食用菌菌種的提純復壯方法

劉昆昂 張根偉 馬宏

食用菌菌種的提純復壯方法

劉昆昂 張根偉 馬宏

食用菌產業是非耕地、立體式、高效生態農業產業，因其栽培料主要是農業副產品、農業廢棄物和加工業下腳料，且用水少、不施肥、不用藥、不需陽光，在河北省農業產業結構調整過程中，顯示了“富營養、節資源、高收益、保生態”的強大產業優勢，成為農業產業提檔升級的重要領域。食用菌菌種作為發展食用菌的基礎生產資料，對食用菌生產起著關鍵性作用，直接影響產量和質量。然而調查河北省內多家食用菌生產廠家發現，由于長期科研投入不足、管理不善，食用菌菌種在儲藏及傳代過程中普遍存在著生產性能變劣、種性衰退等現象。因此，食用菌菌種的提純復壯十分必要。

一、菌種退化及特點

菌種退化是指在傳代、保藏和長期栽培過程中，由于環境轉變、轉管次數過多、菌種使用時間過長等因素，某些原來的優良性狀可能會逐漸消失或變弱，造成可遺傳的變異，出現菌絲長勢弱、抗性差、出菇遲、產量低、品質低劣等現象。我們研究發現，退化的食用菌菌株存在以下幾個特點：

1、種性不純。同一試管不同部位的菌絲對峙培養，有拮抗帶；出菇不一致，畸形菇多；不同子實體組織分離的菌株對峙培養，有拮抗帶。

2、菌絲體病態。食用菌菌種為絲狀真菌，退化的菌株顯微鏡觀察可見細胞壁穿孔、不平整，鎖狀聯合少等現象。

3、活力低。菌株生長慢，菌絲不粗壯，木質素、纖維素等酶活性低。

二、菌種退化的原因

菌種退化的實質是遺傳物質發生了可遺傳的變異，是一個從量變到質變的漸變過程，與其自身的遺傳特性和所處的環境密切相關。其原因一是遺傳變異。菌種種性較差或不穩定，出現極性變化與單核化，改變了原有的遺傳特性；或在栽培過程中與其他品種雜交，發生基因重組，出現分離現象；二是環境因素。包括營養物質的種類、含量和比例等營養條件，溫度、濕度、空氣、光線、酸堿度等環境條件及機械創傷和病蟲害等；三是自然退化。在菌種繼代培養時，由于長期栽培和傳代次數太多，個體的菌齡越來越大，新陳代謝機能逐漸減弱，導致優良性狀逐漸退化。

三、菌種的提純復壯

菌種退化分為可逆和不可逆兩種類型，可逆的退化現象可通過提純復壯恢復其優良特性。生產上常用的的菌種提純復壯方法有二，一是“斷橋法”。菌絲尖端分離提純復壯。其特點是僅可篩選出生長速度快的菌株，而生長速度快往往并非高產優質食用菌菌株；二是原生質體再生法。可產生大量原生質體，需要對產生的大量原生質體進行分離、篩選和出菇驗證，技術難度較大。

我所發明一種食用菌菌種簡便、高效提純復壯及新品種選育的方法，其可在較短的時間內提高退化菌株的生活力，提高食用菌產量和質量。具體方法：

1、初步提純復壯。利用含有20ppm結晶紫的PDA培養基培養退化的食用菌菌種，報紙包好，20—28℃培養，待菌絲生長至培養皿邊緣，挑取菌落外緣尖端菌絲，接入食用菌試管種培養基中。

2、初步提純復壯的菌株篩選。通過菌落形態觀察、顯微鏡觀察，篩選顯微鏡觀察鎖狀聯合數量多、均勻、清晰，菌絲濃厚、粗壯、整齊的菌株進行出菇試驗。

3、出菇試驗。將經過篩選的初步提純復壯菌株在常規食用菌試管種培養基中活化，接入到食用菌常規栽培料中進行出菇試驗，考察出菇早晚、產量、菇形、菇質等，產量、質量、性狀符合生產要求的即為提純復壯的菌株。

相較常規食用菌新品種誘變、雜交選育6-8年的選育周期，該食用菌菌種的提純、復壯及新品種選育的方法是提高菌種質量的簡便、高效方法。

四、延緩菌種退化的措施

生產上，在菌種尚未退化之前，轉接儲藏和栽培中的一些措施可以延緩菌種退化，（1）菌種分離時，有計劃地交替使用無性繁殖和有性繁殖；（2）由于在轉管過程中受機械創傷等原因，會使菌種產生不利突變，因此，在生產中盡量控制母種轉管次數；（3）創造適宜的環境條件，保證菌種的正常生長和繁殖，在栽培過程中，選擇優良的個體及時進行組織分離，盡可能保留原始種，并妥善保存和儲藏；（4）結合實際采用適宜的方法保藏菌種，盡量減少菌種保藏期間的衰退；（5）在菌種轉接保藏時，經常改變一下培養基配方也可以防止菌種退化，配制營養成分豐富的培養基，對因營養基質不適而衰退的菌種有一定作用。

（作者單位：河北省科學院生物研究所）

河北省科技計劃項目（16227303D）；河北省科學院科技計劃項目(16301)。