人參皂苷對波動性高血糖大鼠腎臟Nrf2/ARE信號通路的影響*

王 丹，黃 琦

（1．浙江中醫(yī)藥大學(xué)，杭州 310053；2．浙江省中醫(yī)院，杭州 310000）

·實驗研究·

人參皂苷對波動性高血糖大鼠腎臟Nrf2/ARE信號通路的影響*

王 丹1，黃 琦2

（1．浙江中醫(yī)藥大學(xué)，杭州 310053；2．浙江省中醫(yī)院，杭州 310000）

[目的]探討人參皂苷對波動性高血糖大鼠腎臟氧化應(yīng)激及轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2（Nrf2）/應(yīng)答元件（ARE）信號通路的影響。[方法]實驗以32只雄性SD大鼠為研究對象，分為正常對照組（NC組，n=8只）和波動性高糖模型組（n=24只），高脂飼料喂養(yǎng)模型組2周后，鏈脲佐菌素（STZ）35 mg/kg腹腔注射誘導(dǎo)建立糖尿病大鼠模型，錯時注射葡萄糖和胰島素，建立血糖波動組模型，2周后，將波動性高糖模型組隨機(jī)分為3組，分別為波動性高血糖組（FHG組，n=8），人參皂苷低劑量組（LG組，n=8），人參皂苷高劑量組（HG組，n=8）。予人參皂苷低高劑量[14、56 mg/（kg·d）]干預(yù)相對應(yīng)的模型組8周后，切取腎臟組織，用蛋白免疫切跡方法（Western blot）和實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測血紅素加氧酶-1（HO-1）、Nrf2、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）蛋白及mRNA表達(dá)。[結(jié)果]與NC組相比，F(xiàn)HG組Nrf2的蛋白及mRNA的表達(dá)明顯增加（P＜0．05），而HO-1、γ-GCS的表達(dá)明顯降低（P＜0．05）；但人參皂苷治療后，LG組及HG組HO-1、γ-GCS、和Nrf2蛋白及mRNA表達(dá)明顯增高（P＜0．05）。[結(jié)論]人參皂苷能夠進(jìn)一步促進(jìn)波動性高糖狀態(tài)下Nrf2下游HO-1、γ-GCS蛋白及mRNA表達(dá)，增加抗氧化蛋白的含量，提高機(jī)體的抗氧化應(yīng)激能力，對波動性高糖所致的腎臟損傷有一定的保護(hù)作用。

人參皂苷；Nrf2/ARE信號通路；波動性高血糖；血紅素加氧酶-1；γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶

糖尿病腎病是糖尿病患者常見的微血管并發(fā)癥，同時也是致死的主要原因，高血糖導(dǎo)致的腎臟細(xì)胞凋亡參與了糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展[1]。近年來研究發(fā)現(xiàn)波動性高血糖較穩(wěn)定性高血糖對糖尿病患者腎臟的危害性更大[2]。長期暴露于高糖環(huán)境中使腎臟組織發(fā)生各種代謝變化，負(fù)反饋調(diào)節(jié)上游的調(diào)控因子，抵消部分糖毒性，而波動性高糖可能削弱這種適應(yīng)能力，使糖毒性更加明顯。研究認(rèn)為，轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2（Nrf2）/應(yīng)答元件（ARE）信號通路可減少高糖環(huán)境下活性氧的產(chǎn)生，發(fā)揮其抗氧化應(yīng)激損傷作用[3]，在糖尿病并發(fā)血管病變的防治中發(fā)揮重要作用。隨著研究的不斷深入，中藥在抗氧化應(yīng)激中具有獨特優(yōu)勢[4]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究認(rèn)為，人參皂苷作為人參的提取物，具有抗氧化及清除自由基的作用。血紅素加氧酶-1（HO-1）、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）是Nrf2/ARE信號通路調(diào)節(jié)的抗氧化蛋白，建立波動性高血糖大鼠模型并用傳統(tǒng)中藥人參皂苷進(jìn)行干預(yù)，研究Nrf2/ARE下游基因HO-1，γ-GCS的表達(dá)，以探討在防治糖尿病腎臟病變中的作用。

