青海楤木提取物對(duì)糖尿病小鼠SOD、MDA及脾臟和胸腺指數(shù)的影響

李怡　陳湘宏

【摘 要】 目的：探討青海楤木不同溶劑萃取物對(duì)2型糖尿病小鼠模型SOD及MDA及脾臟和胸腺指數(shù)的影響。方法：以小鼠作為研究對(duì)象，通過(guò)采用鏈脲佐菌素法來(lái)建造2型糖尿病模型。將50只造模成功的小鼠隨機(jī)分為模型組、陽(yáng)性組（鹽酸二甲雙胍）、楤木正丁醇組、楤木乙酸乙酯組、楤木乙醚組，另設(shè)空白對(duì)照組。在給藥第14天取小鼠血清用ELISA法測(cè)定其超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平，同時(shí)并取脾臟、胸腺來(lái)計(jì)算臟器指數(shù)。結(jié)果：青海楤木不同溶劑萃取物均可降低MDA水平，提高血清SOD活力，尤以正丁醇組效果較為顯著（P<0.05）；楤木正丁醇提取物對(duì)小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響與模型組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。結(jié)論：青海楤木可緩解氧自由基的損害、提高脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制作用，增加2型糖尿病小鼠的免疫力。

【關(guān)鍵詞】 楤木；鏈脲佐霉素；丙二醛；超氧化物歧化酶

【中圖分類(lèi)號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【文章編號(hào)】1007-8517（2015）22-0019-02

糖尿病（diabetes mellitus，DM）是一種以血糖升高為臨床表現(xiàn)的代謝性疾病，具有發(fā)病率高、病情復(fù)雜、病程較長(zhǎng)、治愈困難等特點(diǎn)，為終身性疾病。其病理改變常常涉及到全身各個(gè)系統(tǒng)，且發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，缺乏根治性的藥物[1]。從天然植物中優(yōu)選降糖組分，對(duì)于防治糖尿病及其并發(fā)癥有重要的理論指導(dǎo)意義和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值[2]。

糖尿病患者由于糖代謝紊亂，使得體內(nèi)的活性氧活力增強(qiáng)，MDA水平升高，SOD活性降低，從而引起氧化應(yīng)激水平升高。研究發(fā)現(xiàn)，氧化應(yīng)激可造成胰島細(xì)胞功能障礙、胰島素抵抗，在糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起著關(guān)鍵的作用[3-4]。

楤木（Aralia chinensis L）為五加科楤木屬植物，在我國(guó)大部分地區(qū)均有分布[5]。在唐初時(shí)期我國(guó)就開(kāi)始用楤木的葉、皮等入藥，目前，楤木可用于治療糖尿病、腎病、胃潰瘍等[6]。研究發(fā)現(xiàn)，龍牙楤木可使由四氧嘧啶導(dǎo)致的高血糖家兔其血糖值明顯降低，具有較好的降糖效果[7]；甘肅省榆中縣所產(chǎn)楤木的根皮能明顯降低由四氧嘧啶導(dǎo)致的糖尿病大鼠模型的血脂和血糖[8]。青海楤木屬于特有種，僅在青海省的循化孟達(dá)林區(qū)有天然分布，而且是青海省唯一的一種木本蔬菜在西寧市進(jìn)行人工栽培，有望做為青海省的大量引種對(duì)象。溫度是影響楤木生長(zhǎng)的主要因素，而青藏高原所特有的氣候，如晝夜溫差大、全年低溫時(shí)間長(zhǎng)、紫外線強(qiáng)等有可能對(duì)楤木藥用成分、含量或者功效有著重要的影響[9]。因此，研究以青海楤木為研究對(duì)象，探討其降糖作用的有效部位及主要降糖成分篩選，為楤木資源開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)昆明種小鼠（18～22g）共60只，雄性，購(gòu)自甘肅蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院，合格證號(hào)；SCXK（甘）2009-0004。

1.2 藥材 楤木采自青海省循化縣孟達(dá)天然林區(qū)，由青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)教研室鑒定為高原藥食兩用植物楤木；鹽酸二甲雙胍（批號(hào)：20130731，北京中惠藥業(yè)有限公司）。

1.3 試劑 鏈脲佐菌素（批號(hào)：CAS#18883-66-4，Sigma公司），用前用0.1 mol/L檸檬酸緩沖液（pH=4.5）配成1%的鏈脲佐菌素（STZ）溶液；超氧化物歧化酶（批號(hào)：20131116，南京建成生物工程研究所）；丙二醛（批號(hào)：20131119，南京建成生物工程研究所）。其余試劑均為分析純。

