外周血T-SPOT.TB檢測對多系統結核感染的診斷價值

黃鳳祥張輝高增艷孫盼鋒趙娣苗麗君(.鄭州大學第一附屬醫院呼吸與危重癥醫學二科 河南鄭州 45005;.濰坊醫學院附屬醫院呼吸科 山東濰坊 603)

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外周血T-SPOT.TB檢測對多系統結核感染的診斷價值

黃鳳祥1張輝1高增艷2孫盼鋒1趙娣1苗麗君1
(1.鄭州大學第一附屬醫院呼吸與危重癥醫學二科 河南鄭州 450052;2.濰坊醫學院附屬醫院呼吸科 山東濰坊 261031)

【摘要】目的 探討結核分枝桿菌感染T細胞斑點試驗(spot test of T cels infected with Mycobacterium tuberculosis,TSPOT.TB)評分在多系統結核感染診斷中的應用價值?方法 回顧性納入2013年10月至2014年9月在鄭州大學第一附屬醫院住院并確診為結核感染的530例患者,所有患者均應用T-SPOT.TB試劑盒檢測?分別將外周血中經6 kD早期分泌靶抗原(early secretory antigenic target6,ESAT-6)和10 kD培養濾過蛋白(culture filtrate protein 10,CFP-10)刺激后T細胞斑點形成數記為其A值?B值?根據病變侵及范圍分為單系統結核感染組和多系統結核感染組,分析兩組間陽性檢出率及兩組A值?B值的差異?結果 T-SPOT.TB診斷結核感染的總敏感性為87.7%(465/530)?多系統結核感染組的陽性檢出率94.1%(143/152)高于單系統結核感染組的陽性檢出率85.1%(322/378)?多系統感染組的A值(202.32±4.57)/106PBMCs及B值(207.20±4.98)/106PBMCs均顯著高于單系統感染組的A值(35.51±2.38)/106PBMCs 及B值(38.48±1.91)/106PBMCs,差異均具有統計學意義(tA=5.33;tB=4.48;P＜0.001)?結論 T-SPOT.TB在診斷單系統及多系統結核感染中具有較高的敏感性,其值越高,提示多系統結核感染的可能性越大?

【關鍵詞】結核分枝桿菌感染T細胞斑點試驗;斑點形成細胞數;多系統結核感染

據世界衛生組織統計,目前全球約有20億人感染結核分枝桿菌,并且近年來結核感染發病率有上升趨勢?結核桿菌侵入人體后,可引起肺內和(或)肺內的單系統或全身多系統病變的疾病?多系統(兩個及以上)結核感染因臨床表現不典型?缺乏“金標準"或者忽略尋找合并有其他系統結核感染的證據,極易造成漏診,影響治療和預后,因此尋找能夠安全?有效?快速地提示結核感染致病范圍的診斷方法非常重要?結核分枝桿菌感染T細胞斑點形成實驗(T-SPOT.TB)是一種具有較高敏感性及特異性[1]的快速診斷結核感染的方法,逐漸被臨床醫生認知并接納?本研究以結核感染患者T-SPOT.TB評分(A值?B值)為基礎,對照分析單系統結核感染組和多系統結核感染組A值?B值的差異,為臨床中多系統結核感染的診斷和治療提供依據?

1 對象及方法

1.1 一般資料 回顧性納入2013年10月至2014年

9月在鄭州大學第一附屬醫院住院的530例結核感染患者,男性307例,女性223例,平均年齡(42.05± 19.21)歲?所有患者均行T-SPOT.TB檢查?根據病變范圍進一步分為:單系統感染組和多系統感染組(兩個或以上系統感染)?共分為以下8個系統感染:呼吸系統(鼻?咽?喉?氣管?肺組織和胸膜)?消化系統(口?咽?食道?胃?小腸?大腸和肛門)?運動系統(骨骼?關節?骨骼肌)?泌尿系統(腎臟?膀胱?輸尿管和尿道)?生殖系統(卵巢?子宮?輸卵管?睪丸?附睪?輸精管?盆腔)?免疫系統(骨髓?胸腺?脾臟?淋巴結?扁桃體?小腸集合淋巴結?闌尾)?神經系統(腦膜?脊髓)?循環系統(心包?血管)?納入標準:①菌陰與菌陽肺結核:痰涂片?痰培養發現抗酸桿菌;組織病理學提示干酪樣壞死?肉芽腫性炎或TB-DNA陽性等結核感染表現,并參照肺結核的診斷標準排除其他疾病?②生殖系統?泌尿系統?運動系統?免疫系統?消化系統結核病:分泌物涂片或培養提示抗酸桿菌生長;組織病理學提示干酪樣壞死?肉芽腫性炎或TB-DNA檢測陽性等,并除外腫瘤及其他微生物感染?③神經系統結核:腦脊液行常規?生化?腺苷脫氨酶(ADA)?結核菌培養?結核菌涂片等檢查提示結核桿菌感染,且患者癥狀及體征?影像學檢查支持結核菌感染,抗結核治療有效?該研究獲得所有納入研究對象的知情同意?

