忍冬葉環烯醚萜苷類化學成分研究

陳靜嫻,耿巖玲，于金倩，朱姮，王曉，王岱杰*，牟玉柱，李圣波

(1. 山東師范大學生命科學學院，山東 濟南 250014；2. 山東省分析測試中心，山東 濟南 250014；3. 煙臺張裕葡萄釀酒股份有限公司，山東 煙臺 264000；4. 山東亞特生態技術股份有限公司，山東 臨沂 276017)

?

忍冬葉環烯醚萜苷類化學成分研究

陳靜嫻1,耿巖玲2，于金倩2，朱姮2，王曉2，王岱杰2*，牟玉柱3，李圣波4

(1. 山東師范大學生命科學學院，山東 濟南 250014；2. 山東省分析測試中心，山東 濟南 250014；3. 煙臺張裕葡萄釀酒股份有限公司，山東 煙臺 264000；4. 山東亞特生態技術股份有限公司，山東 臨沂 276017)

摘要：利用硅膠、Sephadex LH-20以及制備液相色譜等方法進行分離純化，從忍冬葉中分離得到3個環烯醚萜苷類化合物，以及β-谷甾醇和胡蘿卜苷。通過理化性質、波譜數據分析，分別鑒定為裂環馬錢素酸、demethylsecologanol、裂環馬錢素、β-谷甾醇和胡蘿卜苷，其中化合物demethylsecologanol為首次從該屬植物中分離得到。

關鍵詞：忍冬葉；環烯醚萜苷；demethylsecologanol；分離

忍冬(LonicerajaponicaThunb.)為忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬屬(Lonicera)多年生常綠藤本植物，是我國傳統中藥，藥用部位在歷史上經歷了莖葉-莖葉花-花的變遷歷程[1-3]。長期以來，忍冬的花和藤分別作為藥材金銀花和忍冬藤被《中國藥典》收錄[4-5]。忍冬葉為金銀花和忍冬藤的副產物，產量約為花的10倍，其黃酮類、環烯醚萜苷類和咖啡?？鼘幩犷惓煞趾控S富。忍冬葉產量雖較高，卻一直被視為非藥用部位而未得到充分開發利用，造成資源浪費[6]。

本實驗對忍冬葉化學成分進行研究，分離得到3個環烯醚萜苷類化合物，裂環馬錢素酸(1)、demethylsecloganol(2)、裂環馬錢素(3)以及β-谷甾醇(4)和胡蘿卜苷(5)，其中化合物2為首次從該屬植物中分離得到。

1儀器與材料

Varian-600核磁共振波譜儀(美國Varian公司)；Agilent 1100/MSD液質聯用儀(美國Agilent公司)；R-230旋轉蒸發儀(瑞士Buchi公司)；L-3000液相色譜儀(北京普源精電科技有限公司)；SB-5200D超聲波清洗儀(寧波新芝生物科技股份有限公司)；TH-II型薄層加熱器(上?？普苌萍加邢薰?。

薄層硅膠GF254、薄層硅膠H、200～300目柱色譜用硅膠(青島海洋化工廠)；Sephadex LH-20(瑞典GE公司)；石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、95%乙醇、甲醇為分析純，購自濟南吉武化學試劑有限公司；液相色譜用乙腈、甲醇(美國TEDIA公司)，水為高純水。

忍冬葉由山東亞特生態技術有限公司提供，秋季采收，陰干。樣品經山東中醫藥大學李佳教授鑒定為忍冬(LonicerajaponicaThunb.)的葉。

2提取與分離

將10 kg忍冬葉粉碎，80%乙醇回流提取3次，每次2 h，旋蒸提取液至無醇味，依次用等體積石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取3次，減壓濃縮、冷凍干燥，得各自萃取部位。正丁醇部位(120 g)采用MCI粗分離，依次用5倍柱體積純水、20%甲醇、40%甲醇、60%甲醇、80%甲醇和100%甲醇洗脫，減壓濃縮，冷凍干燥。20%甲醇部位經Sephadex LH-20凝膠色譜和制備HPLC分離得到化合物1(38 mg)；40%甲醇部位經Sephadex LH-20凝膠色譜和制備HPLC分離得到化合物2(31 mg)、化合物3(33 mg)。乙酸乙酯部位(150 g)氯仿-甲醇(100:0→0:100)梯度洗脫，得到8個組分。組分2經反復硅膠柱色譜及凝膠色譜Sephdex LH-20分離得到化合物4(75 mg)；組分5經反復硅膠柱色譜及凝膠色譜Sephdex LH-20分離得到化合物5(26 mg)。

