膀胱尿路上皮癌組織CD44V6、GATA-3的表達變化及與腫瘤病理分級的關系

開蕾，張二春，彭鈞

(安慶市立醫院，安徽安慶246003)

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膀胱尿路上皮癌組織CD44V6、GATA-3的表達變化及與腫瘤病理分級的關系

開蕾，張二春，彭鈞

(安慶市立醫院，安徽安慶246003)

摘要：目的觀察膀胱尿路上皮癌組織CD44變異體6(CD44V6)、鳥嘌呤腺嘌呤胸腺嘧啶腺嘌呤序列結合蛋白3(GATA-3)的表達變化，探討其與膀胱尿路上皮癌病理分級的關系。方法 采用免疫組化Envision法檢測120例膀胱尿路上皮癌組織、60例尿路上皮增生組織CD44V6、GATA-3蛋白的表達，分析不同病理分級膀胱尿路上皮癌組織中二者陽性表達的差異。結果膀胱尿路上皮癌組織、尿路上皮增生組織中CD44V6蛋白陽性表達率分別為49%(59/120)、13%(8/60)，GATA-3蛋白陽性表達率分別為95%(114/120)、62%(37/60),二者CD44V6、GATA-3蛋白陽性表達率比較差異有統計學意義(P均<0.05)。不同病理分級膀胱尿路上皮癌組織中CD44V6、GATA-3蛋白陽性表達率比較差異有統計學意義(P均<0.05)。結論 膀胱尿路上皮癌組織CD44V6、GATA-3蛋白陽性表達率升高，且腫瘤病理分級越高二者陽性表達率越高。

關鍵詞：膀胱尿路上皮腫瘤；CD44變異體6；鳥嘌呤腺嘌呤胸腺嘧啶腺嘌呤序列結合蛋白3

近年來隨著膀胱鏡技術的廣泛應用，尿路上皮癌的檢出率逐漸上升，但膀胱鏡往往取材較少，在鑒別膀胱尿路上皮癌和尿路上皮增生時常遇到困難。探索與發病相關的腫瘤標志物，提高早期診斷水平并采取有效治療措施是成功治療膀胱尿路上皮癌的關鍵。細胞黏附分子CD44變異體6 (CD44V6)參與了多種惡性腫瘤的增殖及轉移過程，在多種惡性腫瘤組織中均表達異常。鳥嘌呤腺嘌呤胸腺嘧啶腺嘌呤序列結合蛋白3 (GATA-3)是細胞內重要的鋅指轉錄因子，參與了細胞的增殖、分化、轉移和凋亡等生理或病理過程。本研究采用免疫組化法檢測膀胱尿路上皮癌組織CD44V6、GATA-3表達，探討其與膀胱尿路上皮癌病理分級的關系。

1資料與方法

1.1臨床資料選擇本院2011年1月~2015年9月經病理檢查確診的膀胱尿路上皮癌組織標本120例(患者男94例、女26例，年齡33~78歲、平均56歲，依據1999版WHO的尿路上皮癌分類標準進行病理分類，分為Ⅰ級(52例)、Ⅱ級(50例)、Ⅲ級(18例)、尿路上皮增生組織標本60例(患者男45例、女15例，年齡42~64歲、平均53歲)，二者性別、年齡比較差異無統計學意義。

1.2膀胱尿路上皮癌組織、尿路上皮增生組織中CD44V6、GATA-3蛋白表達檢測采用免疫組化Envision兩步法。一抗選用CD44V6、GATA-3單克隆抗體，試劑均購自福州邁新生物技術公司。10%中性緩沖甲醛固定，石蠟標本切片3 μm,常規脫蠟至水化；抗原修復；高壓鍋120 ℃保壓8 min, 自來水緩沖10 min，冷卻至室溫；3% H2O2封閉內源性過氧化物酶，室溫10 min；分別加入即用型CD44V6、GATA-3單克隆抗體，于37 ℃培養箱孵育1 h；PBS緩沖液(pH 7.4)沖洗3次，每次3 min；滴加Envision兩步法試劑盒二抗，37 ℃培養箱孵育15 min；PBS緩沖液(pH 7.4)沖洗3次，每次3 min；DAB顯色2 min，Mayer蘇木素復染，逐級乙醇脫水，中性樹膠封片，鏡下觀察。結果判定：選擇6個有代表性的視野，每個視野計數30個細胞，取平均值。細胞無著色為0分、淡棕色為1分、中等棕色為2分、深棕色為3分；陽性細胞百分比<5%為0分、5%~<25%為1分、25%~<50%為2分、50%~<75%為3分、≥75%為4分；以上兩項評分相加>0分為陽性。

