液相色譜法對(duì)茶葉中農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)方法研究

孫玉珍，周群

（1.江西中醫(yī)藥高等專科學(xué)校，江西撫州344000；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，江西南昌330006）

液相色譜法對(duì)茶葉中農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)方法研究

孫玉珍1，周群2

（1.江西中醫(yī)藥高等專科學(xué)校，江西撫州344000；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，江西南昌330006）

茶葉逐漸成為人們?nèi)粘５木G色健康飲品，其衛(wèi)生、安全都與人們的身體健康有直接的聯(lián)系。本文綜述了茶葉中農(nóng)藥殘留的具體分類的研究結(jié)果，重點(diǎn)分析了液相色譜法在茶葉中有機(jī)氯類、有機(jī)磷類、氨基甲酸酯類以及擬除蟲(chóng)菊酯類等農(nóng)藥的檢測(cè)研究，通過(guò)分析檢測(cè)條件（色譜、分析）的優(yōu)化方法提出“指紋識(shí)別”圖譜的建立，這對(duì)茶葉中農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)方法的改進(jìn)具有一定的指導(dǎo)意義。

液相色譜；茶葉；農(nóng)藥殘留；檢測(cè)

茶葉的質(zhì)量安全水平關(guān)系著茶業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展，農(nóng)藥殘留的問(wèn)題已經(jīng)由經(jīng)濟(jì)問(wèn)題上升到了生態(tài)安全和食品安全問(wèn)題。因此，加快研究與解決茶葉中農(nóng)藥殘留檢測(cè)的技術(shù)手段，已經(jīng)成為現(xiàn)階段刻不容緩的任務(wù)，對(duì)保證我國(guó)茶葉的衛(wèi)生質(zhì)量與出口具有很大的現(xiàn)實(shí)意義。

1　茶葉中農(nóng)藥殘留

近年來(lái)，具有保健功能和預(yù)防疾病功效的茶葉飲品，成為人們?nèi)粘Ｉ钪兴幨惩吹慕】诞a(chǎn)品，越來(lái)越受到人們的青睞。農(nóng)藥的應(yīng)用大大提高茶葉作物的產(chǎn)量，推動(dòng)茶葉產(chǎn)業(yè)鏈的快速發(fā)展。但是隨著農(nóng)藥的不合理使用以及殘留的問(wèn)題，也逐漸地受到人們的關(guān)注，特別是因?yàn)榻?jīng)濟(jì)與技術(shù)水平的因素，有些高毒農(nóng)藥的使用所造成的茶葉衛(wèi)生質(zhì)量下降，應(yīng)值得重視。

1.1茶葉中農(nóng)藥殘留的分類

國(guó)外茶葉市場(chǎng)對(duì)中國(guó)的茶葉出口的質(zhì)量監(jiān)測(cè)變得越來(lái)越嚴(yán)格，并提出了更為苛刻的農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)。然而，目前報(bào)道的茶葉中農(nóng)藥殘留量檢測(cè)的方法大都只是針對(duì)單一類農(nóng)藥，并且處理方法也相對(duì)復(fù)雜。為了防治茶葉的病害、蟲(chóng)害以及雜草、鼠害，需要對(duì)茶葉噴灑農(nóng)藥。農(nóng)藥殘留是指噴灑的農(nóng)藥原體及其有毒的代謝、降解產(chǎn)物等。隨著化工科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，農(nóng)藥產(chǎn)品種類也在不斷的更新。由于病蟲(chóng)害抗藥性的原因，使得施用到茶園中的農(nóng)藥具有種類繁多、含量不均等特點(diǎn)。目前，茶葉中的農(nóng)藥殘留根據(jù)其分子構(gòu)成的基團(tuán)區(qū)別，主要分為有機(jī)氯類、有機(jī)磷類、氨基甲酸酯類以及擬除蟲(chóng)菊酯類等類型農(nóng)藥。

