多種氨基酸膠囊的功能學(xué)實驗研究

[摘要]目的：研究多種氨基酸膠囊對化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)功能。方法：以0.2g/kg.bw、0.4g/kg·bw、1.2g/kg·bw劑量的多種氨基酸膠囊內(nèi)容物給小鼠經(jīng)口灌胃30d后，以乙醇造成急性肝損傷模型.結(jié)果：受試物對小鼠體重?zé)o明顯影響。1.2g/kg·bw劑量組動物的肝臟甘油三酯（TG）明顯低于模型對照組，肝臟還原型谷胱甘肽（GSH）明顯高于模型對照組，差異具有顯著性（P<0.05）。1.2g/kg·bw劑量組動物的肝臟脂肪變性程度明顯低于模型對照組，差異有顯著性（P<0.05）.結(jié)論：多種氨基酸膠囊對化學(xué)性肝損傷具有輔助保護(hù)功能。

[關(guān)鍵詞]功能學(xué)；L-半胱氨酸；L-谷氨酰胺；甘氨酸；牛磺酸

氨基酸對化學(xué)性肝損傷具有輔助保護(hù)功能已有相關(guān)報道，本文實驗研究了多種氨基酸膠囊的功能，為相關(guān)功能性食品的開發(fā)提供參考依據(jù)。

1材料和方法

1.1樣品

多種氨基酸膠囊由深圳市榮格保健品有限公司提供，主要成分為L-半胱氨酸、L-谷氨酰胺、甘氨酸和牛磺酸。人體口服推薦量為每日2次，每次3粒，成人體重按60kg計算，折合劑量0.04 g/kg·bw。

1.2實驗動物及環(huán)境

由長沙市開福區(qū)東創(chuàng)實驗動物科技服務(wù)部提供的SPF級雄性昆明種小鼠50只，體重18～22g，實驗動物生產(chǎn)許可證號SCXK（湘）2009-0012。實驗動物使用許可證號為SYXK（湘）2010-0010。實驗環(huán)境為屏障系統(tǒng)，溫度為23℃～24℃，濕度52%～56%。

1.3劑量選擇與受試物給予方式

設(shè)多種氨基酸膠囊三個劑量組分別為0.2g/kg·bw、0.4g/kg·bw、1.2g/kg·bw（分別相當(dāng)于人體推薦劑量的5、10、30倍），同時設(shè)空白對照組和肝損傷模型對照組。低、中、高劑量受試液配制時，分別取多種氨基酸膠囊內(nèi)容物2.00g、4.00g、12.00g加蒸餾水至200ml，每天給小鼠灌胃1次，連續(xù)30天，灌胃體積為0.2ml/10g·bw，空白對照組和肝損傷模型對照組給予蒸餾水。

1.4主要儀器與試劑

1.4.1主要儀器

OLYMPUSAU400全自動生化分析儀、722分光光度計、加樣器、恒溫水浴鍋、離心機、混懸器、組織勻漿器

1.4.2試劑

丙二醛（MDA）、還原型谷胱甘肽（GSH）測試盒由南京建成生物工程研究所提供，甘油三酯（TG）測試盒由溫州東甌生物工程有限公司提供。

1.5試驗方法

1.5.1動物處理

各劑量組按1.3灌胃給予受試液，空白對照組、模型對照組灌胃給予蒸餾水，每日1次，連續(xù)30天。第30天各劑量組和模型對照組灌胃給予50%乙醇（12ml/k20BW），造成急性肝損傷模型，空白對照組灌胃給予等體積蒸餾水，禁食16小時處死動物，進(jìn)行各項指標(biāo)檢測及病理組織學(xué)檢查。

1.5.2指標(biāo)檢測

取肝臟用生理鹽水制成10%的肝勻漿，檢測肝組織中還原型谷胱甘肽（GSH）和甘油三酯（TG）的含量。另取肝臟用0.2M磷酸鹽緩沖液制成5%肝勻漿，檢測肝組織中丙二醛（MDA）的含量。肝組織內(nèi)GSH/MDA含量按南京建成生物工程研究所提供的測試盒說明書進(jìn)行，肝組織內(nèi)TG含量用OLYMPUS AU400全自動生化分析儀測定。

1.5.3病理組織學(xué)檢查

從小鼠肝左葉中部做橫切面取材，冰凍切片，蘇丹Ⅲ染色。鏡檢時從肝臟的一端視野開始記錄細(xì)胞的病理變化，用40倍物鏡連續(xù)觀察整個組織切片，觀察脂滴在肝臟的分布、范圍和面積，并按以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分：0分，肝細(xì)胞內(nèi)脂滴散在、稀少；1分，含脂滴的肝細(xì)胞不超過1/4；2分，含脂滴的肝細(xì)胞不超過1/2；3分，含脂滴的肝細(xì)胞不超過3/4；4分，肝組織幾乎被脂滴代替。

1.6實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計

各劑量組與模型對照組比較用Spssl1.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。

1.7結(jié)果判定

肝組織中丙二醛（MDA）、還原性谷胱甘肽（GSH）、甘油三酯（TG）三項檢測指標(biāo)結(jié)果陽性，或肝組織中丙二醛（MDA）、還原性谷胱甘肽（GSH）、甘油三酯（TG）三項指標(biāo)中任兩項指標(biāo)陽性或病理檢測結(jié)果陽性，可判定受試樣品對化學(xué)性肝損傷具有輔助保護(hù)功能。

2結(jié)果

2.1多種氨基酸膠囊對動物體重的影響

見表1各劑量組體重與模型對照組及空白對照組比較，差異均無顯著性（P>0.05）

2.2種氨基酸膠囊對肝組織中MDA、GSH、TG含量的影響

由表2可見，模型對照組的MDA、TG均高于空白對照組，模型對照組的GSH低于空白對照組，差異均有顯著性（P<0.01）。高劑量組的TG明顯低于模型對照組，GSH明顯高于模型對照組，差異有顯著性（P<0.05）。

2.3多種氨基酸膠囊對肝組織病理的影響

由表3可見，模型對照組肝臟脂肪變性的程度高于空白對照組，差異有顯著性（P<0.01）；高劑量組肝臟脂肪變性的程度明顯低于模型對照組，差異有顯著性（P<0.05）。

3結(jié)論

本實驗室條件下，以0.2g/kg.bw、0.4g/kg·bw、1.2g/kg.bw劑量的多種氨基酸膠囊給小鼠經(jīng)口灌胃30d后，以乙醇造成急性肝損傷模型。受試物對小鼠體重?zé)o明顯影響。1.2g/kg·bw劑量組動物的肝臟TG明顯低于模型對照組，肝臟GSH明顯高于模型對照組，差異具有顯著性（P<0.05）。1.2g/kg·bw劑量組動物的肝臟脂肪變性程度明顯低于模型對照組，差異有顯著性（P<0.05）。提示該多種氨基酸膠囊對化學(xué)性肝損傷具有輔助保護(hù)功能。

4討論

姜萬春等研究L-半胱氨酸合劑對氯乙烯所致肝腫瘤及肝損傷的預(yù)防作用。對氯乙烯所致腫瘤及肝損傷的動物喂食L-半胱氨酸合劑進(jìn)行實驗觀察。結(jié)果證實了L-半胱氨酸合劑對氯乙烯所致的肝細(xì)胞損傷有明顯的保護(hù)作用。

結(jié)果表明，GLN可保護(hù)CC14所致大鼠急性肝損傷，降低血清ALT、AST水平，抑制肝組織NF-κB、TNF-α的表達(dá)，保護(hù)肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)及功能完整，減少肝細(xì)胞的凋亡及脹亡。