連翹葉提取工藝優(yōu)選

王亞恒，姚寧，王龍，石巧巧，白吉慶，王小平

(陜西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，陜西 咸陽 712046)

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連翹葉提取工藝優(yōu)選

王亞恒，姚寧，王龍，石巧巧，白吉慶，王小平

(陜西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，陜西 咸陽 712046)

目的 優(yōu)化連翹葉提取工藝，為制備連翹葉速溶茶奠定基礎(chǔ)。方法 采用正交試驗(yàn)，考察乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、回流時(shí)間和回流次數(shù)4個(gè)因素對(duì)連翹苷、連翹酯苷A、蘆丁的質(zhì)量分?jǐn)?shù)和出膏率的影響。結(jié)果 優(yōu)選的工藝為：6倍量體積分?jǐn)?shù)50%乙醇，提取2次，每次0.5 h；其中回流次數(shù)對(duì)連翹葉提取工藝的影響具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 優(yōu)化后的提取工藝穩(wěn)定可靠，可為進(jìn)一步制備連翹葉速溶茶提供參考。

連翹葉； 提取工藝； 正交試驗(yàn)； 連翹苷； 連翹酯苷A； 蘆?。?出膏率

連翹葉為木犀科植物連翹Forsythiasuspense(Thunb.) Vahl的干燥葉，夏、秋季采集，鮮用或曬干，具有清熱解毒之功效[1]。連翹葉與連翹果實(shí)化學(xué)成分基本相同[2]，且有些成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)遠(yuǎn)高于連翹果實(shí)[3]，在我國河北、陜西和河南等地常作為保健茶使用，被認(rèn)為具有良好的保健價(jià)值[4]。連翹葉資源豐富，具有抑菌、抗氧化、清除自由基、提高免疫功能、降壓和抗衰老等多種生物活性[5-8]，具有廣闊的開發(fā)前景。本文以蘆丁、連翹酯苷A、連翹苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)和出膏率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)優(yōu)選連翹葉提取工藝，為連翹葉速溶茶的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

BT125D型多量程電子分析天平(賽多利斯股份有限公司，d=0.1 mg，0.01 mg)；DZF-6050B型真空干燥箱(上海齊欣科學(xué)儀器有限公司)；戴安UltiMate3000全自動(dòng)高效液相色譜儀(二極管陣列檢測器)；101-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱(北京科偉永興儀器設(shè)備有限公司)。

連翹葉采摘于陜西省洛南市，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)白吉慶副教授鑒定為木犀科植物連翹Forsythiasuspense(Thunb.) Vahl的葉。連翹苷對(duì)照品(110821-200711)、連翹酯苷A對(duì)照品(111810-201001)、蘆丁對(duì)照品(100080-200707)均由中國生物制品檢定研究院提供。乙腈為色譜純，水為純化水，乙醇、冰醋酸等均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 連翹苷、蘆丁和連翹酯苷A質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測定[9]

2.1.1 混合對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱取連翹苷對(duì)照品、蘆丁對(duì)照品和連翹酯苷A對(duì)照品0.79、1.06、1.91 mg，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解至刻度，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 取樣品粗粉5.0 g，精密稱定，分別加入精密稱定的相應(yīng)溶劑，進(jìn)行回流提取，提取液合并減壓濃縮后，置25 mL容量瓶中，加相應(yīng)溶劑定容至刻度，搖勻，精密吸取1 mL置100 mL的量瓶中,加相應(yīng)溶劑定容至刻度，搖勻，0.22 μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.1.3 色譜條件[9]以Hypersil GOLD C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)為色譜柱，乙腈-質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.4%冰醋酸溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫(0～8 min，10%～15%乙腈；8～18 min，15%～22%乙腈；18～25 min，22%～40%乙腈；25～30 min，40%～95%乙腈；30～35 min，95%～95%乙腈)；流速為1.0 mL/min，檢測波長為277 nm，柱溫為25 ℃。理論塔板數(shù)按連翹酯苷A計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密吸取上述混合對(duì)照品溶液1、2、4、5、7、8、10 μL，注入液相色譜儀分析，每個(gè)體積進(jìn)樣2 次，記錄各對(duì)照品的峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，對(duì)照品質(zhì)量(μg)為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y蘆丁=11.38X-0.019 1，r=0.999 9；Y連翹酯苷A=8.919 1X-0.018 9，r=0.999 9；Y連翹苷=6.949 3X+0.037，r=0.999 9；結(jié)果表明蘆丁、連翹酯苷A和在連翹苷分別在0.106～1.06、0.191～1.91、0.079～0.79 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.5 方法學(xué)考察 精密度試驗(yàn)3種成分峰面積的RSD值分別為1.28%、1.33%、1.24%，表明儀器精密度良好；穩(wěn)定性試驗(yàn)3種成分峰面積的RSD值分別為1.65%、0.93%、0.88%，表明供試品溶液中待測成分在17 h內(nèi)基本穩(wěn)定；重復(fù)性試驗(yàn)3種成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD值分別為2.92%、2.12%、2.99%，表明方法重復(fù)性良好；加樣回收試驗(yàn)3種成分的平均回收率分別為99.45%、99.47%、98.87%，RSD值分別為2.26%、0.87%、1.23%；均符合方法學(xué)考察要求。

2.2 正交試驗(yàn)的設(shè)計(jì)方法與結(jié)果

考察了乙醇體積分?jǐn)?shù)(A)、回流時(shí)間(B)、回流次數(shù)(C)和料液比(D)4個(gè)因素,每個(gè)因素3個(gè)水平。因素水平表見表1。