1.2 試驗方法 按T-SPOT.TB試劑盒(英國Oxford immunotec公司)操作規范進行:①采集受檢者靜脈血4～6 ml,肝素抗凝?②6 h內,加入Ficol淋巴細胞分離液離心分離外周血單個核細胞,用培養液將濃度調整至2.5×106/ml,加入已包被抗IFN-γ單抗的96孔板上?③分別于相應單孔加入50μl細胞培養基?植物血凝素?抗原A(ESAT-6)和抗原B(CFP-10)?④孵育?洗板,加入生物素標記的二抗及顯色液?⑤結果判定:出現以下結果時判斷為陽性,空白對照孔點數＜6時,A或B抗原斑點數減去空白對照孔斑點數≥6;空白對照孔斑點數≥6時,A或B抗原斑點數≥2倍空白對照孔斑點數?

1.3 統計學分析 采用SPSS 17.0統計軟件,定量資料以均數±標準差(±s)描述,兩組的評分比較采用兩獨立樣本的t檢驗,P＜0.05為差異有統計學意義?

2 結果

2.1 結核感染患者病變范圍分析 530例結核感染患者中,單系統感染者378例,多系統感染者152例?單系統感染中以呼吸系統發病率最高(n=322),其次為運動系統(n=26)和免疫系統(n=15),神經系統和循環系統最低(n=1)?多系統感染中,以呼吸并免疫系統最高(n=41),其次為呼吸并消化系統(n=30)?呼吸并運動系統(n=20)?呼吸并神經系統(n=7)?具體病例分布見表1?

表1 530例結核感染患者病例分布及構成比

2.2 兩組T-SPOT.TB的檢測結果 530例結核感染患者中,T-SPOT.TB陽性者465例,敏感性為87.7%?多系統感染組的T-SPOT.TB陽性檢出率(94.1%)高于單系統感染組的T-SPOT.TB陽性檢出率(85.1%)?見表2?

表2 兩組T-SPOT.TB的檢測結果(n,%)

2.3 兩組A值?B值比較 多系統感染組的A值及B值均顯著高于單系統感染組的A值及B值,差異均有統計學意義(P＜0.001)?見表3?

表3 兩組A值?B值水平比較(±s)

表3 兩組A值?B值水平比較(±s)

分組 n A值/106PBMCs B值/106PBMCs單系統感染組378 35.51±2.38 38.48±1.91多系統感染組 152 202.32±4.57 207.20±4.98 t 5.33 4.48 P ＜0.001 ＜0.001

3 討論

結核感染多以肺結核為主,肺外結核占結核感染的25%～30%,死亡率達14.1%～17.6%?肺外結核臨床表現復雜?不特異,現有的輔助檢查包括結核桿菌培養及涂片,結核抗體檢測陽性率均較低,加上取材困難,使其診斷更加困難?而且,目前沒有一種檢測方法能夠很好提示結核感染的病變范圍?因此,當合并有多個系統結核感染時,往往出現漏診,影響預后?

近年來,結核分枝桿菌感染T細胞斑點試驗(TSPOT.TB)因較高的準確性和快速性在臨床診斷中廣泛開展?T-SPOT.TB是以結核桿菌所特有,而BCG和其他分枝桿菌缺失的RD1區基因編碼的ESAT-6(早期分泌靶抗原-6,A抗原)和CFP-10(培養過濾蛋白-10,B抗原)為特異性抗原[2],體外刺激結核桿菌感染患者特異的記憶T細胞,釋放IFN-γ,計數產生IFN-γ的細胞來判斷結核感染?國內外研究證實,T-SPOT.TB敏感性可達83.3%～95.5%,特異性可達80.8%～86%,明顯優于傳統診斷方法,如TST?痰培養等[3-5]?Kim等[6]研究證實,T-SPOT.TB對肺外結核的敏感性也明顯高于TST?本研究中TSPOT.TB在單系統及多系統結核感染中的總敏感度為87.7%,與國內外文獻報道相符?

李紅等[7]發現血T-SPOT.TB的菌陽組結核感染敏感度明顯高于菌陰組,提示T-SPOT.TB評分可能與痰菌數量有關?Aiken及Bosshard等[8-9]對患者在診斷結核病和治療后用T-SPOT.TB進行檢測,發現治療后分泌IFN-γ的淋巴細胞數在減少,TSPOT.TB的陽性檢出率降低,提示T-SPOT.TB可以作為一個較好的免疫監測工具來判斷結核感染治療效果?因此我們從T-SPOT.TB評分(A?B值)的角度,來探究它在提示結核感染病變范圍中的價值?本研究顯示,多系統結核感染組陽性檢出率較高,并且單系統結核感染組與多系統結核感染組的T-SPOT.TB的評分(A?B值)差異有統計學意義(P＜0.001),并且評分越高,提示多系統結核感染的可能性越大?我們分析,此可能與機體免疫與結核菌數量有關[10],當機體免疫力低下時,免疫系統與結核菌之間的平衡被打破,結核菌得以大量復制,從而導致活動性結核病,機體免疫力越低,結核菌復制的越多,容易引起感染的系統就越多?結核菌數量的增加,使被加工呈遞的抗原也會增加,因此被活化的抗原特異性效應T細胞的數量也會隨之增加,在T-SPOT.TB就反映為斑點數目的增加,即評分的增加?