3結構鑒定

化合物1：白色粉末。ESI-MS：m/z405.1 [M+H]+，427.1 [M+Na]+，403.1 [M-H]-。1H-NMR(600 MHz, DMSO-d6):δ7.43 (1H, s, H-3), 5.53 (1H, m, H-8), 5.39 (1H, d,J=3.6 Hz, H-1), 5.24 (1H, m, H-10), 5.19 (1H, m, H-10), 4.49 (1H, d,J=7.8 Hz, H-1′), 3.67 (1H, d,J=11.4 Hz, H-6′), 3.61 (3H, br s, -OCH3), 3.43 (1H, m, H-5′), 3.42 (1H, m, H-6′), 3.18 (1H, m, H-3′), 3.14 (1H, m, H-4′), 3.03 (1H, t,J= 9.6 Hz, H-5), 2.97(1H, t,J= 8.4 Hz), 2.78 (1H, m, H-9), 2.76 (1H, m, H-6), 2.13 (1H, dd,J=9.0, 15.6 Hz, H-6)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6):δ173.8 (C-7), 168.9 (C-11), 152.3 (C-3), 133.8 (C-8), 120.3 (C-10), 108.8 (C-4), 99.0 (C-1′), 95.9 (C-1), 77.8 (C-5′), 77.2 (C-3′), 73.4 (C-2′), 70.4 (C-4′), 61.5 (C-6′), 43.5 (C-9), 51.4 (-OCH3), 34.3 (C-6), 27.4 (C-5)。以上數據與文獻報道基本一致[7]，故鑒定化合物1為裂環馬錢素酸。

化合物2：白色粉末。ESI-MS：m/z377.2 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6):δ7.35 (1H,J=2.4 Hz, H-3), 5.47 (2H, m, H-1, 8), 5.30 (1H, d,J=1.8 Hz, H-10), 5.24 (1H, d,J=1.8 Hz,H-10), 4.50 (1H, d,J=7.8 Hz, H-1′), 2.65 (1H, m, H-5), 2.51 (1H, d, H-9), 1.76 (1H, m, H-6), 1.51 (1H, m, H-6)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6): δ 165.1 (C-11), 151.8 (C-3), 132.8 (C-8), 120.7 (C-10), 105.2 (C-4), 98.5 (C-1′), 96.0 (C-1), 77.8 (C-5′), 76.8 (C-3′), 73.5 (C-2′), 70.4 (C-4′), 68.1 (C-6′), 61.4 (C-7), 41.9 (C-9), 27.2 (C-6), 24.7 (C-5)。以上數據與文獻報道基本一致[8]，故鑒定化合物2為demethylsecologanol。

化合物3：白色粉末。ESI-MS：m/z389.3 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6):δ9.63 (1H, s, H-7), 7.50 (1H, s, H-3), 5.56 (1H, m, H-8), 5.41 (1H, d,J=4.2 Hz, H-1), 5.21 (2H, m, H-10), 4.51 (1H, d, J=8.4 Hz, H-1′), 3.56 (1H, s, -OCH3), 3.32 (1H, d, m, H-1)；13C-NMR (150 MHz,DMSO-d6)：δ200.5 (-COOH), 167.0 (C-11), 152.8(C-3), 134.1 (C-8), 120.4(C-10), 108.6 (C-4),99.0(C-1′), 95.8(C-1), 77.8 (C-3′), 77.1 (C-5′), 73.4(C-2′), 70.4 (C-4′), 61.5 (C-6′), 51.5(-OCH3), 44.0 (C-9), 43.8 (C-6), 26.5 (C-5)。以上數據與文獻報道基本一致[9]，故鑒定化合物3為裂環馬錢素。

化合物4：白色粉末。Molish反應和Liebermann-Burchard反應均為陽性，表明為甾體苷類化合物。ESI-MS：m/z413.5 [M-H]-。TLC與β-谷甾醇對照品Rf一致，故確定化合物4為β-谷甾醇(β- Sitosterol)。