1 材料與方法

1.1 主要藥品和試劑 人參皂苷粉末（浙江省中醫(yī)院自制，制劑批準(zhǔn)號：201308190），超短效胰島素諾和銳（丹麥諾和銳），鏈尿佐菌素（STZ），（Sigma公司），自制高脂飼料：蔗糖10%、蛋黃10%、豬油10%、膽固醇0．5%、基礎(chǔ)飼料69．5%；HO-1、γ-GCS、Nrf2引物（Takara公司），兔抗HO-1多克隆抗體、兔抗γ-GCS多克隆抗體和兔抗Nrf2多克隆抗體（CST公司），RT-PCR反應(yīng)試劑盒（TaKaRa公司），Trizol裂解液（Invitrogen公司）。

1.2 主要儀器 血糖試紙及血糖儀（德國羅氏），Step one plus PCR儀（美國生物應(yīng)用系統(tǒng)公司）。

1.3 動物 6～8周齡SD雄性大鼠32只，體質(zhì)量160～180 g，由上海西普爾必凱實驗動物有限公司提供[SCXK（滬）2008-0016]。溫度（20±2）℃，相對濕度50%～60%，光照12 h明暗交替，飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗研究中心[SYXK（浙）2008-0115]。

1.4 糖尿病模型制備 正常對照組（NC組n=8）予普通飼料喂養(yǎng)；糖尿病模型組（n=24）予高脂飼料喂養(yǎng)2周，所有大鼠禁食不禁水16 h，糖尿病模型組用小劑量STZ 35 mg/kg腹腔注射誘導(dǎo)建立糖尿病大鼠模型，造模1周后，禁食不禁水16 h，測空腹血糖15～20 mmol/L為模型制作成功。

1.5 血糖波動模型制備 將糖尿病模型組定時給予腹腔注射250 g/L葡萄糖溶液0．375 g/（kg·d），錯時30 min后給予腹腔注射超短效胰島素類似物諾和銳，造成1 d中血糖值大幅度波動模型，使其血糖值在高血糖和低血糖間反復(fù)漂移，注射后30 min測血糖，2周后，將波動性高糖模型組按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為3組，分別為波動性高血糖組（FHG組，n= 8），人參皂苷低劑量組（LG組，n=8）、人參皂苷高劑量組（HG組，n=8）。治療組分別予人參皂苷[14、56 mg/（kg·d）]灌胃，正常對照組及波動性高糖組予等量生理鹽水灌胃8周作對照，每日2次。

1.6 標(biāo)本采集 每周用血糖儀測尾尖血血糖，稱其體質(zhì)量，并計算水和食物的攝入量。至實驗結(jié)束，大鼠禁食12 h，切取腎臟組織，放入液氮罐中保存，用于蛋白免疫切跡方法（Western blot）及實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測。

1.7 Western blot檢測HO-1、Nrf2、γ-GCS蛋白表達(dá)水平 從液氮罐中取出腎臟組織，放入液氮預(yù)冷過的研缽中，加入蛋白酶抑制劑+裂解液（1∶100）適量，研磨至液體澄清；吸取全部液體放入離心管中，12 000 r/min，4℃，離心15 min，提取細(xì)胞總蛋白；采用考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白濃度；吸取蛋白樣品，以60 V電壓電泳，當(dāng)條帶跑至分離膠和濃縮膠分界面時改為90 V電泳，時間2～4 h；聚偏二氟乙烯（PVDF）轉(zhuǎn)膜（250 MA，2．5 h）；將PVDE膜浸于封閉液中，4℃封閉過夜；取出膜，與一抗接觸，室溫旋轉(zhuǎn)孵育2～3 h，用洗膜緩沖液（TBST）沖洗3次，同樣的方法二抗室溫孵育1～2 h后，TBST洗3次；加入增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法（ECL）試劑，將PVDF膜放在Chemi Doc XRS上采集圖像。

