基于WS/T 405-2012行標的血細胞分析參考區間驗證

魏紅璐，王　萍

(重慶市第五人民醫院檢驗科，重慶 400062)

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·論著·

基于WS/T 405-2012行標的血細胞分析參考區間驗證

魏紅璐，王萍△

(重慶市第五人民醫院檢驗科，重慶 400062)

摘要:目的探討《WS/T 405-2012 血細胞分析參考區間》(簡稱WS/T 405-2012)是否適用于該實驗室所在區域人群及實驗室檢測系統。方法根據《WS/T 402-2012臨床實驗室檢驗項目參考區間的制定》(簡稱WS/T 402-2012)與WS/T 405-2012文件要求，選擇健康參考個體40例(男、女各20例)，采用性能評價符合要求的Sysmex XN-1000全自動血液分析儀檢測血液標本，對WS/T 405-2012中血細胞分析項目的參考區間進行驗證。結果參與驗證的血細胞分析項目測定結果均符合WS/T 402-2012要求。結論WS/T 405-2012規定的血細胞分析參考區間可用于該實驗室。

關鍵詞:血細胞分析；參考區間；驗證

本室血細胞分析項目的參考區間一直沿用《全國臨床檢驗操作規程》(第3版)上的參考范圍或采用試劑、儀器廠家提供的參考區間，而上述范圍均不是建立在本地區人群基礎上的參考區間。由于年齡、性別、居住環境、民族、飲食習慣的差異，以及檢驗方法的不同，同一檢測項目使用不同的檢測系統或不同來源的試劑都會使檢測結果不一致。目前，大多數醫院并未對所使用的參考區間進行驗證，而進行了參考區間驗證的實驗室多參照美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)相關文件要求。原衛計委選取東北、華北、西北、華東、華南和西南6地城鄉居民，建立我國居民血常規項目的參考區間，并采用《WS/T 402-2012臨床實驗室檢驗項目參考區間的制定》(簡稱WS/T 402-2012)行標[1]對參考區間的驗證方法進行標準化。為了確保原衛計委規定的參考區間適用于本實驗室，本研究按照行標要求對血細胞分析參考區間進行驗證，現報道如下。

1材料與方法

1.1標本來源2013年7月12～15日于本院進行健康體檢并取得知情同意者，向其發放健康調查表，根據WS/T 402-2012標準[1]篩選出符合以下條件的人群：(1)年齡、性別等信息全面；(2)近期無就醫治療或住院史，未接受手術，未服藥，未輸血；(3)無出血史(包括牙齦出血、血尿等)；(4)無以下各種疾病如消化系統疾病(肝硬化、肝炎、消化性潰瘍、慢性腹瀉、炎性腸炎等)、慢性感染(結核、梅毒等)、腎病、風濕性疾病、代謝和營養相關疾病(糖尿病)、甲狀腺疾病、血液系統疾病(白血病、貧血)、腫瘤、高血壓等；(5)無特殊飲食；(6)無消瘦、營養不良；(7)定期運動；(8)無吸煙、飲酒嗜好；(9)女性未處于妊娠、月經及哺乳期，并且記錄采血情況，要求采血順利，血液標本采集后在2 h內檢測完畢。

1.2儀器與試劑日本Sysmex XN-1000全自動血液分析儀(簡稱XN-1000)及原裝進口配套試劑，質控品由四川新成生物科技有限責任公司提供，乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝靜脈真空采血管。

1.3方法

1.3.1實驗前儀器準備對XN-1000進行校準，性能驗證后各項參數均達標，最近一次室間質評結果合格，實驗當天室內質控結果良好。

1.3.2參考人群數量和年齡分布根據《WS/T 405-2012 血細胞分析參考區間》(簡稱WS/T 405-2012)標準[2]給出的參考區間進行驗證。男女使用相同參考區間的項目選取男、女受試者各10例，年齡23～74歲；男女使用不同參考區間的項目，選取男、女各20例，男性年齡24～77歲，女性年齡22～74歲。

1.3.3觀察項目白細胞(WBC)計數、紅細胞(RBC)計數、血紅蛋白(Hb)、血細胞比容(Hct)、血小板(PLT)計數、中性粒細胞(N)絕對值與百分比、淋巴細胞(L)絕對值與百分比、嗜酸性粒細胞(E)絕對值與百分比、嗜堿性粒細胞(B)絕對值與百分比、單核細胞(M)絕對值與百分比、平均紅細胞體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)。

1.4統計學處理首先對驗證數據進行離群值判斷，按照Dixon方法剔除各組離群值；如剔除離群值后樣本量不足，需補足，補足后再進行離群值判斷，直到滿足要求。然后將數據與需驗證參考區間進行比較，若落在參考限外的測定值不超過2個，則該參考區間可以使用；若超過2個測定值在參考限外，則重新收集標本進行上述驗證過程。方法學統計使用Excel2003軟件。

2結果

2.1XN-1000的性能評價該儀器WBC、RBC、Hb、Hct、PLT的不精密度、攜帶污染率及線性范圍均符合儀器廠家標準。見表1。

表1　　XN-1000的性能評價

2.2各血細胞分析項目驗證結果各項血細胞分析項目測定值超出參考區間的個數均未超過2，其中WBC計數、N絕對值、E絕對值、N百分比、L百分比、E百分比、B百分比、M百分比、PLT計數、MCV、MCH、MCHC、女性RBC計數、男女Hb及女性Hct均無超出參考區間的測定值，L絕對值、B絕對值、M絕對值、男性RBC計數超出參考區間的測定值個數均為1，男性Hct超出參考區間的測定值個數為2。各血細胞分析項目的新標準參考區間均可用于本實驗室。各項指標受試者檢測結果，見表2～4(見《國際檢驗醫學雜志》網站主頁“論文附件”)；各血細胞分析項目參考區間驗證結果，見表5。