1.2茶葉中農(nóng)藥殘留的研究現(xiàn)狀

1.2.1污染現(xiàn)狀

茶葉中農(nóng)藥殘留的種類與數(shù)量，具有時(shí)間性和空間性的差別。時(shí)間上的差別主要體現(xiàn)在我國(guó)從六十年代以來(lái)，隨著農(nóng)藥的發(fā)展以及農(nóng)藥控制水平的標(biāo)準(zhǔn)改變，呈現(xiàn)出種類上多樣化、殘留量下降的趨勢(shì)。但是，與國(guó)外的茶葉中農(nóng)藥殘留的限量標(biāo)準(zhǔn)相比較還是高出很多。空間上的區(qū)別主要體現(xiàn)在地域差異，導(dǎo)致出現(xiàn)農(nóng)藥的不規(guī)范使用。值得注意的是，茶葉中所殘留的農(nóng)藥來(lái)源不同，也呈現(xiàn)出復(fù)雜多樣性的殘留現(xiàn)狀。包括通過(guò)茶葉表面滲透、沉積作用、土壤的聚集、水流的灌溉、空氣漂移等。

1.2.2檢測(cè)方法的研究

針對(duì)茶葉中的農(nóng)殘情況，現(xiàn)在比較流行的檢測(cè)方法主要包括氣相色譜、經(jīng)典液相色譜、高效/超高效液相色譜及其與質(zhì)譜聯(lián)用、免疫分析等。這些方法在檢測(cè)成分復(fù)雜、殘留低、相似性大的化學(xué)組分時(shí)，具有很高的靈敏度與選擇性。相色譜僅適用于易汽化、熱穩(wěn)定較好和沸點(diǎn)低的農(nóng)藥化合物的局限性，液相色譜成為了茶葉中農(nóng)殘的主要檢測(cè)手段，其優(yōu)異的檢測(cè)效果，使得液相色譜能夠很好的分離80％左右的現(xiàn)有的有機(jī)化合物。近年來(lái)新發(fā)明的超高效液相色譜，在檢測(cè)丁醚脲及其衍生物的研究中，體現(xiàn)出高超的靈敏度和非常好的檢測(cè)效果。

2　液相色譜法在農(nóng)殘分析中的應(yīng)用

作為最重要的檢測(cè)、分析方法。液相色譜法以穩(wěn)定、高效的優(yōu)勢(shì)常常應(yīng)用于檢測(cè)各類基質(zhì)中（茶葉、土壤、草藥等）的有機(jī)氯類、有機(jī)磷類、氨基甲酸酯類和擬除蟲(chóng)菊酯類的農(nóng)藥殘留。

2.1液相色譜法的應(yīng)用特點(diǎn)

液相色譜法最為普遍的實(shí)現(xiàn)檢測(cè)的特點(diǎn)主要有：分析檢測(cè)的速度快、分辨分離率高、全程自動(dòng)化等。通過(guò)較少的樣品量就能夠準(zhǔn)確的測(cè)定茶葉中的農(nóng)藥殘留的成分和含量。近些年，液相色譜技術(shù)得到很大的發(fā)展，特別是色譜柱（親水和疏水、手性和非手性、極性和非極性等）和檢測(cè)器（紫外、熒光、光電二級(jí)陣列管、電化學(xué)檢測(cè)器、光散色和質(zhì)譜等）。這些獨(dú)具個(gè)性的檢測(cè)儀器給茶葉中的農(nóng)藥殘留檢測(cè)帶來(lái)多元化、廣譜化的分析效應(yīng)。

2.2茶葉中農(nóng)殘分析

2.2.1有機(jī)氯類

八十年代初，由于有機(jī)氯類農(nóng)藥具有高度的蓄積、累積的特點(diǎn)已經(jīng)停止生產(chǎn)。然而，研究表明該類農(nóng)藥在土壤和動(dòng)植物體中難分解、降解的特點(diǎn)，一方面給檢測(cè)帶來(lái)便利性，一方面給人的身體健康產(chǎn)生嚴(yán)重的威脅。根據(jù)這些特點(diǎn)，利用分子印跡固相萃取計(jì)算，簡(jiǎn)便快速的提取樣品中難溶于水的氯乙酰胺類農(nóng)藥，并用液相進(jìn)行快速的檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果達(dá)到農(nóng)藥殘留的限制標(biāo)準(zhǔn)的要求。