1.8 RT-PCR檢測HO-1、NRF2、γ-GCS mRNA表達(dá) 由基因庫查的所需mRNA的核苷酸序列，PrimerPremier計算機(jī)軟件輔助引物設(shè)計，引物由TakaRa公司設(shè)計并合成。HO-1上下游引物分別為：5’-GGAACTTTCAGAAGGGCCAGGT-3′和5’-TGCAGCTCTTCTGGGAAGTAGACA-3′,γ-GCS上下游引物分別為：5’-TGTAGTGCGAGGAAGAGGTATGA-3′和5’-GGAGGGAAAGGAGAGGAAGG-3′,NRF2上下游引物分別為：5’-ATTGTGCTTGTGAGGGTGTTTC-3′和5’-CCCTTCCTGTCTTTTCTTCTCTCT-3′。從液氮中取出腎臟組織冰上迅速研碎后，用Trizol法提取總RNA；吸取1μL抽提的RNA在Nanodropl000上進(jìn)行RNA濃度測定，用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，檢測RNA的完整性；取RNA按照逆轉(zhuǎn)錄體系逆轉(zhuǎn)錄為cDNA；取cDNA 2μL及HO-1、γ-GCS上下游引物各0．4 μL，SYBRPremix Ex TaqTM（2×）10 μL，Rox Reference Dye II（50×）0．4μL，滅菌雙蒸水6．8μL（擴(kuò)增條件為：95℃、5 min，94℃、1 min，1 min，72℃、1 min，32個循環(huán)后，72℃、8min。2%瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳，然后置于Bio-Rad Gel凝膠圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行吸光度掃描分析，以GAPDH作為內(nèi)參照，用目的基因的吸光度與GAPDH吸光度的比值分析目的基因的相對表達(dá)水平。）

1.9 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 18．0統(tǒng)計軟件，數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較如果方差齊采用LSD，方差不齊采用Tamhane’sT2。P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 人參皂苷對HO-1、Nrf2和γ-GCS蛋白的表達(dá) Westernblot結(jié)果顯示，與NC組相比，F(xiàn)HG組Nrf2蛋白表達(dá)增高（P＜0．05），HO-1、γ-GCS蛋白表達(dá)下降（P＜0．05）；與FHG組相比，LG組及HG組HO-1、γ-GCS和Nrf2蛋白表達(dá)均明顯增高（P＜0．05）。見圖1、圖2。

圖1 各組大鼠腎臟HO-1、Nrf2及γ-GCS蛋白的表達(dá)

2.2 人參皂苷對HO-1、Nrf2和γ-GCS mRNA的表達(dá) RT-PCR結(jié)果顯示，與NC組相比，F(xiàn)HG組Nrf2 mRNA表達(dá)增高（P＜0．05），HO-1、γ-GCS mRNA表達(dá)下降（P＜0．05）；與FHG組相比，LG組及HG組HO-1、Nrf2和γ-GCS mRNA表達(dá)均明顯增高（P＜0．05），見表1、圖3。

圖2 各組大鼠腎臟HO-1、Nrf2及γ-GCS蛋白表達(dá)的相對含量

表1 各組大鼠HO-1、Nrf2、γ-GCS mRNA的表達(dá)量(s)

表1 各組大鼠HO-1、Nrf2、γ-GCS mRNA的表達(dá)量(s)

注：與NC組相比，*P＜0．05；與FHG組相比，#P＜0．05。

組別 n HO-1 Nrf2 γ-GCS NC組 8 0．65±0．04 0．42±0．06 0．64±0．03 FHG組 8 0．47±0．04* 0．63±0．03* 0．53±0．05* LH組 8 1．13±0．12#0．83±0．04#1．24±0．03#HG組 8 1．46±0．08#1．04±0．12#1．48±0．07#

