HIV抗體初篩試驗陽性結果分析

周以華

(江蘇省鹽城市大豐人民醫院檢驗科　224100)

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·臨床研究·

HIV抗體初篩試驗陽性結果分析

周以華

(江蘇省鹽城市大豐人民醫院檢驗科224100)

目的通過對獲得性免疫缺陷病毒(HIV)抗體初篩試驗陽性結果分析,探討其影響因素，以提高檢測結果的準確性。方法對56例HIV抗體初篩試驗陽性血清標本,分別使用廈門新創試劑和上海科華試劑進行檢測,如兩種試劑均呈陽性或一陰一陽，需送艾滋病確認實驗室進行確認。結果56例初篩陽性血清標本,經兩種試劑復檢,均為陰性2例,均為陽性52例。廈門新創試劑與上海科華試劑陽性率比較，差異無統計學意義(χ2=0.51,P>0.05)。54例復檢陽性標本經送上級確認實驗室最終確認,陽性49例,陰性5例。結論HIV抗體初篩試驗陽性結果影響因素較多,主要與試劑的敏感度和特異度有關,操作中應嚴格執行質量控制,才能把HIV檢測工作做得更好。

HIV抗體;敏感度;特異度

艾滋病是由獲得性免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起的一種嚴重傳染性疾病，迄今仍無有效治療方法,除了行為干預等社會手段外，對住院就診患者進行HIV抗體篩查，及時發現HIV感染者是目前控制疫情的重要技術手段[1]。本文對2013年1月至2015年12月本院住院患者56例HIV抗體初篩陽性結果進行分析，現報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料56例HIV抗體初篩陽性結果標本均來自2013年1月至2015年12月本院住院患者，在輸血前四項常規例行檢查中發現，其中男44例，女12例，年齡18～63歲，中位年齡40.5歲。

1.2儀器與試劑廈門新創試劑和上海科華試劑均經過國家藥品監督管理局注冊批準，批檢合格，且在有效期內，儀器為伯樂酶標儀及上海新波生物技術有限公司生產的EFFICUTA全自動樣本前處理系統。

1.3方法根據《全國艾滋病檢測技術規范(2009年修訂版)》要求，對初篩呈陽性反應的標本，應使用原有試劑和另外一種不同原理(或廠家)的試劑重復檢測，陰性標本可以不復檢。初篩試驗采用廈門新創試劑檢測,對初篩試驗陽性血清標本用廈門新創試劑和上海科華試劑重復檢測。如兩種試劑復檢均為陰性,則報告HIV抗體陰性；如均呈陽性反應,或一陰一陽,則需送上級確認實驗室進行確認[2]。

1.4統計學處理采用SPSS19.0統計軟件進行統計分析，計數資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2　結　　果

56例初篩陽性血清標本,經兩種試劑復檢,均為陰性2例,均為陽性52例，廈門新創試劑陽性且上海科華試劑陰性2例，廈門新創試劑陰性且上海科華試劑陽性0例。廈門新創試劑與上海科華試劑陽性率比較，差異無統計學意義(χ2=0.51,P>0.05)，見表1。54例復檢陽性標本經送上級確認實驗室做免疫印跡法最終確認，陽性49例,陽性率為90.7%,陰性5例,陰性率為9.3%。

3　討　　論

目前，國內艾滋病初篩試驗室HIV抗體的檢測方法主要是酶聯免疫吸附試驗(ELISA)，此法具有敏感度高、特異度強、重復性好的特點，其試劑性能穩定、易保存、操作簡便、結果易判斷，可以適用于大規模篩查試驗，但試驗過程中影響因素較多[3]。表1結果顯示，56例初篩陽性血清標本,用兩種試劑重復檢測，均為陰性有2例。后經調查發現，1例假陽性結果是由于血清標本溶血引起。溶血對ELISA的檢測結果有直接影響，溶血標本的血清中含有血紅素基團，具有過氧化物的活性，在以HRP為標記酶的ELISA測定中，如果血清中的血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色[4]，臨床工作中，標本采集操作不規范、送檢時間延遲、強力振蕩和分離血細胞操作不慎等易造成溶血現象，當血漿游離血紅蛋白≥10 g/L時會出現HIV抗體假陽性[5]。因此，在日常工作中，對于溶血標本，應加強與臨床科室聯系，分析溶血原因，必要時建議重新采集標本送檢，或在報告單上注明溶血程度，以防止不必要的糾紛，同時對采血人員加強技能培訓，對送檢人員進行崗前培訓，以避免溶血。另1例是由于洗板不徹底導致非特異蛋白物質吸附于微孔內而造成假陽性結果。標本采集后應在室溫下放置1～2 h，待血液凝固后以3 000 r/min離心10 min，使血清中纖維蛋白原充分分離，因為纖維蛋白原對微反應板孔有一定的吸附作用，易造成假陽性結果。分離后的血清標本應及時測定，對于無法立即測定的標本，需在2～8 ℃保存，超過1周以上，血清標本需保存在-20 ℃，以防止細菌污染(因細菌分泌的過氧化物酶可導致假陽性結果)。