化合物5：白色粉末，Molish反應和Liebermann-Burchard反應均為陽性，表明為甾體苷類化合物。ESI-MS：m/z575.5 [M-H]-。TLC與胡蘿卜苷對照品Rf一致，故確定化合物5為胡蘿卜苷(Daucosterol)。

4結論

忍冬葉雖然產量高、采收周期長且采收方法簡單，卻一直被視為非藥用部位而未得到充分開發利用。環烯醚萜類成分是一些動植物的自身防御物質，同時具有廣泛的生物活性，也是植物的有效成分之一。本研究對忍冬葉中環烯醚萜苷類成分進行化學研究，分離得到裂環馬錢素酸、demethylsecologanol、裂環馬錢素3個環烯醚萜苷類化合物以及β-谷甾醇和胡蘿卜苷，其中demethylsecologanol為首次從忍冬屬植物中分離得到，該研究為忍冬葉的進一步開發利用提供了理論基礎。

參考文獻:

[1]張永清, 王麗萍, 劉志敏. 金銀花名稱本草考證 [J]. 山東中醫藥大學學報, 1998, 22(6): 456-457.

[2] 康帥, 張繼, 魏愛華, 等. 金銀花的本草再考證 [J]. 藥物分析雜志, 2014, 34(11): 1922-1927.

[3] 張衛, 黃璐琦, 李超霞, 等. 金銀花品種的本草考證 [J]. 中國中藥雜質, 2014, 39(12): 2239-2245.

[4] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典2015年版一部 [S]. 北京: 中國醫藥科技出版社, 2015: 164.

[5] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典2010年版一部 [S]. 北京: 中國醫藥科技出版社, 2010: 193.

[6] 牛曉雪, 崔旭盛, 蘇賀, 等. 高效液相色譜法同時測定忍冬中7種成分 [J]. 色譜, 2012, 30(2): 211-214.

[7] MACHIDA K, ASANO J, KIKUCHI M. Caeruleosides A and B, bis-iridoid glucosides from Lonicera caerulea [J]. Phytochemistry, 1995, 39(1): 111-114.

[8] KITAJIMA M, FUJII N, YOSHINO F, et al. Camptothecins and two new monoterpene glucosides from Ophiorrhiza liukiuensis [J]. Chem Pharm Bull, 2005, 53(10): 1355-1358.

[9] JENSEN S R, LYSE-PETERSEN S E, NIELSEN B J. Novel bis-iridoid glucosides from Dipsacus sylvestris [J]. Phytochemistry, 1979, 18(2): 273-277.

Chemical constituent analysis of iridoid glycosides from leaves ofLonicerajaponicaThunb.

CHEN Jing-xian1,GENG Yan-ling2,YU Jin-qian2,ZHU Heng2,WANG Xiao2,WANG Dai-jie2*, MOU Yu-zhu3,LI Sheng-bo4

(1. School of Life Sciences, Shandong Normal University, Jinan 250014, China;2. Shandong Analysis and Test Center, Jinan 250014, China;3. Yantai Changyu Pioneer Wine Co. Ltd., Yantai 264000, China;4. Shandong Yate Ecological Technology Co. Ltd., Linyi 276017, China)

Abstract∶Three iridoid glycoside compounds were purified and isolated from leaves of Lonicera japonica Thunb. (L. japonica) with silica gel, sephadex LH-20 and preparative HPLC. Through analysis of spectrum data and physicochemical properties, we identified them as secoxyloganin, demethylsecologanol, secologanin,β-sitosterol and daucosterol.Compound demethylsecologanol is originally isolated from Lonicera.

Key words∶leaf of Lonicera japonica Thunb.; iridoid glycosides; demethylsecologanol; separation

中圖分類號：R284.1

文獻標識碼：A

文章編號：1002-4026(2016)02-0001-03

作者簡介：陳靜嫻 (1991-)，女，碩士研究生，研究方向為天然產物分離純化與活性研究。*通訊作者。Email: wangdaijie@126.com

基金項目：國家自然科學基金(81473298)；山東省科技發展計劃(2014GSF119031)

收稿日期：2015-10-14

DOI:10.3976/j.issn.1002-4026.2016.02.001

【中藥與天然活性產物】