當藥對功能性消化不良型Wistar大鼠胃腸激素表達的影響*

張小倩，王 方，魏漢林，王春麗△，韓向東

(1.華東理工大學，上海 200237;2.上海中醫藥大學，上海 201203)

當藥對功能性消化不良型Wistar大鼠胃腸激素表達的影響*

張小倩1，王 方1，魏漢林1，王春麗1△，韓向東2△

(1.華東理工大學，上海 200237;2.上海中醫藥大學，上海 201203)

目的:探討當藥提取物對功能性消化不良(FD)型Wistar大鼠胃腸激素水平的影響。方法:慢性束縛應激法、過度疲勞法、飲食失節法和飲用鹽酸水溶液4種方法復合應用復制FD大鼠模型，將造模成功的FD大鼠按隨機數字表法分為模型對照組、多潘立酮組、當藥高劑量組、當藥中劑量組、當藥低劑量組5組各10只，分別灌胃給藥14 d，每日1次，并于14 d后用ELISA法檢測大鼠血漿胃動素、胃泌素和血清生長抑素的含量變化。結果:陽性對照組、當藥高、中、低劑量組血漿MOT比模型組分別提高73.6%、69.6%、62.8%和45.8%，陽性對照組、當藥高、中、低劑量組血漿 GAS比模型組分別提高 56.8%、44.8%、43.3%和27.8%;陽性對照組、當藥高、中、低劑量血清生長抑素比模型組分別降低30.7%、41.9%、36.4%和18.7%。結論:當藥提取物能明顯提高大鼠血漿胃動素及胃泌素水平，降低大鼠的血清生長抑素水平，改善FD癥狀。

當藥提取物;FD型Wistar大鼠;胃動素;胃泌素;生長抑素

功能性消化不良(functional dyspepsia，FD)是臨床最常見的一種功能性胃腸病，其反復性和多樣性嚴重影響了患者的工作和生活，研究發現功能性消化不良的致病因素與胃腸道功能障礙密切相關［1-2］。當藥為龍膽科植物瘤毛獐牙菜(Swertia pseudochinensis Hara)的干燥全草，具有清濕熱、健胃的作用［3］，目前國內對當藥的藥理學研究主要集中在當藥的保肝作用［4-6］和日本當藥的降血糖作用［7-8］。周大成等［9］研究了當藥提取物對 CCl4所致大鼠肝損傷的保護作用，結果顯示當藥提取物能明顯減輕大鼠的肝臟病變和壞死，增加膽汁流量，對肝臟具有保護作用。難波恒雄等［10］研究發現，日本當藥作為胃腸道用藥時，藥材中的黃嘌呤成分對鏈脲菌素型大鼠糖尿病具有明顯的降血糖作用，其降血糖作用為一般降血糖藥的1.5倍，且植物提取制劑安全無毒性，能廣泛用于各種高血糖疾病的治療。然而國內對當藥胃腸道作用的研究較少報道，國外也鮮有報道，基于此筆者采用動物實驗考察當藥提取物對功能性消化不良大鼠胃腸激素表達的影響，從而評價其對胃腸道系統的作用，對開發新的胃腸道用藥具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 健康的清潔級雄性 Wistar大鼠100只，體質量180～200 g，由北京維通利華公司提供(動物許可證號SCXK京2012-0001)。

1.1.2 藥物與試劑 當藥浸膏由上海雷允上藥房提供，上海龍華醫院制備;潘立酮(Sigma，批號11111003);胃動素鼠抗體(Abcam，批號 ab2799);胃泌素兔抗體(博奧森個，批號BS-1189R);生長抑素兔抗體(Abcam，批號ab183855);水合氯醛(國藥集團化學試劑有限公司，批號20140304);胃泌素試劑盒(RapidBio(RB)公司，批號09U5080);生長抑素試劑盒(RapidBio(RB)公司，批號09U6090)。

1.1.3 主要儀器 低溫冷凍離心機(上海盧湘儀離心機儀器有限公司，型號 TG-16M);渦旋振蕩器(上海醫大儀器廠，型號XW-80A);正置顯微鏡(OLYMPUS公司，型號CX41);酶標儀(芬蘭雷勃科技有限公司，型號MK3)。