1.4 儀器 瑞特GM300血糖測(cè)定儀；ADVZA2400全自動(dòng)生化分析儀（西門(mén)子）；高速冷凍離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 青海楤木降血糖部位的提取 稱取500g干燥的楤木根皮，經(jīng)研末后，用6倍體積70%的乙醇進(jìn)行回流提取，2h/次，共3次，濃縮干燥后得到乙醇粗提取物。然后用水將其溶解，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇來(lái)進(jìn)行萃取，萃取后進(jìn)行減壓回收得不同溶劑提取物。再分別在乙醚和乙酸乙酯的萃取物里加入阿拉伯膠粉5g，研磨均勻。然后再按照植物油∶水∶膠（4∶2∶1）的比例，將其配制成濃度為1g/ml的O/W混懸液。正丁醇的萃取物配成水溶液濃度為1g/ml，將三種溶液全部低溫避光保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 建立糖尿病動(dòng)物模型 將50只小鼠給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)。高糖高脂組成：62.5%普通飼料；10.0%豬油；20.0%蔗糖；5%蛋黃粉；2%膽固醇；0.5%膽酸鹽，喂養(yǎng)14d后，連續(xù)3d用鏈脲佐菌素溶液（80 mg·kg-1·d-1）進(jìn)行腹腔內(nèi)注射，來(lái)誘導(dǎo)小鼠的2型糖尿病模型[2-3]，在造模3d后禁食12h斷尾采血檢測(cè)，其空腹血糖值超過(guò)11.0 mmol/L[9]的小鼠認(rèn)為造模成功。

2.3 分組與給藥 將造模成功的50只小鼠隨機(jī)分5組，每組10只。其中1組為模型組，另外4組分別為陽(yáng)性組（鹽酸二甲雙胍0.2g/kg）、楤木正丁醇組、楤木乙酸乙酯組、楤木乙醚組，各組小鼠均每日灌胃1次，連續(xù)14d。空白對(duì)照組同模型組一樣每天灌胃用等量生理鹽水。

2.4 血糖指標(biāo)的檢測(cè) 給藥第14天時(shí)將小鼠眼球摘出取血，放置凝后于低溫下以3000r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行全血離心15min，使血清分離，對(duì)MDA和SOD水平進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定方法完全按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。另外取小鼠的胸腺和脾臟，稱重，并計(jì)算其臟器指數(shù)。臟器指數(shù)（%）=臟器質(zhì)量（g）/動(dòng)物質(zhì)量（g）×100%。

2.5 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用方差分析對(duì)多個(gè)樣本的均數(shù)進(jìn)行比較，采用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，P<0.05表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果與分析

3.1 青海楤木對(duì)小鼠血清SOD活性的影響 與模型組比，楤木不同溶劑萃取物均能使小鼠血清SOD活力有所提高，尤其以正丁醇組較好（P<0.05）。表明楤木不同溶劑萃取物可以增加2型糖尿病小鼠的活性氧清除機(jī)制。結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2 青海楤木對(duì)小鼠血清MDA水平的影響 與空白組相比，模型組小鼠的血清中MDA濃度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示實(shí)驗(yàn)小鼠2型糖尿病氧化損傷嚴(yán)重。與模型組比，楤木不同溶劑萃取物均能夠降低MDA水平（P<0.05），使其基本恢復(fù)至正常水平。表明楤木不同溶劑萃取物有一定緩解氧自由基的損害、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化的作用。見(jiàn)表2。

3.3 青海楤木不同溶劑萃取物對(duì)小鼠臟器功能的影響 與空白組相比，模型組的2型糖尿病小鼠其脾臟指數(shù)與胸腺指數(shù)明顯降低，表明2型糖尿病可使脾臟與胸腺顯著變小，導(dǎo)致免疫功能下降。楤木正丁醇組小鼠的脾臟指數(shù)與胸腺指數(shù)與模型組相比明顯增大（P<0.01），但仍未到達(dá)正常水平，顯示楤木的提取物能促進(jìn)糖尿病小鼠胸腺的生長(zhǎng)和發(fā)育，提高小鼠的免疫能力，從而使糖尿病小鼠的免疫器官和功能得以保護(hù)。見(jiàn)表3。

4 討論

通過(guò)高脂高糖飼料喂養(yǎng)小鼠輔助鏈脲佐菌素（STZ）來(lái)建造糖尿病動(dòng)物模型[6]，給藥后各組小鼠的血清MDA水平均有一定程度的降低（P<0.05），血清SOD活力均有所升高 （P<0.05），表明青海楤木不同溶劑萃取物具有一定抗氧化、降血糖作用。

脾臟和胸腺是十分重要的淋巴器官，與免疫功能密切相關(guān)，高血糖對(duì)脾臟和胸腺生長(zhǎng)發(fā)育有一定影響。用藥后發(fā)現(xiàn)，糖尿病小鼠胸腺的生長(zhǎng)發(fā)育有所促進(jìn)，可增加其免疫能力，可用來(lái)保護(hù)糖尿病小鼠的免疫器官。表明青海楤木的正丁醇提取物對(duì)糖尿病模型小鼠的免疫器官具有一定的保護(hù)作用。

實(shí)驗(yàn)研究青海楤木不同溶劑萃取物對(duì)2型糖尿病小鼠的SOD和MDA的影響，為青海楤木資源進(jìn)一步研究提供了基礎(chǔ)，對(duì)開(kāi)發(fā)青藏高原植物資源具有重大的意義，值得進(jìn)一步的研究與開(kāi)發(fā)。

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（收稿日期：2015.08.12）