一例豬圓環病毒病2型和大腸桿菌混合感染的診斷

杜海燕，陳光麗，荊汝頂，秦保亮，韓俊偉

（1.新鄉市動物疫病預防控制中心，河南 新鄉 453000；2.新鄉市動物衛生監督所）

一例豬圓環病毒病2型和大腸桿菌混合感染的診斷

杜海燕1，陳光麗1，荊汝頂1，秦保亮1，韓俊偉2

（1.新鄉市動物疫病預防控制中心，河南 新鄉 453000；2.新鄉市動物衛生監督所）

豬圓環病毒病以圓環病毒-2型（PCV2）為主要病原，一般于斷奶后2～3d或1w發病，急性發病豬群中，病死率可達10%。大腸桿菌主要是一種條件性致病菌，其中以仔豬黃白痢最為常見。2016年3月份，某豬場1月齡仔豬突然發病，病死率較高，送檢病豬3頭進行病因診斷。為了解該規模化豬場疫病的感染狀況，通過該豬場豬群發病情況及剖檢病理觀察，初步判斷該豬場發病豬疑似為豬瘟病毒、豬圓環病毒2型或細菌感染，通過進一步分子生物學檢測及細菌分離培養與鑒定，確診該豬場發病豬為豬圓環病毒2型和大腸桿菌混合感染。現將診斷結果報道如下：

1 發病情況

該豬場采取自繁自養方式，共存欄生豬230頭，其中保育豬65頭，病死率達20%左右。主要表現為精神沉郁，體溫升高，被毛蓬亂，呼吸急促，腹瀉，消瘦，體表淋巴結腫大，病死豬明顯消瘦，貧血、可視黏膜黃疸。

2 剖檢病理變化

對送檢3頭1月齡病死豬進行剖檢，結果均可見胃腸脹氣，肝臟黃染，且肝臟有明顯壞死灶；脾臟腫大，邊緣有丘狀突起，并有黑色梗死；肺堅硬出現實質性病變；腎臟針尖狀出血點；心包心耳出血；腸及腸系膜出血，腸系膜淋巴結腫大。

3 豬圓環病毒-2型病毒核酸檢測

3.1 DNA提取

分別取病豬病理變化明顯的淋巴結、脾臟和肺臟組織研磨，反復凍融3次，8000rpm離心10min，取上清液采用離心柱提取法提取病料DNA樣本。

3.2 豬圓環病毒熒光PCR擴增

利用豬圓環病毒-2型病原核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）對待檢病料進行檢測。擴增體系根據試劑盒說明進行。標記熒光基團種類報告基團FAM，淬滅基團TAMRA。擴增反應條件：94℃2min，后94℃30 s-55℃45s（采集熒光），40個循環。

3.3 結果分析判定

反應結束后，Ct值在40以上的為陰性，Ct值小于35的為陽性，Ct值在35-40之間，為灰區，需要進行重復試驗。重復試驗后，Ct值仍在35-40之間，判斷為陽性，沒有熒光值增長為陰性。結果見下圖。

圖：圓環病毒-2型病原核酸檢測結果

根據熒光PCR擴增結果可知，陽性對照Ct值18.22，待檢樣品Ct值是26.57，出現特異性熒光曲線，陰性對照未出現特異性熒光曲線。結果顯示送檢病料檢測到豬圓環病毒-2型病原核酸，表明病死豬感染豬圓環病毒-2型。

4 細菌學檢驗

4.1 細菌的分離培養

分別取肝、腎及腹腔積液接種于麥康凱培養基，置于37℃培養箱中培養12～24h，觀察在麥康凱培養基上長出粉紅色菌落，經染色鏡檢為革蘭氏陰性短桿菌，可判定為大腸桿菌。

4.2 藥敏試驗結果

取上述麥康凱培養基上細菌的純培養物，選擇常用的抗菌素進行藥物敏感試驗，結果見下表。

表 藥敏試驗結果

通過對大腸桿菌分離培養物進行藥敏試驗，發現該菌對慶大霉素敏感，對環丙沙星、卡那霉素、頭孢噻呋、舒坦西林低敏，而菌必治、頭孢氨芐、利福平則耐藥。可選擇對該致病菌抑制效果較好的慶大霉素進行治療，另外也可使用環丙沙星、卡那霉素、頭孢噻呋和舒坦西林進行相應治療。

5 討論

豬圓環病毒-2型在我國健康豬群中已普遍發生，表現為流行范圍廣、混合感染嚴重、血清陽性率高，尤其種豬抗體陽性感染率最高，PCV-2的感染會造成動物免疫抑制，再感染其他病原機會增大，豬群易受到豬瘟、偽狂犬病、大腸桿菌病等的侵襲。豬圓環病毒-2型導致的仔豬斷奶后多系統衰竭綜合征的源頭在種豬上，而發病的一般是仔豬，母豬通過多種途徑排毒傳染哺乳仔豬，造成仔豬的早期感染。由此表明該豬場可能存在豬圓環病毒的隱形感染，通過采取綜合性防治措施來預防該病。

目前疫苗免疫主要依靠進口苗，導致生產成本較高。因此主要靠加強飼養管理，減少應激，控制繼發感染以降低損失。嚴格采取“全進全出”方式，清除帶毒種豬并凈化，加強引種檢疫，嚴防該病進場，做好消毒措施，尤其保育豬圈清空后，消毒晾曬1w后再引入豬群。一旦發生豬圓環病毒感染，易并發細菌性感染，治療時可配合廣譜抗菌藥物或進行藥敏試驗選擇敏感性抗菌藥物，減少并發感染。

S858.28

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1004-5090（2016）11-0041-02

2016-09-10）