1.2 方法

1.2.1 造模與分組 采用慢性束縛應激法、過度疲勞法、飲食失節法和飲用鹽酸水溶液4種方法復合應用復制 FD大鼠模型［11］。預游泳測試的篩選:造模前將全部100只雄性 Wistar大鼠(200±20 g)進行預游泳測試，剔除游泳時間少于10 min但大于20 min的大鼠;造模:隨機選取11只預游泳測試篩選合格的 Wistar大鼠作為空白對照組給予正常的飲食飲水之外，另選取55只Wistar大鼠于每天上午8∶00置于束縛盒中限制3 h，下午2∶00放于盛有水深30 cm、水溫(20℃ ±℃)的塑料大桶中游泳10 min。用隔日喂食法，每天的飲水為0.1 mol/L的鹽酸水溶液，連續喂養3周，大鼠會出現活動減少、倦臥少動、飲食及飲水量減少等情況，除空白對照組外隨機選取的造模雄性Wistar大鼠5只，經麻醉處死后取胃觀察胃黏膜，胃黏膜表面無黏膜損害或潰瘍表現說明造模成功。

FD大鼠造模成功以后，按隨機數字表法分為模型對照組、多潘立酮組、當藥高劑量組、當藥中劑量組、當藥低劑量組5組各10只，每組分裝于同一大鼠籠中。

1.2.2 動物給藥 給藥劑量按人和鼠換算公式:dB=dARB/RA(WA/WB)1/3［12］換算，計算出當藥高、中、低劑量組分別給予相當于含生藥1.875 kg/L、1.25 kg/L、0.625 kg/L。取當藥干膏用蒸餾水配制成濃度為21.48×10－3g/mL的高劑量受試藥，再用蒸餾水梯度等比稀釋高濃度藥液，制得10.74×10－3g/mL中劑量受試藥 50 mL，5.37× 10－3g/mL的低劑量受試藥 50 mL，多潘立酮組為0.3 g/L的水溶液。造模結束后開始按其質量灌胃給藥，同時造模仍然繼續。各組大鼠每天早上7∶00灌胃給藥，每次2 mL。模型組和空白對照組均給予生理鹽水2 mL灌胃，每日1次共14 d。并記錄每組大鼠每天的飲食量、飲水量和每只大鼠的體質量。

1.2.3 指標的檢測方法 分別采用ELISA檢測大鼠血漿和血清中的胃動素、胃泌素和生長抑素的含量變化，以評價當藥對 FD型大鼠胃腸道系統的影響，從而評價其治療功能性消化不良癥狀的可能性及其相關機理。

1.2.4 統計學方法 采用 SPSS 18.0軟件進行統計分析，多樣本均數兩兩比較，采用單因素方差分析LSD法，檢驗水準P＜0.05或P＜0.01為有統計學意義，計量資料以均數±標準差(±s)表示，多樣本平均數間比較采用單因素方差分析，數據兩兩比較采用SNK法。

2 結果

2.1 當藥提取物對大鼠血漿胃動素含量影響

表1顯示，與正常組比較，模型組Wistar大鼠的血漿胃動素(MOT)含量顯著性降低(P＜0.01);與模型組比較，多潘立酮組、當藥高劑量組、當藥中劑量組和當藥低劑量組的血漿胃動素含量均顯著性升高(P＜0.01);與多潘立酮組比較，當藥高劑量組和當藥中劑量組血漿胃動素含量均無明顯變化(P＞0.05)，當藥低劑量組血漿胃動素含量顯著性降低(P＜0.01);與當藥高劑量組比較，當藥中劑量組血漿胃動素含量無明顯變化(P＞0.05)，當藥低劑量組血漿胃動素含量顯著性降低(P＜0.01)。