圖3 HO-1、Nrf2、γ-GCS mRNA表達(dá)水平

3 討論

氧化應(yīng)激是指機(jī)體組織或細(xì)胞內(nèi)氧自由基生成增加和（或）消除能力降低，活性氧簇（ROS）的產(chǎn)生與抗氧化防御系統(tǒng)的清除失衡，導(dǎo)致機(jī)體組織細(xì)胞及蛋白的損傷。ROS在糖尿病發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用[5]，在高糖狀態(tài)下，蛋白激酶C活性增強(qiáng)，多元醇途徑、己糖胺通路、晚期糖基化終末產(chǎn)物途徑等旁路代謝過度激活，這些不同代謝途徑引起細(xì)胞內(nèi)煙酰胺嘌呤二核甘磷酸（NADPH）氧化產(chǎn)生的ROS，可致體內(nèi)氧自由基大幅增加并產(chǎn)生過氧化反應(yīng)，同時使機(jī)體的抗氧化防御能力出現(xiàn)下降趨勢，因此在機(jī)體內(nèi)表現(xiàn)為氧化能力大大超過了抗氧化能力，從而誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)[6]。研究表明，氧化應(yīng)激是糖尿病發(fā)展的重要機(jī)制[7]，F(xiàn)orbes Josephine等[8]研究認(rèn)為氧化應(yīng)激是糖尿病腎病發(fā)生的主要原因。其通過線粒體電子傳遞鏈、葡萄糖自氧化和多元醇等途徑，使ROS含量增加。Chang等[9]研究發(fā)現(xiàn)，急性和慢性血糖波動均可增加2型糖尿病患者氧化應(yīng)激和慢性炎癥反應(yīng)。波動性高血糖較穩(wěn)定性高血糖刺激機(jī)體產(chǎn)生較多ROS，抗氧化能力下降，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂。氧化應(yīng)激參與波動性高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞的凋亡[10]，Nrf2/ARE信號通路可通過調(diào)控下游基因的表達(dá)，提高機(jī)體的抗氧化應(yīng)激能力，延緩糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生。

應(yīng)答元件（ARE）是一個特異的DNA啟動子結(jié)合序列，是II相解毒酶和細(xì)胞保護(hù)蛋白基因表達(dá)的上游調(diào)節(jié)區(qū)，Nrf2是這一序列的激活因子。活化的Nrf2從Keap1（Kelchlike Echassociated protein-1）解離后進(jìn)入細(xì)胞核，與細(xì)胞核內(nèi)小Maf蛋白（small Maf proteins）結(jié)合成異二聚體后與ARE序列結(jié)合，進(jìn)而啟動受ARE調(diào)控的基因的轉(zhuǎn)錄，稱為Keap1-Nrf2-ARE通路。Nrf2/ARE是一種重要的抗氧化應(yīng)激通路[11]。研究表明，該信號通路可延緩糖尿病的發(fā)展，預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生，在維持血糖平衡和抑制糖尿病發(fā)生的過程中發(fā)揮了重要的作用[12-13]。氧化與抗氧化系統(tǒng)相互拮抗平衡，人體才能正常發(fā)揮其有效的生理功能，如果ROS產(chǎn)生過多，各種抗氧化物質(zhì)如HO-1，谷胱甘肽（GSH）等的含量下降，抗氧化能力降低，不能有效的清除自由基，就會發(fā)生氧化應(yīng)激損傷。Nrf2/ARE信號通路可降低高糖環(huán)境下活性氧的產(chǎn)生，機(jī)體細(xì)胞受到ROS信號作用，Nrf2從Keap-1中解離，通過與ARE結(jié)合，并參與下游II相代謝酶基因和抗氧化基因的轉(zhuǎn)錄，包括HO-1、γ-GCS[14]。γ-GCS、HO-1能夠啟動氧化應(yīng)激系統(tǒng)，清除體內(nèi)自由基，從而起到保護(hù)細(xì)胞的作用。Yap等[15]研究發(fā)現(xiàn)，山楂酸通過激活Nrf2/ARE通路，上調(diào)HO-1和醌氧化還原酶（NQO1）的表達(dá)，其機(jī)制可能是增強(qiáng)了Nrf2蛋白的穩(wěn)定性，減少Keap-1的表達(dá)，引起Nrf2在核內(nèi)的累積，進(jìn)而與下游靶基因ARE結(jié)合有關(guān)。實驗研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)HG組Nrf2蛋白及mRNA表達(dá)明顯高于NC組，說明在生理狀態(tài)下，其表達(dá)量較低，但在引起氧化應(yīng)激的因素誘導(dǎo)下如波動性高血糖、缺氧、血紅素等，均可誘導(dǎo)其顯著表達(dá)。波動性糖尿病大鼠腎臟中出現(xiàn)了氧化應(yīng)激，激活了Nrf2蛋白及mRNA表達(dá)，但FHG組HO-1、γ-GCS蛋白及mRNA的表達(dá)明顯低于NC組，這可能是由于波動性高血糖氧化應(yīng)激過強(qiáng)消耗了通過機(jī)體自身的Nrf2/ARE信號通路激活而增加的抗氧化蛋白HO-1、γ-GCS，致使機(jī)體內(nèi)抗氧化蛋白含量降低，氧化與抗氧化系統(tǒng)拮抗失衡，因而氧化應(yīng)激對波動性高血糖大鼠腎臟的損傷顯著增加。氧化應(yīng)激損傷的發(fā)生，與機(jī)體的抗氧化能力下降有關(guān),因此，通過提高機(jī)體內(nèi)抗氧化蛋白的水平，減緩波動性高糖所致的腎臟損傷，對預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生有著重要的作用。

