不同方法檢測血小板的準確性探討

李　琳，何　超，張　磊，李　偉，李燕平

(蘭州大學第一醫院檢驗中心，甘肅蘭州 730000)

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不同方法檢測血小板的準確性探討

李琳，何超，張磊，李偉，李燕平

(蘭州大學第一醫院檢驗中心，甘肅蘭州 730000)

摘要:目的探討電阻抗法及光學法檢測血小板的準確性，總結出提高血小板計數準確性的方法。方法收集300例住院患者乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝靜脈血標本，采用電阻抗法、光學法及手工法檢測血小板計數；觀察電阻抗法血小板計數的直方圖，同時推制血片染色，人工鏡檢觀察血小板形態；以手工法血小板計數為金標準，比較電阻抗法和光學法血小板計數的準確性。結果300例患者血液標本中，檢出血小板形態異常86例(28.67%)，主要為大血小板共檢出81例，占94.19%；血小板異常形態標本中，與手工法測定血小板計數比較，電阻抗法血小板計數較低，差異有統計學意義(t=5.379，P=0.000 0)；光學法血小板計數也較低，但差異無統計學意義(t=0.578，P=0.563 8)。檢出血小板形態正常214例，占71.33%；血小板正常形態標本中，與手工法測定血小板計數比較，電阻抗法與光學法血小板計數均較低，但差異均無統計學意義(t=0.566，P=0.571 5；t=1.379，P=0.163 0)。結論血小板形態正常時，電阻抗法和光學法計數血小板與手工法結果基本一致，當血小板形態異常時，電阻抗法計數結果較手工法低，而光學法血小板計數結果與手工法無明顯差異，因此，當電阻抗法計數血小板直方圖提示異常時，應采用光學法或手工法進行復查。

關鍵詞:血小板計數；電阻抗法；光學法；手工法；血小板形態異常

血小板計數是臨床常用的檢驗項目之一，其結果的準確性對于出血性疾病和血栓性疾病的診斷和治療起著決定性作用，與疾病的發生、發展和預后有著密切關系，也是臨床醫生決定是否對血小板減少患者輸注血小板的一個重要指標。現如今，隨著醫學技術的不斷發展，多種全自動血細胞分析儀已經普遍應用于各臨床實驗室，血小板計數檢測以經典的電阻抗法應用最為廣泛，但由于其影響因素較多，存在大血小板、血小板聚集、巨大血小板等因素的干擾，導致其計數結果不穩定。因此，準確計數血小板在臨床診療工作中顯得十分重要。本研究旨在探討電阻抗法和光學法計數血小板的準確性，以彌補電阻抗法計數血小板的不足之處，為臨床提供準確的血小板計數結果。

1材料與方法

1.1標本來源選取本院2015年1月6日至2015年1月21日住院患者300例，采集患者乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝靜脈血2 mL，所有檢驗在標本采集后2 h內完成。

1.2儀器與試劑日本Sysmex XE-2100全自動血細胞分析儀及原裝配套試劑，日本Sysmex XS1000i全自動推片染片儀及配套試劑，日本Olympus雙目顯微鏡，牛鮑改良血細胞計數板，靜脈血EDTA-K2真空抗凝管、20 μL微量采血管，血小板稀釋液按《全國臨床檢驗操作規程》(第3版)的要求配制[1]。

1.3方法

1.3.1電阻抗法和光學法血小板計數使用Sysmex XE-2100全自動血細胞分析儀，質控與標本檢驗過程嚴格按照儀器操作規程的要求進行，以保證計數結果的準確性。其中電阻抗法采用儀器第3模式(CBC+DIFF)進行檢測，此方法可計數體積2～40 fL的血小板；光學法采用儀器第4模式(CBC+DIFF+RET)進行檢測，此方法可計數所有體積的血小板。

1.3.2手工法血小板計數取一清潔試管，加入0.38 mL血小板稀釋液，同時用微量吸管吸取儀器檢測法的同一待測標本20 μL，將其與稀釋液混勻，靜置3～5 min，待紅細胞完全溶解后再搖勻；然后取10 mL混懸液充池，室溫靜置10～15 min待血小板完全下沉后，由兩名資深檢驗人員采用雙盲法進行計數，每份標本平行計數4次，取平均值，記錄結果。