2.2 當藥提取物對大鼠血漿胃泌素含量影響

表1顯示，與正常組比較，模型組Wistar大鼠的血漿胃泌素(GAS)含量顯著性降低(P＜0.01);與模型組比較，多潘立酮組、當藥高劑量組、當藥中劑量組和當藥低劑量組的血漿胃泌素含量均顯著性升高(P＜0.01);與多潘立酮組比較，當藥高劑量組血漿胃泌素含量無明顯變化(P＞0.05)，當藥中劑量組和當藥低劑量組血漿胃泌素含量均顯著性降低(P＜0.01);與當藥高劑量組比較，當藥中劑量組血漿胃泌素含量無明顯變化(P＞0.05)，當藥低劑量組血漿胃泌素含量顯著性降低(P＜0.05)。

2.3 當藥提取物對大鼠血清生長抑素含量影響

表1顯示，與正常組比較，模型組Wistar大鼠的血清生長抑素(SS)含量顯著性升高(P＜0.01);與模型組比較，多潘立酮組、當藥高劑量組、當藥中劑量組和當藥低劑量組的血清生長抑素含量均顯著性降低(P＜0.01);與多潘立酮組比較，當藥高劑量組、當藥低劑量組血清生長抑素含量均顯著性降低(P＜0.01)，當藥中劑量組血清生長抑素含量無明顯變化(P＞0.05);與當藥高劑量組比較，當藥中劑量組的血清生長抑素含量無明顯變化(P＞0.05)，當藥低劑量組血清生長抑素含量顯著性降低(P＜0.01)。

表1 當藥提取物對FD Wistar大鼠血漿胃動素、胃泌素和血清生長抑素含量的影響(±s)

表1 當藥提取物對FD Wistar大鼠血漿胃動素、胃泌素和血清生長抑素含量的影響(±s)

注:與正常組比較:1)P＜0.01;與模型組比較:2)P＜0.01;與多潘立酮組比較:3)P＜0.01;與當藥高劑量組比較:4)P＜0.01、5)P＜0.05

組g/L正 常 組 10 —別 鼠數 劑量g/kg 胃動素(MOT)pg/L 胃泌素(GAS)ng/L 生長抑素(SS)μ 719.89±68.89 72.99±5.77 5.65±0.75模 型 組 10 — 304.81±38.501，3，4) 37.69±3.821，3，4) 14.42±0.931，3，4)多 潘 立 酮 組 10 0.3 529.29±51.711，2) 59.10±7.011，2) 10.00±1.081，2，4)當藥高劑 量組 10 21.48×10－3 516.88±34.631，2) 54.57±4.561，2) 8.38±0.881，2，3)當藥中劑 量組 10 10.74×10－3 496.34±37.161，2) 54.01±9.861，2，3) 9.17±0.911，2)當藥 低 劑 量 組 10 10.74×10－3 444.35±47.481，2，4) 48.17±7.831，2，3，5) 11.70±1.321，2，3，4)

3 討論

FD是一種反復、慢性的上腹部癥狀綜合癥，其致病因素和發病機制目前尚不完全清楚，但大多數學者通過多方面的研究，提出了有關FD的發病機制，這些機制主要包括［13-18］胃排空延遲、胃腸激素異常、飲食損傷、幽門螺桿菌感染、內臟敏感性增高、患者心理素質以及中樞神經系統功能紊亂等;雖然對FD的發病機制進行了一系列的研究，但目前治療FD癥狀的特效藥較少，而西藥的副作用大，且對混合型FD癥狀的治療藥物個體差異性大。當藥具有健胃的功效，能在一定程度上改善胃腸道系統，從而能改善FD患者的胃腸道不良癥狀，因此對當藥健胃功效的藥理研究具有重要的意義。

胃動素是參與調節胃腸運動且具有興奮性的腦腸肽，對胃運動和胃電活動均具有明顯的促進作用，且作用時間持久。胃動素能夠引起平滑肌的收縮，進而調節胃腸的推進運動。

胃泌素的主要藥理作用為刺激腸嗜鉻樣細胞(ECL細胞是胃體黏膜內的主要內分泌細胞，與胃內的酸度和血漿胃泌素的濃度有密切的關系)分泌組胺，進而間接刺激壁細胞分泌鹽酸進而改善胃黏膜的營養和血供，促進胃黏膜和壁細胞的增殖從而促進胃腸肌的收縮，增加 LES的張力，并能增強幽門括約肌的收縮，延緩胃排空從而促進胃腸的運動。

