微粒子化學發光法檢測TPO-Ab及TG-Ab的實驗室性能驗證

耿伏生，張衛慶，蘇麗霞，李艷寧

(安陽市燈塔醫院，河南安陽 455000)

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·臨床研究·

微粒子化學發光法檢測TPO-Ab及TG-Ab的實驗室性能驗證

耿伏生，張衛慶，蘇麗霞，李艷寧

(安陽市燈塔醫院，河南安陽 455000)

摘要:目的對A2000微粒子化學發光儀檢測甲狀腺球蛋白抗體(TG-Ab)及甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)的性能進行實驗室評價，從而驗證該儀器檢測這兩種甲狀腺抗體的可靠性。方法參照美國臨床實驗室標準化協會(CLSI)相關文件的要求，對儀器檢測TG-Ab及TPO-Ab的參數進行精密度、準確度、攜帶污染率及線性范圍的評價分析。結果微粒子化學發光儀檢測這兩種甲狀腺抗體的精密度、準確度、樣本攜帶污染率、線性范圍均在允許范圍之內。結論該微粒子化學發光儀檢測TG-Ab及TPO-Ab的性能符合質量要求，測定結果準確可靠，可對批量標本實現快速處理，基本上滿足實驗室需要。

關鍵詞:甲狀腺過氧化物酶抗體；甲狀腺球蛋白抗體；微粒子化學發光；性能驗證

甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)及甲狀腺球蛋白抗體(TG-Ab)是臨床醫師輔助診斷自身免疫性甲狀腺疾病常用的實驗室檢查指標。有關文獻報道顯示，這兩種抗體聯合檢測可提高甲狀腺疾病診斷的正確率[1]。由于檢測手段的限制，常采用放射免疫法(RIA)來檢測，近幾年來，隨著醫療技術的進步和革新，化學發光法檢測甲狀腺抗體成為可能，特別是微粒子化學發光和電化學發光的應用，更加提高了檢測的靈敏度和特異度，并豐富了甲狀腺疾病診斷的新方法[2]。A2000微粒子化學發光儀是由鄭州安圖綠科生物有限公司生產的一款完全具備自主知識產權的化學發光儀，為驗證該設備及其配套試劑檢測TG-Ab及TPO-Ab的可靠性，筆者參照美國臨床實驗室標準化協會(CLSI)制訂的方案對其精密度、準確度、線性范圍、攜帶污染率等指標進行評價分析，以驗證主要指標性能是否滿足實驗室需要。

1材料與方法

1.1標本來源高、低值濃度的血清來自2015年1～5月在本院住院的患者。均在基礎狀態下采集新鮮血液標本，2 h內送檢，2 500 r/min離心分離血清備用，標本要求無溶血、黃疸和脂血。

1.2儀器與試劑鄭州安圖生物工程股份有限公司生產的A2000微粒子化學發光儀及相關配套試劑(TPO-Ab批號：20150430；TG-Ab批號：20150119)，標準品(TPO-Ab批號：2015040801；TG-Ab批號：2014121503)，質控品(批號：2015040801)。

1.3方法在儀器狀態良好的情況下，按照CLSI制訂的驗證方案對TG-Ab及TPO-Ab進行性能驗證。

1.3.1精密度批內不精密度：準備高值、低值兩個水平血清樣品分別連續檢測20次，每次各重復測定2個結果，計算參數的批內不精密度；批間不精密度：把血清隨機插入日常標本中進行測定，重復測定20 d，計算參數的批間不精密度。

1.3.2準確度分別測定不同于當前校準品批號的另一種校準品，稀釋成高、低值濃度，連續測定5 d，與靶值相比較，并計算其相對偏差(Bias)[3]。

1.3.3攜帶污染率試驗按照中國行標推薦的方法，選擇滿足高低條件的新鮮血清樣品，連續測定3次高值樣品，結果記為：H1、H2、H3；立即連續測定3次低值樣品，結果記為：L1、L2、L3；分別計算各項指標的攜帶污染率，攜帶污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%。

1.3.4線性范圍取高值血清樣品進行梯度稀釋為10%、20%、40%、60%、80%、100%。然后從低值到高值測定不同稀釋度的樣品，每份重復測定2次，通過線性回歸方程，得出決定系數(R2)。

