黃芪顆粒對哮喘患兒Treg和Th17細胞的影響作用*

余德豹，周國忠，吳云路，盧　韜

(紹興市人民醫院/浙江大學紹興醫院臨床檢驗中心，浙江紹興 312000)

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黃芪顆粒對哮喘患兒Treg和Th17細胞的影響作用*

余德豹，周國忠△，吳云路，盧韜

(紹興市人民醫院/浙江大學紹興醫院臨床檢驗中心，浙江紹興 312000)

摘要:目的探討黃芪顆粒對哮喘患兒CD4+CD25+Foxp3+調節性T細胞(Treg細胞)和輔助性T細胞17(Th17細胞)的影響作用，為臨床診療提供參考。方法選取2013年7月至2014年5月該院收治的典型初發哮喘患兒60例，隨機分為黃芪組(30例)和對照組(30例)，對照組采用普米克都保治療，黃芪組在普米克都保治療的基礎上加用黃芪顆粒。觀察兩組治療療效和外周血Treg細胞及Th17細胞的變化。結果治療前兩組Treg細胞及Th17細胞百分比比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；與治療前比較，治療后兩組Treg細胞百分比均明顯升高，Th17細胞百分比均明顯降低，差異均有統計學意義(P<0.05)；且治療后黃芪組與對照組Treg細胞及Th17細胞百分比比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。黃芪組治療總有效率高于對照組，但差異無統計學意義(P>0.05)。結論黃芪顆粒有著調節Th17細胞和Treg細胞平衡的作用，對哮喘的治療有一定的效果，并且黃芪顆粒和西藥聯合使用效果更顯著。

關鍵詞:支氣管哮喘；黃芪顆粒；CD4+CD25+Foxp3+調節性T細胞；輔助性T細胞17

支氣管哮喘是兒童時期常見的反復發作的慢性疾病，是以嗜酸性粒細胞、肥大細胞、T淋巴細胞等炎性細胞浸潤及細胞組分參與的氣道慢性炎性疾病，近年來其發病率呈上升趨勢，且發病年齡日趨小齡化，嚴重影響小兒的生長發育和身心健康[1]。CD4+CD25+Foxp3+調節性T細胞(Treg細胞)和輔助性T細胞17(Th17細胞)屬于新發現的CD4+T淋巴細胞亞群，Treg細胞具有免疫抑制作用，而Th17細胞具有強致炎活性，兩者在功能上相互拮抗，兩者平衡可維持免疫內環境的穩定。近年來有研究發現，Treg細胞和Th17細胞在哮喘的發病機制中扮演著重要角色，彌補了由輔助性T細胞2(Th2細胞)所介導的哮喘機制的不足，從而為哮喘發病機制的研究提供了新方向[2]。黃芪顆粒是補中益氣中藥，含有黃芪皂苷、黃芪多糖和多種微量元素等，是一種具有免疫調節功能的中成藥，可降低患者氣道高反應性，調節患者免疫功能，從而對支氣管哮喘有一定的治療作用。但有關黃芪顆粒是否對哮喘患兒Treg細胞和Th17細胞產生影響的文獻報道不多。筆者采用黃芪治療哮喘未控制患兒，療效滿意?，F報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料2013年7月至2014年5月于本院小兒科哮喘專病門診就診及住院的典型初發哮喘患兒60例，男28例，女32例；年齡5～14歲，平均(8.80±2.56)歲；診斷均符合中華醫學會兒科學分會呼吸學組制訂的《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》哮喘診斷標準[3]。所有患兒就診時檢測肺功能，進行兒童哮喘控制測試(C-ACT)，并根據臨床癥狀、肺功能情況給予嚴重程度和控制水平分級。按《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》分級治療原則[3]，將納入的所有受試者按隨機數字表法分為兩組：A治療組(對照組)30例，其中男16例，女14例；B治療組(黃芪組)30例，其中男12例，女18例。患兒的監護人均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1治療方法對照組單純用普米克都保行規范化的治療；黃芪組在對照組的基礎上，每日加服黃芪顆粒，飯后開水沖服，每次4 g，每日2次。

1.2.2檢測方法Treg細胞和Th17細胞均采用FC500流式細胞儀(美國Beckman Coulter公司)進行分析，在治療前后各采乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝血2 mL進行細胞計數，按試劑盒說明書進行檢測。

1.2.3療效判定標準與觀察指標顯效：用藥1周內咳嗽消失；有效：用藥1～2周咳嗽消失；無效：用藥2周以上，仍有咳嗽。總有效率=(顯效例數+有效例數)/總例數，并統計兩組患兒氣喘、咳嗽及哮鳴音消失時間。

2結果

2.1兩組臨床癥狀消失時間比較兩組哮喘患兒氣喘、咳嗽和哮鳴音消失時間比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。

2.2兩組臨床療效比較治療后兩組顯效率和總有效率比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，見表2。

2.3兩組外周血T淋巴細胞水平比較Treg細胞和Th17細胞檢測結果，見圖1(見《國際檢驗醫學雜志》網站主頁“論文附件”)。治療前，兩組Treg細胞及Th17細胞百分比比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；與治療前比較，治療后黃芪組與對照組哮喘患兒Treg細胞百分比均明顯上升，Th17細胞百分比均明顯下降，差異均有統計學意義(P<0.05)。治療后，兩組患兒外周血Treg細胞及Th17細胞百分比比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。見圖2。