生長抑素主要對胃腸道運動、消化道激素和胃蛋白酶的分泌具有一定的抑制作用，能夠抑制胃泌素和胃動素的釋放，即會阻礙胃腸的運動。

本文通過 ELISA法測定各組 Wistar大鼠的血漿胃動素(MOT)、胃泌素(GAS)和血清生長抑素(SS)的含量。結果顯示，與模型組比較，多潘立酮組、當藥高劑量組、當藥中劑量組和當藥低劑量組的血漿胃動素、胃泌素含量均顯著性升高，說明多潘立酮組、當藥組具有增強FD Wistar大鼠血漿胃動素、胃泌素含量的作用，而提高含量效果為多潘立酮組＞當藥高劑量組＞當藥中劑量組 ＞當藥低劑量組。結果表明，多潘立酮和當藥均具有調節胃腸推進運動的作用，且潘立酮組、當藥組也具有降低血清生長抑素(SS)含量的作用，其降低作用效果為潘立酮組 ＞當藥高劑量組＞當藥中劑量組＞當藥低劑量組，進一步說明多潘立酮和當藥具有促進胃腸運動的作用。

綜上所述，當藥能明顯改變動物的胃腸激素水平，不僅能提高胃動素和胃泌素水平，還能降低血清生長抑素水平，從而充分說明當藥具有健胃的功效，對功能性消化不良癥狀的改善起到促進作用，其機制可能是改善大鼠胃腸激素水平［19］，從而改善患者對食物的消化功能，進而改善與消化功能密切相關的胃排空延遲［20］，以達到對功能性消化不良癥狀的改善。而對其他FD患者是否能起到較好的療效，還有待于臨床的進一步驗證。

［1］Sarnelli G，Caenepeel P，Geypens B，et al.Symptoms associated with impaired gastric emptying of solids and liquids in functional dyspepsia［J］.American Journal of Gastroenterology，2003，98 (4):783-788.

［2］Kusano M，Zai H，Shimoyama Y，et al.Rapid gastric emptying，rather than delayed gastric emptying，might provoke functional dyspepsia［J］.Journal of Gastroenterology＆Hepatology，2011，26 Suppl 3(s3):75-78.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.北京:化學工業出版社，2010:63.

［4］周大成，樸惠善，張思玉，等.當藥提取物對鼠試驗性肝損傷的保護作用［J］.中國實驗方劑學雜志，2010，16(17):125-128.

［5］毛志敏，宋海燕，楊麗麗，等.當藥和水飛薊提取混合物對毒性物質誘導的脂肪肝大鼠肝損傷的防治作用［J］.中西醫結合學報，2012，10(2):193-199.

［6］段火生，李遠勤，朱芳成，等.當飛利肝寧預防抗結核藥物肝損傷的價值［J］.中西醫結合肝病雜志，2006，4:24.

［7］張志軍.日本當藥的降血糖作用［J］.國外醫學·中醫中藥分冊，1995，1:3.

［8］李宗友.日本當藥提取物對鏈脲菌素誘發的大鼠高血糖的降血糖作用［J］.國外醫學·中醫中藥分冊，1994，6:71.

［9］周大成，樸惠善，秦文杰，等.當藥的研究進展［J］.時珍國醫國藥，2011，22(2):462-465.

［10］難波恒雄.伝統醫薬のフィールドワークと民族薬物學の確立 (＜特集＞日本生薬學會設立50周年記念)［J］.生薬學雜誌，2000，53(2):69-75.

［11］郝瑩瑩，李強，陳少麗，等.補中益氣湯“要藥”配伍的關鍵性增效作用對脾虛小鼠的影響［J］.中國實驗方劑學雜志，2015，6:150-154.

［12］劉未艾.從腦腸軸途徑探討隔藥餅灸對FGIDs肝郁脾虛模型大鼠胃腸動力障礙和感覺異常影響的作用機制［D］.長沙:湖南中醫藥大學，2013.