2.2.2氨基甲酸酯類以及有機(jī)磷類

氨基甲酸酯類農(nóng)藥和有機(jī)磷農(nóng)藥比較類似，通過(guò)抑制酶的活性和比較高的毒性對(duì)螨類害蟲(chóng)有很好的效果。而且它們的化學(xué)性質(zhì)都不穩(wěn)定，非常容易發(fā)生水解異構(gòu)、酰化衍生等作用，生成二次毒性物質(zhì)。曾小星等人利用水和乙腈作為混合流動(dòng)相，對(duì)7種茶葉中比較常見(jiàn)的氨基甲酸酯類農(nóng)藥進(jìn)行梯度洗脫，建立了具有實(shí)際應(yīng)用意義的測(cè)定方法，并對(duì)南昌、婆源、撫州、德興、永修等不同產(chǎn)地的實(shí)際茶葉樣品進(jìn)行農(nóng)殘測(cè)定，結(jié)果表明該法對(duì)我國(guó)茶葉的氨基甲酸酯類農(nóng)藥有很好的效果。

2.2.3擬除蟲(chóng)菊酯類

有別于上述幾種農(nóng)藥，擬除蟲(chóng)菊酯類殺蟲(chóng)劑具有較低的毒性，并且藥效非常的快。所以該類農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)中應(yīng)用越來(lái)越廣泛，同時(shí)歐美等國(guó)家對(duì)氯氰菊酯的限制標(biāo)準(zhǔn)降到微克級(jí)別。將進(jìn)行前處理優(yōu)化后的樣品在混合微柱中層析凈化，以乙腈：水=74∶26的比例作為流動(dòng)相，在波長(zhǎng)為198 nm的二極管陣列檢測(cè)器中，檢測(cè)氯氰菊酯、氰戊菊酯等標(biāo)準(zhǔn)樣品。具有分析時(shí)間短回收率好的顯著效果，為擬除蟲(chóng)菊酯類無(wú)內(nèi)源性熒光的化合物提供可靠的檢測(cè)方法。

3　液相色譜法對(duì)茶葉中農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)方法分析

茶葉的農(nóng)殘檢測(cè)對(duì)我國(guó)的經(jīng)濟(jì)發(fā)展具有十分重要的戰(zhàn)略意義，特別是我國(guó)中西部地區(qū)的茶葉出口問(wèn)題。通過(guò)液相色譜檢測(cè)方法和分析條件的優(yōu)化，可以更加快速、高效、廣泛的解決茶葉的農(nóng)藥殘留檢測(cè)問(wèn)題。

3.1色譜條件的優(yōu)化

在實(shí)現(xiàn)液相色譜檢測(cè)過(guò)程，省時(shí)、省量、省力的自動(dòng)化進(jìn)樣檢測(cè)的前提下。對(duì)色譜條件的優(yōu)化主要通過(guò)，提高分離、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度、靈敏度和節(jié)省時(shí)間的可行措施。農(nóng)藥殘留組分的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行分離檢測(cè)過(guò)程中，通過(guò)改變流動(dòng)相的組成、檢測(cè)波長(zhǎng)、流速、色譜柱溫度以及洗脫方法，能夠進(jìn)一步優(yōu)化而獲得更好的分離效果和較短的保留時(shí)間。例如：在流動(dòng)相的選擇方面，甲醇/水的混合溶劑與乙腈/水的混合流動(dòng)相對(duì)比，兩者均可以很容易的對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯類的農(nóng)藥進(jìn)行洗脫。但是甲醇在198 nm處具有很強(qiáng)的吸收，對(duì)于該波段的農(nóng)藥組分具有很大的干擾。同時(shí)乙腈在洗脫的過(guò)程中具有較小的保留時(shí)間，有利于快速的分離檢測(cè)。由此可以看出，對(duì)不同種色譜條件的優(yōu)化是液相色譜保持其獨(dú)特的檢測(cè)功能的必要條件。

