M asson染色在宮頸微小浸潤性鱗狀細胞癌診斷中的應用

趙娜 楊建萍 尹玉慧 齊靜雯 王玉豪 張紅 陳奎生(鄭州大學第一附屬醫院病理科 河南鄭州 450052)

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M asson染色在宮頸微小浸潤性鱗狀細胞癌診斷中的應用

趙娜 楊建萍 尹玉慧 齊靜雯 王玉豪 張紅 陳奎生
(鄭州大學第一附屬醫院病理科 河南鄭州 450052)

【摘要】目的 探討Masson染色在宮頸微小浸潤性鱗狀細胞癌診斷中的應用價值?方法 收集疑似宮頸微小浸潤性鱗狀細胞癌病例108例,分別對其進行Masson和免疫組化染色?結果 Masson染色和免疫組化(抗體:IV型膠原)均能清晰地顯示出基底膜變薄或者缺損程度?Masson染色:70例(64.8%)為宮頸微小浸潤鱗狀細胞癌,20例(18.5%)宮頸原位鱗狀細胞癌,18例(16.7%)為宮頸鱗狀細胞癌;免疫組化染色:60例(55.6%)為宮頸微小浸潤鱗狀細胞癌,24例(22.2%)為宮頸原位鱗狀細胞癌,24例(22.2%)為宮頸鱗狀細胞癌?兩者差異無統計學意義(P>0.05)?結論 Mas-son染色法可用來輔助診斷宮頸微小浸潤鱗狀細胞癌,尤其可在快速術中冰凍切片中輔助HE染色確診有無微浸潤性?

【關鍵詞】宮頸微小浸潤鱗狀細胞癌;基底膜;Masson染色;免疫組化染色

宮頸癌(invasive carcinoma of cervix,ICC)是起源于宮頸上皮細胞的惡性腫瘤,以鱗狀細胞癌最為常見(60%～85%)[1],其中育齡期(20～49歲)是微小浸潤性鱗狀細胞癌好發年齡階段[2]?近年來,隨著全民醫療保健與普查意識的逐步加強,微小浸潤性鱗狀細胞癌的檢出率較以往明顯增高?值得關注的是,明確的宮頸癌病變診斷分級對臨床治療方案的選擇具有重要的指導意義,尤其在年輕女性患者中?截止目前,宮頸病變的診斷分級主要依據其基底膜[3](basement membrane,BM)完整與否來判定其是否發生浸潤,進而完成明確診斷?因常規的HE染色對基底膜著色能力較差,現臨床上主要采用特異性較強的免疫組化對基底膜進行著色?本研究收集2008年1月至2015年1月疑似宮頸微小浸潤性鱗狀細胞癌108例,分別采用Masson和免疫組化染色對其基底膜進行顯色對比分析,現報告如下?

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 病例選擇 收集2008年1月至2015年1月鄭州大學第一附屬醫院病理科108例疑似宮頸微小浸潤性鱗狀細胞癌的病例,年齡為21～67歲,中位年齡43.4歲?

1.1.2 主要試劑與儀器 10%福爾馬林;Ⅳ型膠原(一抗);PV-9000(二抗);胃蛋白酶消化液;Masson復合染色液(試劑A:Weigert鐵蘇木素液;試劑B:麗春紅酸性復紅;試劑C:1%磷鉬酸水溶液;試劑D:亮綠液,中山金橋);包埋盒;LEICA ST5020切片機;LEI-CA CV5030封片機;BENCHMARK XT免疫組化機(羅氏);顯微鏡(Olymps)?

1.2 治療方法

1.2.1 制片 取宮頸標本組織,10%福爾馬林固定,常規制成石蠟切片?連續切片5張,切片厚3μm,常規脫蠟脫水?

1.2.2 免疫組化 按EnVision二步法染色步驟進行,所用試劑一抗小鼠抗人Ⅳ型膠原單克隆抗體,以肝癌組織標本為陽性對照,以PBS代替一抗作陰性對照?購自北京中杉金橋生物技術有限公司?

1.2.3 Masson染色法 ①切片脫蠟至蒸餾水中;②Weigert鐵蘇木素液染5～10 min;③流水沖洗;④1%的鹽酸酒精分化;⑤流水沖洗,鏡下觀察;⑥麗春紅酸性復紅液染5～10 min;⑦流水少洗;⑧1%磷鉬酸水溶液染5～10 min,鏡下觀察;⑨直接用苯胺藍復染5 min;⑩1%的冰醋酸水溶液處理2 min;95%的乙醇脫水3次;無水酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片?