1.3統計學方法采用SPSS19.0統計軟件。計數資料比較用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1膀胱尿路上皮癌組織、尿路上皮增生組織中CD44V6、GATA-3蛋白陽性表達比較 膀胱尿路上皮癌組織、尿路上皮增生組織中CD44V6蛋白陽性表達率分別為49%(59/120)、13%(8/60)，GATA-3蛋白陽性表達率分別為95%(114/120)、62%(37/60),二者CD44V6、GATA-3蛋白陽性表達率比較差異有統計學意義(P均<0.05)。

2.2不同病理分級膀胱尿路上皮癌組織中CD44V6、GATA-3蛋白陽性表達比較 病理分級Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級的膀胱尿路上皮癌組織中CD44V6蛋白陽性表達率分別為21.2%(11/52)、64%(32/50)、88.9%(16/18)，GATA-3蛋白陽性表達率分別為63.4%(33/52)、90%(45/50)、100%(18/18)，不同病理分級膀胱尿路上皮癌組織中CD44V6、GATA-3蛋白陽性表達率比較差異有統計學意義(P均<0.05)。

3討論

CD44屬Ⅰ類膜蛋白，是一類介導細胞與細胞或細胞與細胞外基質之間產生相互黏附作用的細胞黏附分子。其在人體組織中分布極為廣泛，主要參與細胞與細胞、細胞與基質之間的特異性粘連過程，從而維持組織與器官的基本結構。其中異構體 CD44V6 與腫瘤浸潤和轉移密切相關。CD44V6蛋白參與了細胞的增殖、分化、轉移及凋亡等過程，在多種惡性腫瘤中都異常表達。研究發現CD44V6在卵巢黏液性腺癌中表達異常，具有促進腫瘤癌變和進展的作用，且可作為藥物干預腫瘤增殖的靶點[1]。研究也發現CD44V6蛋白參與了結腸癌細胞的凋亡過程，且可作為預測腫瘤復發和評價治療效果的重要標志物[2]。安慧敏[3]也證實CD44V6蛋白在結直腸癌和結直腸腺瘤組織中高表達，且可作為臨床診斷和治療的重要蛋白分子。CD44V6蛋白高表達可作為乳腺癌和直腸癌發病的重要標志物[4，5]，也與患者的預后密切相關。這與 CD44V6 在同型細胞間黏附作用有關，細胞-細胞、細胞-基質間黏附性的喪失可能會促使腫瘤逆分化及腫瘤細胞侵襲，導致腫瘤遠處轉移[6]。本研究結果發現，隨著膀胱尿路上皮癌分級的升高，CD44V6蛋白從基底層細胞向靠近膀胱腔表面細胞延伸，分級越高，陽性表達率越高，說明膀胱尿路上皮癌組織中CD44V6的表達與病理分級有顯著相關性。

GATA3屬于 GATA 轉錄因子家族，是高度特異的膀胱癌標志物[7]。近年來研究發現，GATA3 在多種惡性腫瘤細胞的生長調節和分化中起重要作用，并與腫瘤的分級和預后關系密切[8]。GATA3 是CD4+輔助性T細胞Tp 類細胞因子的特異性轉錄因子， 促進抗體的產生、介導體液免疫應答，對抗細胞外的病原體，可以抑制抗腫瘤免疫的功能。Th1/Tp失衡，特別是Tp 細胞數量增多，功能亢進,可以導致多種惡性腫瘤的發生。GATA3調控Tp細胞的分化過程，為控制與治療某些疾病提供了新的靶點[9~11]。本研究發現，120例膀胱尿路上皮癌組織與60例尿路上皮增生組織相比，GATA3在膀胱尿路上皮癌組織中陽性表達為95%，而在尿路上皮增生組織陽性表達僅為62%，GATA3蛋白陽性表達率越高，腫瘤分級越高。因此研究GATA3的表達調控與功能，既能深化人們在分子水平上對CD4+輔助性T細胞分化機制的了解，也能拓寬相關疾病治療的思路，為臨床用藥及預后提供實驗依據。

綜上所述，CD44V6、GATA-3中蛋白陽性表達率越高，腫瘤細胞惡性增殖活性和轉移能力越強，預示患者預后不良。CD44V6、GATA-3在膀胱尿路上皮癌和尿路上皮增生鑒別診斷中具有重要價值。

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(收稿日期：2015-12-27)

中圖分類號：R737.14

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)09-0075-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.09.030