隨著社會的不斷發(fā)展，傳統(tǒng)中醫(yī)中藥在防治糖尿病方面發(fā)揮了重要的作用[16-17]。中醫(yī)認(rèn)為，糖尿病屬“消渴”范疇，其病機(jī)主要在于陰精虧虛，燥熱偏勝，故以清熱潤燥、養(yǎng)陰生津為治療大法。人參具有“大補(bǔ)元氣、補(bǔ)脾益肺、生津、安神益智”的功效。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，人參皂苷是其主要活性成分，具有抗氧化、清除自由基、抗炎、解毒、抑制腫瘤細(xì)胞增殖、提高免疫力、降血糖等作用[18-19]。前期研究結(jié)果表明[20]，人參皂苷使細(xì)胞中超氧化物歧化酶（SOD）活性增加，丙二醛（MDA）含量降低，有效清除機(jī)體內(nèi)過多的自由基，阻止脂質(zhì)過氧化物的過度產(chǎn)生，在波動性高血糖環(huán)境中增強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞抗氧化和抗凋亡能力。人參皂苷通過改善腎組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-2（2MMP-2）的表達(dá)，減少細(xì)胞外基質(zhì)的形成，起到對腎臟的保護(hù)性作用[21]。實驗研究發(fā)現(xiàn)，人參皂苷治療后，HO-1、γ-GCS、和Nrf2蛋白及mRNA表達(dá)明顯高于正常對照組及波動性高血糖組，提示人參皂苷通過促進(jìn)Nrf2與Keap1解離，使其轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，結(jié)合抗氧化反應(yīng)元件ARE，上調(diào)HO-1、γ-GCS的表達(dá)，抗氧化蛋白含量增加，提高了機(jī)體的抗氧化反應(yīng)能力，這與既往研究結(jié)果相一致[22]。人參皂苷具有較強(qiáng)的抗氧化和自由基清除能力，通過調(diào)控Nrf2/ARE信號通路，抑制波動性高糖所致的腎臟損傷，在防治糖尿病及其并發(fā)癥方面具有確切的臨床療效。