1.2.4 結果判定 Masson染色膠原纖維呈藍色,肌纖維呈紅色,紅細胞呈橘紅色,基底膜含有膠原纖維,故染成藍色?基底膜呈連續線狀結構為(+),基底膜部分呈變薄或連續缺失均為(-)?免疫組化染色基底膜Ⅳ型膠原表達為連續棕色線性結構為(+),呈變薄或連續缺失均為(-)[4]?

1.3 統計分析 采用SPSS 17.0統計軟件進行分析,率的比采用Mann-Whitney Test(秩和檢驗)或Fisher確切概率法?

2 結果

免疫組化染色下60例(55.6%),Masson染色下70例(64.8%)病灶周邊基底膜樣物質減少或者部分缺如,結合形態學特點證實為宮頸微小浸潤性鱗狀細胞癌;免疫組化染色下24例(22.2%),Masson染色下20例(18.5%)病灶周邊基底膜有完整的著色,將其暫定為宮頸原位鱗狀細胞癌,但不排除因上皮腳橫切或斜切面造成的假象;免疫組化染色下24例(22.2%),Masson染色下18例(16.7%)病灶周邊基底膜完全缺如,將其診斷為宮頸浸潤性鱗狀細胞癌?統計學分析顯示,免疫組化與Masson染色分布差異無統計學意義(P=0.883)?Masson染色和免疫組化均能清晰地顯示基底膜的變化(有無破損或厚薄不均)?見圖1?

圖1 宮頸癌不同染色結果對比

3 討論

宮頸微小浸潤性鱗狀細胞癌于1947年由Mest werdt首次提出,近年來有關其確切定義一直比較模糊,但間質浸潤深度一直是一個公認的生物學行為指標,同時有研究發現不同的間質浸潤深度其淋巴結轉移率有明顯的差異?世界衛生組織(WHO)起初推薦認可國際婦產科聯合會(FIGO)標準和美國婦科腫瘤醫師學會(SGO)標準,即FIGO分期:1a1(浸潤深度≤3 mm,水平寬度≤7 mm)和1a2(3 mm≤浸潤深度≤5 mm,水平寬度≤7 mm),有無脈管與淋巴管瘤栓與分期無關,與此同時SGO標準規定為上皮基底膜下浸潤深≤3 mm,水平寬度≤7 mm,且無血管淋巴管瘤栓形成?截至2014年WHO對宮頸病變分級進行重新修訂:低級別鱗狀上皮內病變和高級別鱗狀上皮內病變?微小浸潤性鱗狀細胞癌(相當于FIGO分期系統中的1a期宮頸病變,其定義為最大浸潤深度為5 mm,最大水平擴張范圍為7 mm?)?浸潤癌,其死亡率隨臨床分期的增加而明顯增高?盡管近年來綜合治療已成為宮頸癌治療的一個重要策略[5],但手術仍是一致公認的宮頸癌的主要治療手段,尤其是不同的臨床分期所采用的手術方案大有不同[6],如對低?高級別鱗狀上皮內病變者大多給予保留子宮的宮頸錐切術治療;對明確為浸潤癌的患者通常為改良子宮全切術加盆腔淋巴結清掃以及后續的輔助治療;但對早期浸潤性癌患者,手術方案的選擇必須綜合考慮患者年齡和意愿,該級對育齡期女性(具有生育要求的育齡期女性,一般采用宮頸錐切即可;若無生育要求,一般采用根治性子宮全切術;如果存在著淋巴結轉移,無論患者有無生育要求,均采用改良子宮全切術加盆腔淋巴結清掃)尤為重要,其主要目的便于臨床醫生給患者以個體化?人性化治療方案,進而提高醫療質量,促進患者術后恢復,改善生活質量?

宮頸癌發病率僅次于乳腺癌,約88%的病例發生在發展中國家?據不完全統計,現我國每年約有10萬新增病例,約占全球20%,為我國女性最常見的婦科惡性腫瘤之一?過去宮頸病變主要依賴于常規的HE染色和免疫組化等方法,HE染色判定主觀性較強,對臨床病例醫師專業要求較高,限制了其在確定宮頸病變,尤其是在確定微小浸潤性鱗狀細胞癌方面的診斷?免疫組化作為一種新興的技術,其本身具有特異性強?敏感性高?定位準確?形態與功能相結合,可自動化等優點,但該技術因成本較高?技術操作要求苛刻?耗時較長等導致其難以大范圍進行普及推廣?