總之,T-SPOT.TB在單系統及多系統結核感染中均具有較高的敏感性?臨床工作中,考慮存在多系統的結核感染時,T-SPOT.TB評分可以提示重要的輔助診斷價值?但其具體界值的確定及在不同人群中的應用,仍需更大樣本的資料來確定?

參考文獻

[1] 李曉非,李明武,蘇俊華,等.體外γ-干擾素檢測結核分枝桿菌不同方法的應用價值比較[J].中華醫院感染學雜志,2012,(13):2952-2954.

[2] Cole ST,Brosch R,Parkhil J,et al.Deciphering the biology of Myco-bacterium tuberculosis from the complete genome sequence[J].Na-ture,1998,393(6685):537-544.

[3] 霍霏霏,劉曉清.結核病免疫學診斷新進展——T-SPOT.TB[J].中華實驗和臨床感染病雜志(電子版),2010,(2):202-206.

[4] NkurunungiG,Lutangira JE,Lule SA,et al.Determining Mycobacte-rium tuberculosis infection among BCG-immunised Ugandan children by T-SPOT.TB and tuberculin skin testing[J].PLoSOne,2012,7(10):e47340.

[5] Turtle L,Kemp T,Davies G R,et al.In routine UK hospital practice T-SPOT.TB isuseful in some patientswith amodest pre-test prob-ability of active tuberculosis[J].Eur J Intern Med,2012,23(4):363-367.

[6] Kim SH,Choi S J,Kim H B,et al.Diagnostic usefulness of a T-cell based assay for extrapulmonary tuberculosis[J].Arch Intern Med,2007,167(20):2255-2259.

[7] 李紅,唐神結,張忠順,等.外周血T-SPOT試驗對菌陰肺結核診斷價值的研究[C].中華醫學會結核病學分會2011年學術會議,2011.

[8] Aiken A M,Hil PC,Fox A,etal.Reversion of the ELISPOT testafter treatment in Gambian tuberculosis cases[J].BMC Infect Dis,2006,6:66.

[9] Bosshard V,Roux-Lombard P,Perneger T,et al.Do results of the T-SPOT.TB interferon-gamma release assay change after treatment of tuberculosis?[J].Respir Med,2009,103(1):30-34.

[10]Andersen P,Doherty TM,Pai M,et al.The prognosis of latent tuber-culosis:can disease be predicted?[J].Trends Mol Med,2007,13(5):175-182.

The diagnostic value of T-SPOT.TB scores in multi-system tuberculosis

Huang Fengxiang1,Zhang Hui1,Gao Zengyan2,Sun Panfeng1,Zhao Di1,Miao Lijun1
(1.Department of Respiratory and Critical Care Medicine,the First Afiliated Hospital of Zhengzhou University,Zhengzhou 450000,China;2.Department of Respiratory Medicine,the Afiliated Hospital ofWeifang University,Weifang 261031,China)

【Abstract】Objective To evaluate the diagnostic value of T-SPOT.TB scores inmulti-system tuberculosis.Methods A retrospective analysis of530 tuberculosis patients hospitalized from October of2013 to September of2014 was performed.Al pa-tients were tested with T-SPOT.TB assay.The T-SPOT.TB assay yielded values A and B,which represented the number of T cels thatwere stimulated by the antigens for early secreting antigen target 6(ESAT-6)or culture filtrate protein-10 peptide (CFP-10).The patientswere divided into single-system and multiple-system group according to the extent of the disease.Independent-samples t testswere used to compare the values A and B between the two groups.Results In 530 patients includ-ed in this study,465 tested positivewith a sensitivity of87.7%.Inmulti-system groups,the positive rate(94.1%,143/152)was higher than that(85.1%,322/378)in single-system groups.The mean A and B values in the multi-system group[(202.32±4.57)/106PBMCs and(207.20±4.98)/106PBMCs],were significantly greater than those in the single-system group[(35.51±2.38)/106PBMCs and(38.48±1.91)/106PBMCs](tA=5.33,tB=4.48,P＜0.001).Conclusion TSPOT.TB score could play an important role in identifying single-system and multi-system tuberculosis infections.Higher score indicates a greater likelihood ofmultiple-system tuberculosis infection.

【Key words】T-SPOT.TB assay;spot foming cel frequency;multi-system tuberculosis

(收稿日期:2015-09-01)

通訊作者:苗麗君,E-mail:miaolily@126.com?

【中圖分類號】R 52

doi:10.3969/j.issn.1004-437X.2016.01.012