綜上所述，人參皂苷可以減輕波動性高血糖大鼠腎臟的氧化應(yīng)激損傷，波動性高血糖大鼠的腎臟保護(hù)機(jī)制其機(jī)制可能是通過激動Nrf2/ARE信號通路啟動抗氧化蛋白HO-1、γ-GCS的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。在臨床上，現(xiàn)有的治療及研究很難從根源上徹底逆轉(zhuǎn)胰島β細(xì)胞功能的障礙和凋亡，因而控制波動性高糖所致氧化應(yīng)激對腎臟功能的損害，阻滯糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生尤為重要。西醫(yī)對此無有效方法及藥物，而傳統(tǒng)中藥可以發(fā)揮自身優(yōu)勢。因此，應(yīng)該強(qiáng)調(diào)平穩(wěn)降糖，盡量減少血糖的波動，重視波動性高血糖對腎臟組織的損害，及傳統(tǒng)的中藥對延緩糖尿病并發(fā)癥的作用。

[1]Kumar D,Zimpelmann J,Robertson S,et al.Tubular and interstitial cell apoptosis in the streptozotocin-diabetic rat kidney[J].Nephron Exp Nephrol,2004,96(3):77-88.

[2]Ge QM,Dong Y,Zhang M,et al.Effects of intermittent high glucose on oxidative stress in endothelial cells[J].Acta Diabetologica,2010,47(1):97-103.

[3]崔 俁,馬海英,孔 力.Nrf2/ARE通路與機(jī)體抗氧化機(jī)制的研究進(jìn)展[J].吉林大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版,2011,37(1):187-190.

[4]王和強(qiáng),張?zhí)?符 瑩,等.中藥糖通飲方治療早期糖尿病腎病患者臨床觀察[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2014,33(5): 267-269.

[5]Abdul-Ghani MA,Jani R,Chavez A,et al.Mitochondrial reactive oxygen species generation in obese non-diabetic and type 2 diabetic participants[J].Diabetologia,2009,52(4): 574-582.

[6]Quagliaro L,Piconi L,Assa R,et al.Intermittent high glucose enhances apoptosis related to oxidative stress inhuman umbilical vein endothelial cells:the role of protein kinase c and NAD(P)H-oxidase activation[J].Diabetes,2003,52(11): 2795-2804.

[7]Evans JL,Goldfine ID,Maddu BA,et al.Oxidative stress and stress-activated signaling pathways:a unifying hypothesis of type 2 diabetes[J].diabetes Endocrine,2002,23(5): 599-622.

[8]Forbes JM,Coughlan MT,Cooper ME.Oxidative stress as a major culprit in kidney disease in diabetes[J].Diabetes, 2008,57(6):1446-1454.

[9]Chang CM,Hsieh CJ,Huang JC,et al.Acute and chronic fluctuations in blood glucose levels can increase oxidative stress in type 2 diabetes mellitus[J].Acta Diabetol,2012,49 (1):171-177.

[10]李素娟,李劍敏,汪 洋,等.氧化應(yīng)激和P53參與波動高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡[J].中國病理生理雜志, 2011,27(12):2302-2306.

[11]Menshikova EB,Tkachev VO,Zenkov NK.Redox-dependent signaling system Nrf2/ARE in inflammation[J].Molecular Biology,2010,44(3):343-357.

[12]Uruno A,Yagishita Y,Yamamoto M.The Keap1–Nrf2 system and diabetes mellitus[J].Archives of Biochemistry and Biophysics,2015(566):76-84.

[13]Elango B,Dornadula S,Palanisamy R,et al.The emerging role of redox-sensitive Nrf2-Keap1 pathway in diabetes[J]. Pharmacological Research,2015(91):104-114.