表1 優(yōu)化連翹葉提取工藝的因素水平表

Table 1 Factors and levels of extraction technology ofForsythiasuspensaleaves

水平因素A乙醇體積分?jǐn)?shù)/%B回流時(shí)間/hC回流次數(shù)D料液比/(g∶mL)1300.511∶62401.021∶83501.531∶10

以蘆丁、連翹酯苷A、連翹苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)和出膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，取連翹葉粗粉5.0 g，精密稱定，按L9(34)正交試驗(yàn)表安排試驗(yàn)，并進(jìn)行極差和方差分析，結(jié)果見表2～表4。

因單體成分連翹酯苷A的質(zhì)量分?jǐn)?shù)和出膏率的方差分析顯示各因素的影響均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此只列出具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的單體成分蘆丁和連翹苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)的方差分析結(jié)果，見表3～表4。由表3可見，影響蘆丁提取的因素主次順序?yàn)榛亓鞔螖?shù)>料液比>乙醇體積分?jǐn)?shù)>回流時(shí)間，其中回流次數(shù)對(duì)蘆丁提取的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；由表4可見，影響連翹苷提取的因素主次順序?yàn)榛亓鞔螖?shù)>乙醇體積分?jǐn)?shù)>料液比>回流時(shí)間，其中回流次數(shù)和乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)連翹苷的提取有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。綜合考慮，確定較佳提取工藝為A3B1C2D1，即用6倍量的體積分?jǐn)?shù)50%乙醇，回流2次，每次0.5 h。

2.3 驗(yàn)證性試驗(yàn)

取樣品粗粉 5.0 g(6份)，精密稱定，按照最佳工藝A3B1C2D1進(jìn)行回流提取，依法測定指標(biāo)成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，蘆丁、連翹酯苷A、連翹苷峰面積RSD值為1.68%、1.85%、1.53%，質(zhì)量分?jǐn)?shù)平均值分別為11.12、17.69、9.93 mg/g，平均出膏率為30.76%。表明該工藝結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好。

表2 優(yōu)化連翹葉提取工藝的正交試驗(yàn)結(jié)果Table 2 The results of orthogonal test of extraction technology of Forsythia suspensa leaves

表3 蘆丁質(zhì)量分?jǐn)?shù)的方差分析結(jié)果Table 3 ANOVA results of rutin

表4 連翹苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)的方差分析結(jié)果Table 4 ANOVA results of phillyrin

3 討論

本文對(duì)連翹葉提取工藝進(jìn)行探究，優(yōu)選出較佳提取工藝，為制備連翹葉速溶茶奠定基礎(chǔ)?，F(xiàn)代研究表明蘆丁具有抑菌等生物活性[10]；連翹苷、連翹酯苷具有抑菌、抗感染、抗氧化、清除自由基和抗衰老等活性[11-12]，與連翹葉的功能主治一致，是連翹葉的主要有效成分，故選定上述3種成分和出膏率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)提取工藝進(jìn)行多指標(biāo)綜合評(píng)定。

本文以多個(gè)活性成分和出膏率為指標(biāo)，優(yōu)化提取工藝，兼顧各指標(biāo)的協(xié)同效應(yīng)，較全面反映提取物有效成分的信息，符合中藥有效成分多樣性的特點(diǎn)。優(yōu)化的提取工藝結(jié)果穩(wěn)定可靠，為連翹葉速溶茶的制備奠定了基礎(chǔ)。

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(責(zé)任編輯：陳翔)

Optimization of extraction technology ofForsythiasuspensaleaves

WANG Yaheng,YAO Ning,WANG Long,SHI Qiaoqiao,BAI Jiqing,WANG Xiaoping

(SchoolofPharmacy,ShaanxiUniversityofChineseMedicine,Xianyang712046,China)

Objective To optimize the better extraction technology ofForsythiasuspenseleaves and lay the foundation for the preparation ofForsythiasuspenseleaves instant tea. Methods TheL9(34) orthogonal test was used to evaluate the effects of ethanol concentration,solid-liquid ratio,reflux time and reflux times for phillyrin,forsythoside A,rutin and the yield of dry extract. Results The optimal extraction process was as follows: 6 times the volume fraction of 50% ethanol,extracting 2 times,0.5 h for each time,and the extracting times had significant effect on the extraction technology ofForsythiasuspenseleaves. Conclusions The optimized extraction process was stable and reliable which could provide a reference for further preparation of instant tea leaf Forsythia.

Forsythiasuspensaleaves; extraction technology; orthogonal design; phillyrin; forsythosideA; rutin; yield of dry extract

2016-05-07

科技部項(xiàng)目(11C26216103652)；工業(yè)和信息化部項(xiàng)目([2012]369號(hào))；陜西省科技廳項(xiàng)目(2014K14-01-01)；2014年陜西省大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練項(xiàng)目(1571)；陜西省教育廳資助項(xiàng)目(2013JK0834)

王亞恒(1991—)，男，2015級(jí)碩士研究生，Email：1160802809@qq.com；通信作者：王小平(1976—)，女，博士，教授，碩士生導(dǎo)師，從事中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)及新藥開發(fā)研究，電話：029-38185165，Email：wangxiaoping323@126.com。

時(shí)間：2016-09-28 10:21

http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160928.1021.001.html

R284.2

A

1006-8783(2016)05-0586-03

10.16809/j.cnki.1006-8783.2016050701