ELISA操作中，洗板是最主要的關鍵技術，血清中殘留的纖蛋白原，或洗滌液析出的結晶使洗板機兩排針孔全阻塞或半阻塞狀態，造成未結合標記酶洗脫不徹底，易產生假陽性[6-7]。本室使用的是上海新波生物技術有限公司EFFICUTA全自動樣本前處理系統，它使血清標本的加樣、孵育及顯色等一系列操作因素得以自動化，降低了差錯率。在日常工作中，每天應保持儀器的洗板頭清潔，管道通暢，清洗液定時更換，才能保證儀器的正常運行。因此，實驗室必須具有完善的質量控制程序，對影響實驗結果的諸多因素進行控制，才能獲得準確的檢測報告[8]。

隨著國家對艾滋病的監測越來越重視，對艾滋病初篩實驗室檢測HIV抗體的敏感度和特異度的要求也越來越高[9]，HIV抗體檢測適用于HIV感染窗口期后至艾滋病患者死亡的整個過程，ELISA檢測HIV抗體是最常用的實驗室診斷方法。自從1985年第一代ELISA試劑使用純化的裂解HIV作為包被抗原，存在較多的假陽性，其敏感性和特異性分別為97.2%和70.0%，窗口期為6～12周[10]。1990年第二代試劑產生，采用基因工程的重組或人工合成肽為包被抗原，主要包被gp24、gp36、gp41、gp120,能同時檢測HIV-1和HIV-2，特異性明顯提高。1994年，美國研制出使用雙抗原夾心法的第三代試劑，由于能同時檢測IgM抗體，因此可以縮短檢測窗口期4～5 d，同時敏感性也有所提高[11]。第四代試劑則在第三代的基礎上增加了P24抗原的檢測，用HIV抗原和抗P24抗體同時包被反應板，檢測血清中的HIV抗體和P24抗原，進一步縮短了窗口期，時間為4～5 d，但由于同時把抗原和抗體包被在反應板上，存在互相干擾的可能，出現了第二窗口期[12]。

目前，由于試劑檢測成本原因，本室所用兩種不同廠家的ELISA檢測試劑均屬于雙抗原夾心法(第三代試劑)，不同廠家生產的試劑之間存在一定的差異，選擇時主要考慮它的敏感度和特異度，在更換試劑廠家時必須對新試劑進行評估，更換試劑批號時需重新制作質控圖。表1結果顯示,兩組試劑陽性率比較，差異無統計學意義(P>0.05)，說明二者在檢測HIV抗體方面程度一致性好，故廈門新創試劑和上海科華試劑均可作為初篩試劑，由于廈門新創試劑比上海科華試劑檢測的HIV抗體陽性數多2例，故選擇廈門新創試劑作為初篩試劑比選上海科華試劑更合適，可以減少漏診。其原因可能為不同廠家生產的試劑盒，由于包被抗原或抗體純度及生產工藝不同，導致結果不同。而把上海科華試劑作為另外一種復檢試劑，也是合適的，可以相對增加其特異度。54例復檢陽性標本經送上級確認實驗室最終確認陽性49例,陰性5例。造成假陽性結果的原因多數尚不清楚，一些含有針對HLA抗原的抗體和患有自身免疫性疾病(如系統性紅斑狼瘡、風濕病),寄生蟲病及某些病毒性肝炎患者的血清標本容易出現假陽性[13-14]。因此，根據《全國艾滋病檢測技術規范(2009年修訂版)》要求，對初篩呈陽性反應的標本，應使用原有試劑和另外一種不同原理(或廠家)的試劑重復檢測，以增加敏感度，提高特異度，減少漏診和降低費用。

綜上所述，本研究通過對56例初篩陽性血清標本的回顧性分析，探討了HIV抗體在檢測過程中的諸多影響因素。在選擇初篩診斷試劑時，既要保證其敏感度高，又要兼顧特異度,工作中要加強質量控制，嚴格按照操作規程進行，才能減少假陽性結果的發生，提高檢測結果的準確性。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.17.051

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