1.3.3血小板形態判斷采用血片染色人工鏡檢觀察血小板形態，以《臨床基礎檢驗(第4版)》中血小板形態檢測為判斷標準[2]。

2結果

2.1血小板形態異常結果檢出86例(28.67%)患者血小板形態異常，其中以大血小板為主，共81例，占94.19%；血小板聚集3例，占3.49%；巨大血小板2例，占2.32%。檢出血小板形態正常214例(71.33%)。

2.2不同檢測方法測定血小板形態異常標本的血小板計數比較86例血小板形態異常患者標本手工法血小板計數為(113±35)×109/L，電阻抗法血小板計數為(87±31)×109/L，光學法血小板計數為(110±33)×109/L。與手工法比較，電阻抗法血小板計數較低，差異有統計學意義(t=5.379，P=0.000 0)；光學法血小板計數也較低，但差異無統計學意義(t=0.578，P=0.563 8)。

2.3不同檢測方法測定血小板形態正常標本的血小板計數比較214例血小板形態正常患者標本手工法血小板計數為(127±38)×109/L，電阻抗法血小板計數為(125±35)×109/L，光學法血小板計數為(122±36)×109/L。與手工法比較，電阻抗法與光學法血小板計數均較低，但差異均無統計學意義(t=0.566，P=0.571 5；t=1.379，P=0.163 0)。

3討論

目前，血小板計數的方法主要有電阻抗法、光學法、手工法和流式細胞術法等[2]。其中電阻抗法和光學法是Sysmex XE-2100全自動血細胞分析儀的常用血小板檢測方法。電阻抗法運用RBC/PLT通道，采用液路聚焦鞘流/DC檢測法，在同一通道內通過顆粒大小對血小板和紅細胞加以區分。但血小板由于體積小，特別容易發生黏附聚集和變性破壞[3]，在計數時會被誤認為紅細胞，導致結果偏低。而光學法專用RET/PLT-O通道，利用聚次甲基和噁嗪兩種熒光染料，透過細胞膜，對細胞內DNA、RNA染色。在激光流式通道內，663 nm波長的激光照射在細胞上，產生前向散射光、側向散射光，側向熒光進行鑒別計數[4]。該方法對血小板的形態鑒別能力強，可避免如紅細胞碎片、小紅細胞和大血小板等因素的干擾[5-6]。手工法是世界衛生組織推薦的參考方法[7]，應用于我國臨床，采用10 g/L草酸銨液作溶血稀釋劑，在相差顯微鏡下計數血小板。該方法簡單，但也存在不足之處，如充池是否均勻，不可避免的人為誤差及計數血小板量少等。當前，國際上使用流式細胞術作為血小板計數參考方法[8]，采用此方法測定經單克隆抗體(CD41/61)標記的全血血小板和紅細胞比值，并根據標準法測量得出的紅細胞數來計算血小板參考值，但由于其操作繁瑣、儀器及試劑價格昂貴至今無法廣泛應用于臨床。

本研究顯示，當血小板形態出現異常時，電阻抗法血小板計數結果較手工法和光學法血小板計數結果低，且與手工法比較差異有統計學意義(P<0.05)；而當血小板形態及紅細胞形態正常時，電阻抗法和光學法血小板計數雖然較手工法血小板計數結果低，但差異均無統計學意義(P>0.05)。這表明在血小板形態出現異常時，采用電阻抗法檢測血小板的結果較真實結果低，不能很好地反映人體血小板狀態，易導致誤診。國內相關研究也證實了這一點，李筱梅等[9]報道采用光學法的血細胞分析儀檢測低值血小板標本，其結果與手工法一致性良好，且抗干擾能力強，偏差明顯低于電阻抗法。

當前普遍使用的儀器檢測法為電阻抗法，此方法試劑成本低廉，可應用于大批量標本，但在計數血小板時易受血小板形態的干擾，尤其是對血小板明顯減少和(或)形態異常者，使結果誤差較大[10]。而光學法正好彌補了這一缺陷，對細胞碎片、小紅細胞、大血小板和乳糜微粒等抗干擾能力強。因此，為了保證血小板計數結果的準確性，采用電阻抗法的血細胞分析儀出現血小板直方圖異常或儀器報警及結果異常時，應采用光學法或手工法進行復查。

參考文獻

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[10]叢玉隆，樂家新．再論血細胞分析技術進展與臨床應用[J]．中華檢驗醫學雜志，2007，30(4)：365-370．

(收稿日期：2015-12-11)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.057

文獻標識碼：B

文章編號：1673-4130(2016)05-0697-02