3討論

哮喘的發病機制十分復雜，Th2細胞占優勢的Th1/Th2型免疫應答失衡，是哮喘發病的一個重要免疫學機制。哮喘患者Th1型免疫反應減弱而Th2型免疫反應異常增強，出現以產生干擾素(IFN)為標志的Th1細胞反應低下，而Th2細胞分泌的白細胞介素(IL)等細胞因子則促進變應原特異的免疫球蛋白E(IgE)增加和氣道嗜酸性粒細胞、肥大細胞浸潤，導致氣道慢性炎癥和氣道高反應性[4]。但這一理論不能完全闡明哮喘的發病機制，新近研究顯示Treg細胞和Th17細胞也參與了哮喘的病理過程，Treg細胞具有免疫抑制作用，其通過分泌白細胞介素-10(IL-10)和轉化生長因子-β(TGF-β)發揮作用，抑制T淋巴細胞增殖及Th1、Th2的細胞因子反應，從而阻止哮喘的發生。Th17細胞屬于CD4+T淋巴細胞新亞群，其產生的白細胞介素-17(IL-17)能有效地介導中性粒細胞動員的興奮過程，從而有效地介導支氣管組織的炎性反應，加重哮喘癥狀[5-6]。此外，有研究顯示哮喘機體Treg/Th17細胞功能發生失衡，表現為Treg細胞功能減弱、Thl7細胞功能增強[7-8]。因此，提出Treg細胞和Th17細胞的免疫失衡也是哮喘發病的重要機制之一。

黃芪顆粒是中醫名方之一，對機體免疫系統具有顯著的調節作用。黃芪顆粒具有益氣固表、止汗功效，常用于表虛自汗，易感風邪所致病癥，能補肺健脾,增強抵御外邪的能力。臨床上已經將其應用于多種疾病的輔助治療，并取得了一定療效。既往研究顯示，黃芪顆?？赏ㄟ^影響Thl/Th2細胞因子而發揮治療哮喘的作用[9]。此外，Treg/Th17在哮喘發病中也起到重要作用，因此關于黃芪顆粒是否可調節哮喘機體Treg/Th17細胞水平的問題值得研究。

在筆者的研究中，將哮喘患兒隨機分為兩組，對照組采用普米克都保治療，黃芪組采用普米克都保聯合黃芪顆粒治療。普米克都保的主要成分為布地奈德干粉劑，具有良好的耐受性，吸入后10%的藥物進入肺內，約80%在肝臟內被首次代謝。它有明顯的抗過敏、抗炎作用，可抑制支氣管痙攣，同時可降低組胺及乙酰膽堿引起的氣道高反應性，抑制運動誘發哮喘，其引起的全身不良反應要明顯低于相同有效劑量下的其他吸入激素。有研究表明，布地奈德可以通過下調Th17及其細胞因子，上調Treg及其細胞因子，從而糾正Th17/Treg失衡,使之向Treg傾斜，有效抑制Th17的過度免疫反應，從而發揮抗炎、解痙、平喘作用[10-11]。本研究結果顯示，對照組患兒臨床治療總有效率為80.00%，臨床癥狀有所緩解，且治療后Treg細胞百分比明顯升高、Th17細胞百分比明顯降低(P<0.05)，說明與上述研究結果相符。當在普米克都保的基礎上加用黃芪顆粒治療哮喘時，結果顯示黃芪組患兒臨床治療總有效率為86.67%，略高于對照組，但差異無統計學意義(P>0.05)，可能是由于采用黃芪顆粒治療的時間太短，使效果不夠明顯。但從細胞分子水平上觀察，治療后黃芪組Treg細胞百分比明顯升高，Th17細胞百分比明顯降低(P<0.05)，且治療后黃芪組與對照組Treg細胞及Th17細胞百分比比較差異均有統計學意義(P<0.05)。說明黃芪顆粒能在短時間內有效地調節Treg細胞和Th17細胞水平，更重要的是可以看出黃芪顆粒聯合普米克都保治療能更好地調節Treg/Th17免疫失衡,治療哮喘的效果更為顯著。其分子機制可能是黃芪顆粒通過某種因子一方面抑制Th17細胞的表達，使哮喘患兒Th17細胞減少，另一方面促進Treg細胞增殖和分化，使兩者達到平衡，從而維持機體免疫內環境的穩定，減少哮喘的發作。

綜上所述，黃芪顆粒對哮喘患兒Treg細胞和Th17細胞具有重要的影響作用，可以通過升高Treg細胞水平，下調Th17細胞水平，使Treg/Th17細胞達到平衡。其與普米克都保聯合應用的療效更佳，可減少激素的用量，從而大大減少激素引起的不良反應的發生，這為臨床治療哮喘提供了一條更為有效的途徑。

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基金項目：浙江省衛計委科技項目(JSW2013-B031)。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.029

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)05-0649-02

(收稿日期：2015-09-24)

△通訊作者,E-mail：zhougzhong@sohu.com。

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