[14]Thimmulappa RK,Mai KH,Srisuma S,et al.Identification of Nrf2-regulated genes induced by the chemopreventive a－gent sulforaphane by oligonucleotide microarray[J]．Cancer Research,2002,62(18):5196-203．

[15]Yap WH,Khoo KS,Lim YH,et al．Maslinic acid induces HO-1 and NOQ1 expression via activation of Nrf2 transcription factor[J]．Biomedicine Preventive Nutrition,2012,2 (1):51-58．

[16]呂樹泉,張淑芳,王 猛,等．中西醫(yī)結(jié)合治療糖尿病周圍血管病變臨床療效觀察[J]．天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2016,35 (2):92-94．

[17]譚俊珍,李慶雯,范英昌,等．六味地黃丸對糖尿病大鼠血糖和血脂的影響[J]．天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2007,26(4): 196-198．

[18]孟凡麗,蘇曉田,鄭毅男．人參皂苷Rb3對糖尿病模型小鼠的降血糖和抗氧化作用[J]．華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2013, 34(4):553-557．

[19]何道同,王 兵,陳珺明．人參皂苷藥理作用研究進(jìn)展[J]．遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2012,14(7):118-121．

[20]黃 琦,鄧雯雯,許家鸞,等．人參總皂苷對波動性高糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響[J]．中藥新藥與臨床藥理,2012,23(5):500-504．

[21]倪海祥,楊雪輝,朱 峰,等．人參皂苷對糖尿病大鼠腎組織基質(zhì)金屬蛋白酶2表達(dá)的影響[J]．中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志,2009,10(3):211-213．

[22]Kundu JK,Surh YJ．Nrf2-Keap1 Signaling as a potential target for chemoprevention of inflammation-associated carcinogenesis[J]．Pharm Res,2010(27):999-1013．

Effect of ginsenoside on Nrf2/ARE signaling pathway in the kidney of rats exposed to intermittent high glucose

WANG Dan1,HUANG Qi2
（1.Zhejiang College of Traditional Chinese Medicine,Hangzhou 310053,China;2.Zhejiang Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine,Hangzhou 310000,China）

[Objective]To observe the effects of ginsenside on Nrf2/ARE signaling pathway in the kidney of diabetic rats exposed to intermittent high glucose．[Methods]Thirty-two male SD rats were randomly divided into normal group(group NC,n=8)and fluctuating hyperglycemia model group(n=24)．The fluctuating hyperglycemia model group established by injection of a small dose of streptozotoein(STZ)after feeding them with high-fat diet for 2 weeks,and by alternative intraperitoneal injection of insulin and glucose．Then they were randomly divided into three groups of FHG(the fluctuating hyperglycemia group),LG(treated with ginseng 14 mg/(kg·d),HG[treated with ginseng 56 mg/(kg·d)]．After 8 weeks HO-1,γ-GCS and NRF2 protein were observed by western blot and HO-1,γ-GCS, NRF2 mRNA were measured by RT-PCR．[Results]Compared with group NC,levels of NRF2 protein and mRNA in FHG groups were significantly decreased(P＜0．05),levels of HO-1,γ-GCS,NRF2 protein and mRNA in FHG groups were significantly increased(P＜0．05);compared with group FHG,levels of HO-1,γ-GCSand NRF2 protein and mRNA in group LG and HG were significantly increased(P＜0．05)．[Conclusion]Ginsenoside could further promote the expression of HO-1,γ-GCS,protein and mRNA in the downstream gene of Nrf2 in the state of intermittent high glucose．Ginsenoside reduce the production of reactive oxygen species and improve the body’s ability to restrain oxidative stress,which has a protective effect on the rat renal injury induced by glucose fluctuation．

ginsenoside;nuclear factor erythroid-2-related factor-2 signaling pathway;fluctuating hyperglycemia;heme oxygenase-1;γ-glutamylcysteine synthethase

R587．1

A

1673-9043（2016）06-0385-05

2016-08-12）

10．11656/j．issn．1673-9043．2016．06．07

浙江省中醫(yī)藥管理局基金項目（2014ZA045）。

王 丹（1990-），女，碩士研究生，研究方向為中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)分泌方向。

黃 琦，E-mail:hq871201@163．com。