本研究分別采用Masson染色和免疫組化對108例疑似微小浸潤性鱗狀細胞癌進行基底膜著色,進而對其進行臨床分期,經統計學分析二者差異無統計學意義(P=0.883),進一步得出Masson染色法可用來輔助診斷宮頸微小浸潤性鱗狀細胞癌的結論?Masson染色是傳統經典的膠原纖維染色法,常用于膠原纖維和肌纖維的鑒別染色,在實驗教學?組織的觀察研究?疾病診斷等方面起著舉足輕重的作用,現逐漸推廣并應用于疾病的病理診斷?鑒別診斷以及科學研究中[7],但是運用于宮頸微小浸潤性鱗狀細胞癌的研究于國內尚屬首次?該方法操作簡便?經濟?染色效果好?易于觀察,同時耗時短,可與HE染色同步進行,輔助其診斷宮頸微小浸潤性鱗狀細胞癌,這一點在快速術中冰凍診斷時顯得尤為重要?

此外,研究發現宮頸癌發病年齡有“年輕化"的趨勢,與以往的研究結果相一致[8]?近年來我國經濟?人民生活水平?思想觀念尤其在晚婚晚育方面有了很大提高,Masson染色技術可作為一種簡便易行的宮頸病變診斷與分級的方法,在一定程度提高該病的檢出率,同時也可被大范圍推廣應用,改善患者的生活質量?

參考文獻

[1] 楊雷英.WWOX?Bcl-2和S-100A4在宮頸浸潤性鱗狀細胞癌的表達及意義[D].濟南:山東大學,2009.

[2] Gutnik H,Matisic JP,Zakelj M P,et al.Microinvasive cervical squa-mous cel carcinoma in Slovenia during the period 2001-2007[J].Radiol Oncol,2014,48(3):282-288.

[3] 彭向陽,彭偉雄,黃振華,等.IL-6和MMP-9在胃癌組織中的表達及其相關性[J].中國熱帶醫學,2012,12(8):928-930,933.

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[6] Lytwyn A,Zaino R,Colgan T J,et al.Superficialy Invasive Squamous Cel Carcinoma of the Uterine Cervix[J].Pathology Case Reviews,2013,18(4):183-189.

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[8] 馬曉潔,李莎莎,譚榜憲.宮頸癌淋巴結微轉移的研究進展[J].現代婦產科進展,2015,(4):303-305.

App lication of M asson staining in the diagnosis ofm icroinvasive squamous cel carcinoma of the cervix

Zhao Na,Yang Jianping,Yin Yuhui,Qi Jingwen,Wang Yuhao,Zhang Hong,Chen Kuisheng.
(Department of Pathology,the First Afiliated Hospital of Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,China)

【Abstract】Objective To investigate the application value of Masson staining in the diagnosis of microinvasive squamous cellbook=18,ebook=24carcinoma of the cervix.M ethods 108 cases suspected asmicroinvasive squamous cel carcinoma of the cervix were colected.Immunohistochemistry and Masson staining were used to detect them.Results Both Masson and immunohistochemistry staining can show basementmembrane thinning or defect.Masson staining:70(64.8%)casesweremicroinvasive squamous cel carcinoma,20(18.5%)caseswere cervical carcinoma in situ,18(16.7%)caseswere cervical squamous cel carcinoma.Immunohistochemistry staining:60(55.6%)cases weremicroinvasive squamous cel carcinoma,24(22.2%)cases were cervical carcinoma in situ,24 (22.2%)caseswere cervical squamous cel carcinoma.There were no statisticaly diference between Masson and Immunohisto-chemical staining(P>0.05).Conclusion Masson staining can be used in the diagnosis ofmicroinvasive squamous cel carcino-ma of the cervix,especialy in assisting HE in fast frozen.

【Key words】microinvasive squamous cel carcinoma;basementmembrane;Masson staining;immunohistochemical staining

(收稿日期:2015-08-02)

通訊作者:陳奎生,E-mail:chenksh2002@163.com?

【中圖分類號】R 737.33

doi:10.3969/j.issn.1004-437X.2016.01.004