服用百草枯、溴敵隆中毒的檢驗(yàn)研究

【摘要】百草枯是一種毒性極強(qiáng)的除草劑，而溴敵隆則為毒性較強(qiáng)的殺鼠藥物，在生活中比較常見也比較容易獲得，尤其是我國(guó)農(nóng)村地區(qū)，經(jīng)常有使用這兩類藥物服毒或意外死亡的案例報(bào)道。本文介紹了生物檢材中百草枯和溴敵隆的液相萃取，即利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜，同時(shí)配備不同的色譜柱，對(duì)百草枯和溴敵隆進(jìn)行定性分析的方法。

【關(guān)鍵詞】毒物檢驗(yàn)；百草枯；溴敵隆；法醫(yī)毒物學(xué)

1案情

某年某月某日，有群眾報(bào)案稱其親屬某男因涉嫌殺人未遂后服毒自殺解剖后提取死者的心血、胃內(nèi)容作為檢材。

2毒物分析

2.1百草枯的檢驗(yàn)

2.1.1檢材前處理

生物檢材采用液一液萃取，各取心血0.2mL、胃內(nèi)容0.1g，分別加0.8mL、0.9mL水浸泡超聲10 min，后將上述檢材分別用1mL乙腈沉淀蛋白，12000r/min離心5min，取上清液，用0.45μm濾膜過濾后待檢。

2.1.2主要儀器及試劑

儀器：混合線性離子阱質(zhì)譜儀（ABI4000 Q-TRAP），配高效液相色譜儀（Agilent1200）和Agilent 1200自動(dòng)進(jìn)樣器。

試劑：百草枯（購(gòu)自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所）；乙腈、甲酸（均為HPLC級(jí)）；乙酸銨（分析純）；超純水由Milli-Q（Mill—pore純水系統(tǒng)）制得。

2.1.3儀器操作條件

液相條件：色譜柱Atlant HILIC silica3.01xm3.0x100mm，流動(dòng)相：乙腈/5mmol/L醋酸銨緩沖液（含0.1%甲酸）=75/25，流速0.5/min：柱溫：30～C；進(jìn)樣量：51xL。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI）.，正離子掃描（ESI+），多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）檢測(cè)；離子源（IS）： 5500V：碰撞氣（CAD）：4PSI：氣簾氣（CUR）：30Psi：霧化氣（Gsl）：40psi；輔助氣（GS2）：30Psi：離子源溫度（TEM）：500～C；母離子（Q1）：171，子離子（Q3）：77，駐留時(shí)間（Dwelltime）：200ms。

2.2溴敵隆的檢驗(yàn)

2.2.1檢材前處理

采用液一液提取方法：分別取心血lmL、胃內(nèi)容1克于2個(gè)離心管中，分別加入0.5mL pH6.O的磷酸鹽緩沖液，5mL5%乙醇/乙酸乙酯（V/V），0.5mLl%三氯醋酸（W/V）溶液后渦旋混合5min，浸泡超聲10min，12000r/min離心5min，將有機(jī)層轉(zhuǎn)移至另一玻璃試管，殘留物用5mL5%乙醇/乙酸乙酯進(jìn)行第二次提取，將兩次提取物合并后置于50～C水浴中氮?dú)饬飨麓蹈桑瑲埩粑镉胠mL甲醇溶解，經(jīng)0.451xm濾膜過濾后待檢。

2.2.2主要儀器及試劑

儀器：混合線性離子阱質(zhì)譜儀（ABI4000 Q-TRAP），配高效液相色譜儀（Agilent1200）和Agilent 1200自動(dòng)進(jìn)樣器。

試劑：溴敵隆（購(gòu)自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所）；乙醇、乙腈、甲醇、乙酸乙酯（均為HPLC級(jí)）；乙酸銨、三氯醋酸（均為分析純）；超純水由Milli-Q（Millpore純水系統(tǒng)）制得。

2.2.3儀器操作條件

液相條件：色譜柱PhenomenexKinetex c18（100mmX4.60mm，2.6μm），前接Phenomenex c18保護(hù)柱（4mmx2.0mm），流動(dòng)相：A為10 mmol/L醋酸銨緩沖液，B為甲醇，梯度洗脫程序：0～2mm 70%A：2～8min 70%～30%A：8～12min30%～5%A：12～14min 5%A：14～18mm 5%～70%A；18～20min70%A。整個(gè)分析過程共20mm；流速：0.5mL/min柱溫：30～C；進(jìn)樣量：5UL。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI），，負(fù)離子掃描（ESI-），多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）檢測(cè)；離子源（Is）：一4500V～碰撞氣（cAD）：8psi；氣簾氣（CUR）：45Psi；霧化氣（GSl）：60Psi輔助氣（GS2）：60psi；離子源溫度（TEM）：500～C；母離子（Q1）：526.9，子離子（Q3）：250，駐留時(shí)間（Dwelltime）：50ms。

3討論

本文使用液質(zhì)聯(lián)用儀，利用液相色譜的高效分離能力和質(zhì)譜良好的定性功能，有效解決了殺鼠劑溴敵隆和除草劑百草枯的快速定性。以百草枯為例，利用液質(zhì)的MRM-IDA—EPI掃描模式，除采集母離子/子離子對(duì)外，還在EPI譜圖采集了155、142、128、102等子離子的信息，其確證信息更為豐富。

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