CNVp lex技術在自然流產檢測中的應用

[摘要]目的：研究分析運用CNVplex高通量多重基因拷貝數檢測技術對早期自然流產患者胚胎絨毛組織的染色體數目檢測的臨床價值。方法：在早期自然流產患者中隨機抽取20例為研究對象，用CNVplex高通量多重基因拷貝數檢測技術對患者胚胎絨毛組織的13號染色體、18號染色體、21號染色體及性染色體數目進行快速檢測。結果：通過CNVplex技術與染色體核型分析技術的對比，20例中有2例由于細胞培養失敗而無法進行核型分析，其他18例用兩種方法檢測出的結果一致；其中檢測出染色體數目異常的有12例，占總比的60%。結論：CNVplex技術在自然流產胚胎絨毛組織的染色體數目異常診斷中具重要價值，為產前篩查及流產兒病因確認提供，臨床參考。

[關鍵詞]自然流產：CNVplex；染色體

自然流產是一種胚胎停止發育或胚胎死亡的婦產科常見疾病，其中胚胎停育自然流產的絨毛染色體異常率可達50%70%。CNVplex技術是一種雙連接產物多重熒光PCR擴增技術，于同一反應管內可同時檢出48-480個不同核苷酸序列拷貝數的變化。與“金標準”的染色體核型分析技術比較，CNVplex具有通量高、準確性高、分辨率高、重復性高、快速高效的特點。通過CNVplex檢測方法針對每條染色體短、長臂區設計探針，通過檢測這些區域的拷貝數變化就可以判斷每條染色體數目的缺失和重復。現隨機抽取自然流產患者共20例，對其進行CNVplex快速檢測。

1資料與方法

1.1一般資料

從2013年12月到2014年12月在各醫院治療的早期自然流產患者中抽取20例為研究對象。年齡23-45歲的孕婦患者，孕齡在7-13周，其中有過1次流產患者為12例，有過2次流產的為3例，3次流產的為5例。

1.2檢測方法

1.2.1標本取材

選擇流產患者的胚胎絨毛組織，首先用生理鹽水清洗干凈；然后在解剖顯微鏡下將絨毛與蛻膜組織分開，取2mg樣本用酚氯仿提取基因組DNA，并將DNA濃度標定至50ng/ul。

1.2.2 CNVplex檢測

采用天昊生物醫藥科技（蘇州）有限公司N1008人類24條染色體非整倍體檢測試劑盒。連接反應、連接產物多重熒光PCR擴增、擴增產物熒光毛細管電泳分離均參考試劑盒說明書。PCR擴增產物用美國ABI公司ABl3 130XL進行毛細管電泳，原始數據文件采用GeneMapper4.1進行目標峰高的數據讀取，進而對樣本目的區域的拷貝數進行分析確定.

2結果

20例自然流產絨毛組織都在2周內進行了細胞培養，其中有18例核型分析成功，占比90%；由于獲取絨毛組織時母血污染導致核型分析失敗l例，占比5%；而由于活性細胞數量少，細胞活性差，而導致核型分析失敗的1例，占比5%。20例自然流產絨毛組織都在3日內進行CNVplex檢測（成功率為100%），核型分析失敗的2例也得到結果。兩種方法都檢測成功的18例結果完全一致（100%）。通過比較不同次數流產患者的胚胎絨毛組織的染色體異常情況，發現隨著流產次數的增加，染色體數目異常的風險也逐步增加。

3討論

孕婦的早期流產大多數都是由胚胎組織染色體數目異常所致，并且流產的風險會隨流產次數增加而增加。胚胎停育是一種嚴重影響婦女身心健康的疾病，發病率逐年上升，其發病原因非常復雜。目前國內外對胚胎停育的研究很多，大多數人認為導致自然流產的原因與遺傳、男性精液異常、內分泌、免疫、感染、環境因素、理化因素等有關，另外還有相當一部分病因不明，其中遺傳因素是導致自然流產最為重要的因素；其中，自然流產絨毛的染色體異常率可達50%～70%。

CNVplex的檢測原理：利用雙連接產物多重熒光PCR擴增原理，對染色體的拷貝數進行分析確定。其探針穩定可以長時間保存，研究表明其具有高效、準確、靈敏、快速等優點，現被廣泛應用在基因診斷研究領域。

4結論

本次研究通過CNVplex技術檢測早期流產患者染色體異常的情況，由檢測值與常規染色體核型對比分析結果一致。在檢測出染色體異常的12例患者中，三體異常的患者最多，有7例，占比58%，其次為X單體，占比25%。研究結果還表明，染色體異常隨著產婦流產次數和孕齡的增大而增大。與核型分析相比，CNVplex技術在早期自然流產胚胎絨毛組織的染色體數目檢測上具有實際臨床應用價值，尤其對細胞培養失敗的而無法進行核型分析的樣本。對流產絨毛病因的檢測分析，為指導孕婦再妊娠時提供依據與預防措施。