27]。這些發現為通過檢測糖尿病患者血液中血小板微粒的水平來評價糖尿病患者病情嚴重程度提供了依據。

另外，根據目前的臨床研究，其他可以引起心腦血管損傷如高血壓、肺動脈高壓、房顫以及腦外傷出血等疾病都能導致血液中血小板微粒水平改變，這一變化對患者血栓形成早期預測具有非常重要的臨床價值。

5　小　　結

近年來，隨著各種心腦血管疾病發病率逐年增加以及心血管搭橋再通技術的快速發展，由此引起的血栓性疾病高發病率已逐漸成為困擾患者和醫務工作者的難題。對血栓性疾病的監測在診斷和治療中的重要性顯得尤為突出。血管內皮細胞損傷是造成血栓形成的一種原因；血小板的過度激活可以造成血小板微粒增多，也是血栓形成的一個原因。

在冠心病、缺血性腦梗死等心腦血管疾病中，血小板微粒的變化會早于CT、MRI等影像學指標的改變。因此，通過檢測血小板微粒水平的改變，可以在疾病發生的早期進行預測，為疾病的治療爭取更多時間，提高疾病的診斷和治愈率。

目前，大多數研究者認為血小板微粒與血栓性疾病的形成有密切的關系。但是，血液中血小板微粒濃度與血栓的發生風險之間是否存在線性關系，或者這兩者存在怎樣的線性關系還沒有統一的認識，需要進一步研究。血液中血小板微粒水平改變能夠反映患者處于高凝狀態，能否準確預測血栓的形成部位，有待于進一步探索。

對血小板微粒的深入研究提示血小板微粒對血栓性疾病的診斷與防治具有重要價值。當血液中血小板微粒濃度升高時，提示患者處于高凝狀態而且對患者的預后有嚴重的不良影響。此外，檢測血液中血小板微粒濃度也可作為觀察臨床藥效的方法。血小板微粒是預測血栓性疾病出現明顯臨床癥狀前的特異性生物標志物，可為臨床早期診斷、療效監測以及鑒別診斷提供重要的臨床依據。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.16.034

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