血管內皮生長因子在骨肉瘤及骨轉移瘤腫瘤中的表達水平分析

買買提艾力·哈斯木，白靖平，江仁兵

(新疆醫科大學附屬腫瘤醫院骨與軟組織科，新疆烏魯木齊　830000)

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血管內皮生長因子在骨肉瘤及骨轉移瘤腫瘤中的表達水平分析

買買提艾力·哈斯木，白靖平，江仁兵

(新疆醫科大學附屬腫瘤醫院骨與軟組織科，新疆烏魯木齊830000)

【摘要】目的:探討原發骨肉瘤與骨轉移瘤腫瘤中的血管內皮生長因子( VEGF)表達水平。方法:選取34例骨肉瘤以及16例骨轉移瘤患者腫瘤組織納入研究，另選取10例同時期單純骨折患者組織標本作為對照。運用免疫組化法檢測3種組織VEGF表達，并比較不同骨組織VEGF表達水平差異。結果:骨肉瘤患者、骨轉移瘤患者VEGF表達均高于正常對照組，差異具有顯著性意義( P＜0. 01)，骨轉移瘤與骨肉瘤腫瘤組織VEGF表達水平差異無統計學意義( P＞0. 05)。不同組織學分型骨肉瘤VEGF陽性表達比較差異無統計學意義( P＞0. 05)。結論: VEGF在骨肉瘤與骨轉移瘤組織中表達異常增高。在不同類型骨腫瘤組織之間及不同組織學分型骨肉瘤之間VEGF表達無顯著差異性。

【關鍵詞】骨肉瘤;骨轉移瘤;血管內皮生長因子

網絡出版時間: 2016-3-4 10∶16網絡出版地址: http: / /www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20160304.1016.022.html

腫瘤的生長、浸潤和轉移依賴于血管生成［1］。血管內皮生長因子( vascular endothelial growth factor，VEGF)是目前已知的作用最強的促血管生成因子之一，VEGF特異性作用于血管內皮細胞，通過促進內皮細胞增殖、增加血管通透性，以誘導腫瘤血管生成，在腫瘤的發生發展中起關鍵作用［2］。骨肉瘤是骨原發性的惡性腫瘤，其生長速度較快，容易出現復發和轉移，VEGF起到很大的促進作用［3］。骨轉移瘤多來源于肺癌及乳腺癌，VEGF的異常表達對骨轉移瘤的發生亦有很大的作用［4］。本研究通過免疫組化法分析骨肉瘤以及骨轉移瘤(乳腺癌骨轉移)腫瘤組織中VEGF表達，了解骨肉瘤以及骨轉移瘤中VEGF表達差異。

1　資料與方法

1.1一般資料

收集2011年1月至2014年12月在新疆醫科大學附屬腫瘤醫院收治的，經病理確診的34例骨肉瘤患者以及16例骨轉移瘤患者的腫瘤組織標本各200 mg，標記并置于－70℃備用。其中，骨肉瘤患者男性18例，女性16例;年齡29～57歲，平均( 42. 4± 10. 6)歲;按WHO分型，成骨細胞型14例，成軟骨細胞型12例，成纖維細胞型8例。骨轉移瘤均為女性乳腺癌患者術后骨轉移并病理性骨折，年齡32～49歲，平均( 40. 1±7. 4)歲。所有患者標本均經10%福爾馬林固定，常規石蠟包埋，5 mm連續切片。另選取10例同時期單純骨折患者組織標本作為對照組。

1.2方法

對照組正常組織、原發骨肉瘤與骨轉移瘤腫瘤組織VEGF表達采用免疫組化SP法。兔抗人VEGF單克隆抗體和即用型SABC試劑盒均購自武漢博士德公司。嚴格按照試劑盒操作步驟說明書進行，標本進行石蠟包埋，經常規切片，脫蠟，磷酸鹽緩沖液清洗，高溫抗原修復，進行VEGF免疫組化染色，蘇木精復染，專用封片劑封片。

1.3結果評價

染色結果兩位高級病理專業技術人員以雙盲法讀片，結果取平均值計算。以核染色棕黃或者褐色為陽性，核未染色為陰性。結果判定:每個樣本隨機選擇10個高倍視野，每個視野計數100個細胞，陽性細胞比率≥5%為陽性( + )表達，＜5%為陰性(－)表達。陽性率=陽性細胞數/總細胞數× 100%。

1.4統計學分析

采用SPSS 19.0進行統計學分析。計數資料以百分比表示，不同骨肉瘤組織學分型之間VEGF陽性表達比價采用Fisher精確概率法檢驗，骨肉瘤與骨轉移瘤腫瘤組織VEGF表達水平比較采用χ2檢驗，檢驗水平α=0. 05，P＜0. 05認為差異有統計學意義。