3.2分析方法的優(yōu)化

隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)和計(jì)量科學(xué)水平的提高，一種新興的學(xué)科應(yīng)運(yùn)而生--計(jì)量學(xué)。對(duì)于液相色譜的檢測(cè)結(jié)果不可能達(dá)到理想的結(jié)果，或者是百分百接近真實(shí)的農(nóng)藥出口殘留情況。而運(yùn)用數(shù)學(xué)計(jì)量的方法，在一定范圍內(nèi)構(gòu)建目標(biāo)物和響應(yīng)值之間的數(shù)學(xué)函數(shù)模型，能夠清晰的計(jì)算出因?yàn)閮?nèi)標(biāo)物，因價(jià)格昂貴、已經(jīng)停產(chǎn)而無(wú)法進(jìn)行對(duì)照的化合物的準(zhǔn)確含量。其中利用線性方程，能夠準(zhǔn)確的計(jì)算多組分農(nóng)藥殘留化合物的最低檢測(cè)限量、最低定量限量和精密度等。而聚類分析、主成分分析等數(shù)學(xué)方法的多元化統(tǒng)計(jì)，又能夠在檢測(cè)茶葉中農(nóng)藥殘留含量的同時(shí)，還能分析和評(píng)價(jià)各種類農(nóng)藥對(duì)茶葉的質(zhì)量影響的評(píng)價(jià)。

3.3“指紋識(shí)別”圖譜的分析

液相色譜法對(duì)于茶葉中的農(nóng)藥殘留的組分的檢測(cè)，主要是基于評(píng)估性和預(yù)測(cè)性的待測(cè)組分的分析。而隨著農(nóng)藥組分的多樣化和農(nóng)藥母體，在茶園環(huán)境中分解、衍生產(chǎn)生更多有毒的代謝物，給快速分辨檢測(cè)帶來(lái)嚴(yán)重的阻礙。鑒于近年來(lái)，液相色譜在檢測(cè)中草藥的成分，而特別建立的有效成分“指紋圖譜”，我們?cè)谶M(jìn)行茶葉中農(nóng)殘的檢測(cè)時(shí)，也應(yīng)該進(jìn)行“指紋識(shí)別”類型的圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)的建立。這樣能夠在傳統(tǒng)而合理的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法下，根據(jù)檢出目標(biāo)物的圖譜，快速地識(shí)別出農(nóng)殘的組分，給液相色譜的檢測(cè)技術(shù)手段帶來(lái)了新的研究方向。

4　結(jié)論

茶葉中農(nóng)藥殘留量不符合國(guó)際出口標(biāo)準(zhǔn)的問(wèn)題，除了在農(nóng)藥研發(fā)和施藥設(shè)施的改進(jìn)外，檢測(cè)茶葉的農(nóng)藥殘留方法的改進(jìn)也是當(dāng)下所要面臨的迫切任務(wù)。液相色譜法除了在中西藥物、環(huán)境污染物等領(lǐng)域的化合物檢測(cè)外，在茶葉中的農(nóng)藥種類和殘留量檢測(cè)已經(jīng)應(yīng)用得十分的廣泛。使用液相色譜相關(guān)技術(shù)建立標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法是解除農(nóng)藥殘留威脅警報(bào)的關(guān)鍵，本文中系列化地解析了液相色譜法檢測(cè)茶葉中各種類型農(nóng)藥組分的檢測(cè)方法的優(yōu)化和條件方法的優(yōu)化。同時(shí)，“指紋識(shí)別”圖譜的建立參考了液相色譜檢測(cè)中草藥成分中的實(shí)用技術(shù)，側(cè)面印證了液相色譜在檢測(cè)多樣化、復(fù)雜化、同源化等樣品的快速特性，確保我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易中衛(wèi)生質(zhì)量安全的不受威脅。

［1］馮潔.茶葉中農(nóng)藥殘留分析方法的應(yīng)用研究［D］.北京化工大學(xué)，2014.

［2］嚴(yán)錦申，李俊麗，趙莉等.農(nóng)藥殘留現(xiàn)狀及檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展［J］.山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013（6）：134-137+152.

［3］李霞.色譜—質(zhì)譜在茶葉農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用［J］.科技傳播，2013（19）：180-181.

［4］蔡向陽(yáng).茶葉及茶湯中有機(jī)磷農(nóng)殘檢測(cè)的研究［D］.福建農(nóng)林大學(xué)，2008.

［5］朱旭君，侯如燕.茶葉中農(nóng)藥殘留分析的研究進(jìn)展（續(xù)）［J］.中國(guó)茶葉加工，2007（3）：47-50.

［6］戴軍，王洪新，陳尚衛(wèi)等.茶葉及茶多酚中兒茶素的高效液相色譜分析方法研究［J］.色譜，2001（5）：398-402.

孫玉珍（1985-），女，江西撫州人，碩士研究生，講師，研究方向：食品農(nóng)藥殘留測(cè)定和中藥金屬成分分析等。