表5　　各血細胞分析項目參考區間驗證結果

續表5　　各血細胞分析項目參考區間驗證結果

3討論

本次參考區間驗證選取的參考人群年齡范圍為20～80歲，每10歲選取兩個健康體檢者納入驗證人群，結果顯示原衛計委發布的血細胞分析項目參考區間能夠用于本實驗室。但是，由于RBC計數和Hb的參考區間與之前的標準已不同，因此在臨床應用上如輸血指標、貧血程度判斷指標等是否需要修改還需要進一步的探討。此外，特殊人群如孕婦、各年齡段兒童的參考區間也需要進一步制訂。

在本次參考區間驗證過程中，筆者開始發現本實驗室男性MCHC參考區間無法通過驗證，但是RBC計數、Hb、Hct、MCV、MCH等RBC相關項目的參考區間都能通過驗證。因此，筆者將男性MCHC的均值與原衛計委給定參考區間的中位數進行比較，發現男性MCHC的均值遠高于參考區間中位數，由于選取參考人群樣本量較小(20例)，于是筆者回顧了實驗室近一個月參與體檢的男性MCHC測定值，發現超過20%的男性MCHC值在參考區間的上限。而本次參考區間驗證前已對用于參考區間驗證的儀器進行了校準及性能評價，且在性能評價符合要求后進行參考區間驗證試驗，因此筆者認為儀器性能符合要求，考慮是儀器校準問題。由于MCHC是計算值，Hb與RBC共同影響下可導致MCHC測定值較大的偏差，于是對儀器進行重新調試，糾正了儀器出廠后一般不需要修改的參數值，經調試校準后再重新進行參考區間驗證，結果MCHC參考區間通過驗證。通過本次參考區間的驗證，發現并解決了本實驗室在平時標本檢測中發現MCHC結果偏高的問題，在儀器處于正常狀態和標本采集方法正確的情況下，本地區人群的PLT參考區間也能順利通過驗證，說明判斷本地區PLT普遍偏低的現象是有誤的。本次驗證試驗表明，在做參考區間驗證試驗的過程中若發現參考區間不合適，并不要盲目地認為此參考區間不適用于本實驗室或者不采取措施馬上重新收集參考人群標本進行重新驗證，應該檢查儀器的校準記錄與性能評價結果，查看是否是因為準確度的偏移或者儀器本身原因導致參考區間驗證無法通過，再重新收集標本進行驗證。

生物參考區間是醫生判斷患者正常和出現異常的參考標準，建立合適的參考區間對臨床判斷機體健康與否具有重要意義。但是，按照國際臨床化學協會提出的建立實驗室生物參考區間的方法建立各實驗室的參考區間又存在客觀難度[3]，每個實驗室的每個檢測項目及不同檢測系統分別建立參考區間并不現實，根據NCCLS C28-A2文件[4]及WS/T 402/2012文件[1]的要求進行實驗室參考區間驗證，更加方便實驗室項目的開展。雖然原衛計委針對我國人群建立了各檢測項目相應的參考區間，形成WS/T 405/2012標準[2]，但是由于各地氣候、海拔、民族、飲食存在差異，加上各實驗室使用儀器廠家不同，在此種情況下，實驗室也有必要對標準中的參考區間進行驗證，以判斷該參考區間是否能夠用于本地區人群。

參考文獻

[1]中華人民共和國衛生部．WS/T 402-2012臨床實驗室檢驗項目參考區間的制定[M]．北京：中國標準出版社，2012．

[2]中華人民共和國衛生部．WS/T 405-2012 血細胞分析參考區間[M]．北京：中國標準出版社，2012．

[3]Solberg HE，Stamm D．IFCC recommendation:the theory of reference values.Part 4.Control of analytical variation in the production,transfer and application of reference values[J]．J Automat Chem，1991，13(5)：231-234．

[4]National Committee for Clinical Laboratory standards．C28-A2 How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory[S]．Wayne，PA，USA：NCCLS，2000．

Validation for reference intervals of blood cell analysis based on WS/T 405-2012

WeiHonglu，WangPing△

(DeparementofClinicalLaboratory,theFifthPeople′sHospitalofChongqingCity,Chongqing400062,China)

Abstract:ObjectiveTo explore whether or not the WS/T 405-2012 reference intervals for blood cell analysis(WS/T 405-2012) was suitable for population in this area and testing systems in this laboratory.MethodsAccording to the requirements of documents WS/T 402-2012 define and determine the reference intervals in clinical laboratory(WS/T 402-2012 ) and WS/T 405-2012,40 cases of healthy individuals,including 20 male cases and 20 female cases,were selected.The blood samples were detected by using the Sysmex XN-1000 automatic blood cell analyzer which had met the requirements of performance assessment,then reference intervals of blood cell analysis from WS/T 405-2012 were verified.ResultsThe detection results of all items of blood cell analysis involved in this validation met requirements of WS/T 402-2012.ConclusionThe reference intervals of blood cell analysis from WS/T 405-2012 could be applied for this laboratory.

Key words:blood cell analysis；reference interval；validation

(收稿日期：2015-12-11)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.017

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)05-0621-03

作者簡介：魏紅璐，女，檢驗技師，主要從事質量控制與標準化規范研究。△通訊作者，E-mail：437408052@qq.com。