2　結果

2.1骨肉瘤及骨轉移瘤腫瘤組織VEGF免疫組化

結果

骨肉瘤細胞及骨轉移瘤細胞VEGF蛋白染色均呈棕黃色顆粒狀強染，位于胞漿，間質細胞陰性。對照組健康骨組織細胞VEGF表達陰性，幾乎無黃染。

2.2骨肉瘤及骨轉移瘤腫瘤組織VEGF表達水平比較

對照組VEGF陽性表達率為10% ( 1/10)。骨肉瘤患者腫瘤組織VEGF的陽性表達率為73. 53% ( 25/34)，其中，成骨細胞型、成軟骨細胞型及成纖維細胞型骨肉瘤組織VEGF的陽性表達率分別為71. 43%( 10/14)、75. 00% ( 9/12)及75. 00% ( 6/8)，不同組織學分型骨肉瘤VEGF陽性表達比較差異無統計學意義( P＞0.05)。骨轉移瘤患者腫瘤組織VEGF陽性表達率為68. 75% ( 11/16)。骨肉瘤患者、骨轉移瘤患者VEGF表達均高于正常對照組，差異具有顯著性意義( P＜0. 01)，骨轉移瘤與骨肉瘤腫瘤組織VEGF表達水平差異無統計學意義( P＞0. 05)。

3　討論

研究發現，腫瘤發生發展與血管的形成密切相關，抑制腫瘤組織血管的生成可發揮抗腫瘤作用［5－6］。VEGF又稱血管滲透因子或血管增殖因子，是一種特異性作用于血管內皮細胞的多功能生長因子，人類VEGF基因位于染色體的6p21，全長28 kb。編碼VEGF的基因長約14 kb，由8個外顯子和7個內含子構成［7］。VEGF可以特異作用于血管內皮細胞，可誘導血管形成，增加血管通透性，促進血管內皮細胞分裂與增殖，在胚胎發育、創傷愈合、腫瘤生長與轉移過程中具有重要作用。VEGF蛋白表達隨腫瘤生物學行為惡性潛能的增加而顯著增加［8－9］，是被用于檢測腫瘤血管生成對抗血管生成藥物敏感性的常用指標［10－11］。

研究表明，VEGF抑制劑可顯著減緩荷瘤動物體內的骨肉瘤組織生長速度，同時會降低肺轉移的骨肉瘤瘤體內的血管密度，縮小腫瘤體積、降低腫瘤侵襲能力［12］。而直接應用VEGF單克隆抗體可抑制荷瘤小鼠腫瘤生長和轉移［13］。Gordon等［11，14］通過靜脈輸注VEGF單克隆抗體治療晚期腫瘤患者，結果發現患者體內腫瘤均不同程度受到抑制。

本實驗免疫組化結果表明，VEGF在骨肉瘤和骨轉移瘤中表達水平均顯著高于正常組織( P＜0. 01)，說明無論是原發性還是轉移性腫瘤中VEGF的高表達并非偶發事件。另外一個方面，不同組織學分型骨肉瘤中VEGF表達水平無顯著差異提示VEGF的表達水平在各型腫瘤中均高表達但是并不具備特異性，提示VEGF可能是對不同惡性腫瘤發生發展都起到比較重要的作用。綜上所述，VEGF可作為骨肉瘤及骨轉移瘤的診斷、治療以及預后判斷的一個新指標。

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(學術編輯:馮剛)

論著

Analysis of the level of vascular endothelial growth factor expression in osteosarcoma and bone metastatic neoplasm

Maitiaili·Buaijiaer Hasimu，BAI Jing-ping，JIANG Ren-bing
( Department of Bone and Soft Tissue，Cancer Hospital Affiliated to Xinjiang Medical University，Urumchi 830000，Xinjiang，China)

【Abstract】Objective: To explore the level of vascular endothelial growth factor expression in osteosarcoma and bone metastatic neoplasm.Methods: Tumor tissue specimens from 34 patients with osteosarcoma and 16 patients with bone metastatic neoplasm and tissue specimens from patients with simple fracture ( control group) were enrolled for detecting the levels of VEGF expression of 3 kinds by using immunohistochemistry and analyzing the differences of VEGF expression in different bone tissues.Results: The levels of VEGF were higher in patients with osteosarcoma and bone metastatic neoplasm than that in control group，with statistical significance ( P＜0. 01).There was no statistical difference in the level of VEGF expression between tumor tissues of osteosarcoma and bone metastatic neoplasm( P＞0. 05) and no significant difference in the positive VEGF expression among different histological classification of osteosarcoma ( P＞0. 05).Conclusion: VEGF is expressed highly in tumor tissues of osteosarcoma and bone metastatic neoplasm.Moreover，no difference is found in different types of bone tumor tissues and the VEGF expression among different histological classification of osteosarcoma.

【Key words】Osteosarcoma; Bone metastatic neoplasm; Vascular endothelial growth factor

作者簡介:買買提艾力·哈斯木( 1978－)，男，副主任醫師。E-mail: maimaitiailihasimu@126.com

基金項目:新疆自治區衛生廳青年基金( 2012Y07)

收稿日期:2015－04－08

doi:10. 3969/j. issn. 1005-3697. 2016. 01.11

【文章編號】1005-3697( 2016) 01-039-03

【中圖分類號】R738

【文獻標志碼】A