［13］Stanghellini V，Tosetti C，Paternicò A，et al.Risk indicators of delayed gastric emptying of solids in patients with functional dyspepsia［J］.Gastroenterology，1996，110(4):1036-1042.

［14］Janssen P，Van Oudenhove L，Bisschops R，et al.Idiopathic gastroparesis or functional dyspepsia with delayed gastric emptying:where is the difference?［J］.Gastroenterology，2011，140(7):2145-2146.

［15］Tack J，Piessevaux H，Coulie B，et al.Role of impaired gastric accommodation to a meal in functional dyspepsia［J］.Gastroenterology，1998，115(6):1346-1352.

［16］Kupcinskas L，Lafolie P，Lignell ，et al.Efficacy of the natural antioxidant astaxanthin in the treatment of functional dyspepsia in patients with or without Helicobacter pyloriinfection: A prospective，randomized，double blind，and placebo-controlled study［J］.Phytomedicine，2008，15(6):391-399.

［17］Oudenhove L V，Jones M，Vos R，et al.How Do Gastric Sensitivity，Abuse History， Psychological Factors， Somatic Symptom Reporting and Quality of Life Interact in Functional Dyspepsia?［J］.Gastroenterology，2011，140(5):S94-S95.

［18］Tominaga K，Higuchi K，Kadouchi K，et al.Disorder of circadian rhythm of autonomic nervous system activity and its correlation with abdominal symptoms in functional dyspepsia［J］.Gastroenterology，2003，124(124):A225.

［19］Camilleri M，Coulie B，Tack J F.Visceral hypersensitivity: facts，speculations，and challenges.［J］.Gut，2001，48(1): 125-31.

［20］anssen P，Van Oudenhove L，Bisschops R，et al.Idiopathic gastroparesis or functional dyspepsia with delayed gastric emptying:where is the difference? ［J］.Gastroenterology，2011，140(7):2145-2146.

Effect of Dang Medicine on the Expression of Gastrointestinal Hormones in Functional Dyspepsia of Wistar Rats

ZHANG Xiao-qian1，WANG Fang1，WEI Han-lin1，WANG Chun-li1△，HAN Xiang-dong2△
(1.East China University of Science and Technology，Shanghai 200237; 2.Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 201203)

Objective:To investigate the effect of swertiae herba extract on gastrointestinal hormone levels of wistar rats with Functional Dyspepsia FD.Methods:The method of chronic restraint stress，fatigue law，law and drinking diet disloyal aqueous hydrochloric acid was used to establish the model of FD rats，and then the model of FD rats were randomly divided into five groups，namely model control group，domperidone group，high-dose swertiae herba group，swertiae herba dose group and low-dose swertiae herba group，these groups were orally 14 consecutive days of administration，and detect the content changes of motilin，gastrin and somatostatin by ELISA after 14 days.Results:The domperidone group，high-dose swertiae herba group，medium and low dose group than in plasma MOT model group increased by 73.6%，69.6%，62.8%and 45.8%，the domperidone group，high-dose swertiae herba group，medium and low-dose plasma GAS than the model group were increased by 56.8%;44.8%，43.3%and 27.8%;the domperidone group，high-dose swertiae herba group，medium and low-dose serum somatostatin than the model group decreased by 30.7%，41.9%，36.4% and 18.7%.Conclusion:Swertiae herba extract can significantly improve the levels of motilin and gastrin in plasma and gastric antrum，reduced the somatostatin levels of rats，improved FD symptoms.

Swertiae herba extract;FD type Wistar rats;Motilin;Gastrin;Somatostatin

R285.5

:B

:1006-3250(2016)07-0912-03

2015-11-19

國家自然科學基金資助項目(81273657)-活絡效靈丹對心肌缺血再灌注的研究

張小倩(1989-)，女，在讀碩士，從事中藥藥理學及質量標準的研究。

△通訊作者:王春麗，碩士研究生導師，從事中藥藥理學的研究，E-mail:wangchunli@ecust.edu.cn;韓向東，碩士研究生導師，從事中藥藥理學的研究，E-mail:hanxd555@163.com。