2結果

2.1精密度

2.1.1批內不精密度選擇高、低值兩個濃度的新鮮樣品進行測定，統計TPO-Ab和TG-Ab的批內不精密度，分別分析其CV均在允許范圍內(CV≤15.0%)。見表1。

2.1.2批間不精密度隨機抽取3個不同批號的試劑，分別對濃度為高、低值的樣品進行檢測，統計TPO-Ab和TG-Ab的批間不精密度，分別分析其CV均在允許范圍內(CV≤15.0%)。見表2。

表1　　批內不精密度試驗結果

表2　　批間不精密度試驗結果

2.2準確度測定不同于當前校準品批號的另一種校準品，稀釋成高、低值濃度，分別與靶值相比較，并計算Bias，檢測高、低值樣品TPO-Ab的Bias分別為7.55%、8.30%，檢測高、低值樣品TG-Ab的Bias分別為-8.95%、6.92%，均在±10%范圍內，表明檢測系統準確度高。見表3。

表3　　準確度試驗結果

2.3攜帶污染率連續測定3次高值血清樣品，結果記為：H1、H2、H3；立即連續測定3次低值血清樣本，結果記為：L1、L2、L3；分別計算樣本攜帶污染率，均符合要求。見表4。

2.4線性范圍線性范圍較好，且濃度與稀釋率具有良好的線性關系，結果顯示TG-Ab線性范圍為11.0～1 800.0 IU/mL，TPO-Ab線性范圍為0～380 IU/mL，與廠家注明的線性范圍基本相符。見表5。

表4　　攜帶污染率結果

表5　　線性范圍測定結果

3討論

TG-Ab常存在于患有自身免疫甲狀腺疾病的患者體內，大約10%的健康人有低水平的TG-Ab；30%的Grave′s患者和85%的Hashimoto′s甲狀腺患者存在較高水平的TG-Ab[4]。然而在這些疾病中，高水平的TPO-Ab比高水平的TG-Ab更為常見[5]。因此，兩種抗體的同時檢測可提高甲狀腺自身抗體的陽性檢出率。微粒子化學發光法檢測TG-Ab和TPO-Ab采用間接法，用抗原包被磁微粒，辣根過氧化物酶標記抗人IgG抗體制備酶結合物。通過免疫反應，形成抗原-抗體-酶標二抗復合物，該復合物催化發光底物發出光子，發光強度與抗體水平成正比。

保證檢驗結果的準確性是實驗室工作人員不懈追求的目標，本次驗證實驗中TG-Ab和TPO-Ab的精密度與準確度都在儀器允許范圍之內，樣品攜帶污染率基本符合要求，線性范圍基本能覆蓋臨床標本濃度范圍，檢測濃度與稀釋倍數呈線性相關。與傳統的酶聯免疫法、RIA法相比較，微粒子化學發光法具有可全自動化、操作簡便、靈敏度高、線性寬、無放射性污染等優點。

通過系統驗證A2000微粒子化學發光儀檢測TG-Ab和TPO-Ab的基本分析性能的主要性能指標，表明A2000微粒子化學發光儀及其配套試劑檢測TG-Ab和TPO-Ab的性能良好，測定結果準確可靠，可對批量標本實現快速處理，基本能滿足實驗室需要。

參考文獻

[1]彭鳴亞，徐龍寶，鄧民斌，等．ECLIA法與RRA法檢測血清促甲狀腺激素受體抗體的對比研究[J]．中國醫藥指南，2011，9(20)：186-187．

[2]姚韓．血清促甲狀腺激素受體抗體(TRAb)測定在甲狀腺疾病臨床診斷中的應用價值[J]．吉林醫學，2013，34(31)：6513-6514．

[3]張葵．定量檢測系統方法學性能驗證實驗的基本方法[J]．臨床檢驗雜志，2009，27(5)：321-323．

[4]李玉姝，單忠艷，關海霞，等．甲狀腺過氧化物酶抗體和甲狀腺球蛋白抗體陽性臨界值的確定及其臨床意義[J]．中華檢驗醫學雜志，2006，29(9)：780-783．

[5]仝德勝，許國新，沈國強．時間分辨熒光免疫法和電化學發光法檢測AFP的比較[J]．實驗與檢驗醫學，2010，28(1)：45-46．

(收稿日期：2015-10-16)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.043

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)05-0674-03