不同廠家口炎清產品中綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙的含量比較

姚小華，匡艷輝，張一凡，張曉燕

(廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，廣東 廣州 510515)

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不同廠家口炎清產品中綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙的含量比較

姚小華，匡艷輝，張一凡，張曉燕

(廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，廣東 廣州 510515)

目的 研究不同廠家口炎清的質量情況，為提高藥品標準、正確評價藥品質量提供理論依據。方法 采用高效液相色譜(HPLC)法對4個廠家生產的10批口炎清中的主要成分綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙的質量分數進行測定，色譜柱為Waters XBridgeTMC18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱溫為30 ℃，流速為1 mL/min；流動相為乙腈-0.4%(體積分數)醋酸(梯度洗脫)，綠原酸采用二極管陣列檢測器(PDAD)檢測，檢測波長為330 nm，灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙用蒸發光散射檢測器(ELSD)檢測，檢測條件：霧化室溫度60 ℃，漂移管溫度65 ℃，N2的載氣流量1.6 L/min，進樣量8 μL。結果 不同廠家口炎清產品中綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙質量分數差別較大。口炎清顆粒劑的質量相比膠囊劑和片劑較好；口炎清膠囊中不但灰氈毛忍冬皂苷乙質量分數非常低，而且檢測不到川續斷皂苷乙；口炎清片樣品中灰氈毛忍冬皂苷乙的質量分數卻異常高。結論 不同廠家的口炎清產品由于原材料質量、制劑工藝等不同，導致了產品中有效成分的質量分數存在較大差異。

口炎清； HPLC法； 綠原酸； 灰氈毛忍冬皂苷乙； 川續斷皂苷乙

口炎清顆粒是由山銀花、天冬、麥冬、玄參、甘草5味中藥組成的復方制劑，具有滋陰清熱、解毒消腫之功效，用于陰虛火旺所致的口腔炎癥，現行2015年版《中國藥典》一部收載的口炎清顆粒標準中只對單一成分綠原酸含量進行了測定[1]，其他藥效成分未予控制，難以全面反映藥品質量。口炎清處方中的君藥為山銀花，是抗菌消炎的主要藥味，天冬、麥冬、玄參、甘草輔佐可增強山銀花抗炎活性等藥效[2-4]。山銀花主要含有揮發油、黃酮、有機酸和三萜類成分[2]，有文獻報道采用HPLC-UV、HPLC-ELSD法等對山銀花中的有效成分進行檢測[5-6]，卻鮮見對不同廠家口炎清產品中多種有效成分開展的對比研究。灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙是山銀花藥材的特有成分，金銀花藥材中幾乎不含灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙，2015年版《中國藥典》一部收載的山銀花藥材標準的質量分數測定項下是以綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙作為指標成分進行質量控制[7]，[1]30-31。本文擬采用高效液相色譜(HPLC)法測定口炎清產品山銀花中的綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙的質量分數，對比分析不同廠家口炎清產品的質量差異，探討產生質量差異的原因，為提升其質量控制水平提供研究基礎。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；BT214D電子分析天平(瑞士沙多利斯Sartorius公司)；CP225D電子分析天平(瑞士沙多利斯Sartorius公司)；SB25-12DTD超聲波清洗機(寧波新芝生物科技股份有限公司)。

綠原酸對照品(批號為110753-201314，質量分數以96.6%計)，灰氈毛忍冬皂苷乙對照品(批號為111814-201303，質量分數以92.8%計)和川續斷皂苷乙對照品(批號為111813-201202，質量分數以93.4%計)均購自中國食品藥品檢定研究院。9批口炎清產品分別來自于廣東、陜西、四川、浙江4個省的4個廠家，批號分別為L4A007、F4A010、K4A002、A5A010、A5A001、A5A002、140904、20130804、14111301，分別簡寫為A1、A2、A3(顆粒劑)，B1、B2、B3(顆粒劑)，C1(顆粒劑)，D1(膠囊劑)，E1(片劑)。

乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters XBridgeTMC18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈(A)-0.4%(體積分數，下同)醋酸(B)梯度洗脫，洗脫程序：0～10 min，8%A→15%A；10～12 min，15%A→29%A；12～18 min，29%A→33%A；18～25 min，33%A→40%A；流速：1 mL/min，綠原酸采用二極管陣列檢測器(PDAD)，檢測波長：330 nm，灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙采用ELSD檢測，檢測條件：蒸發溫度60 ℃，漂移管溫度65 ℃，N2氣體積流量1.6 L/min，柱溫30 ℃。進樣量：8 μL。分別精密吸取混合對照品、供試品(批號：L4A007)、缺山銀花陰性對照溶液8 μL注入高效液相色譜儀，分別按上述條件測定，見圖1。

mAu6004002000110008006004002000mAu32A1A20510152025B1B2C1C24003002001000600400200010152025t/min05400300200100012001000800600400200010152025t/min05t/min231

1.綠原酸； 2.灰氈毛忍冬皂苷乙； 3.川續斷皂苷乙。

A.混合對照品溶液(1為DAD檢測，2為ELSD檢測，下同)； B.供試品溶液； C.缺山銀花的陰性對照溶液。

圖1 口炎清測定的HPLC圖
Figure 1 HPLC chromatograms of determinations of Kouyanqing products

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液的制備 分別精密稱取綠原酸對照品4.37 mg、灰氈毛忍冬皂苷乙對照品6.49 mg置①號25 mL容量瓶中，用少量50%(體積分數，下同)甲醇溶解得對照品溶液1；另精密稱取川續斷皂苷乙對照品9.18 mg，置②號25 mL容量瓶中，用50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對照品溶液2。精密吸取5 mL對照品溶液2，置①號25 mL容量瓶中，用50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即制成每1 mL含綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙、川續斷皂苷乙分別為174.8、259.6、73.44 μg的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取口炎清產品適量，研細，取約5.0 g(樣品A)，或約1.5 g(樣品B～E)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定質量，超聲處理(功率250 W，頻率37 Hz)30 min，放冷。再稱定質量，用50%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 缺山銀花的陰性對照溶液 取天冬、麥冬、玄參、甘草4味藥材,按2015年版《中國藥典》一部“口炎清顆粒”項下的制法制成陰性對照顆粒。取陰性對照顆粒適量，研細，取約5.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，按“2.2.2”項下方法操作，即得。

2.3 線性關系的考察

分別精密吸取混合對照品溶液2、4、6、8、10、20 μL進樣，按“2.1”項下條件分別測定綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙的峰面積，其中綠原酸以峰面積(Y)對綠原酸對照品的進樣量(X)進行線性回歸，而灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙則分別以峰面積(Y)的ln對數對相應的對照品進樣量(X)的ln對數進行線性回歸，得3種成分的線性方程見表1。2.4 精密度試驗

精密吸取混合對照品溶液8 μL，按“2.1”項下色譜條件連續測定6次，測得綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙、川續斷皂苷乙峰面積的RSD值分別為1.57%、1.47%、2.19%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.5 重復性試驗

取同一批(批號：A1)口炎清產品約5.0 g，共6份，精密稱定。分別按“2.2.2”項下方法制得6份供試品溶液，分別進樣8 μL，按“2.1”項下色譜條件測定并計算3種成分的質量分數。結果綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙質量分數的RSD值分別為1.86%、1.28%、2.26%，表明本方法重復性良好。

2.6 穩定性試驗

取同一批口炎清產品(批號：A1)供試品溶液，分別于制備后0、2、4、6、8、10、12、24 h進樣8 μL，分別按“2.1”項下色譜條件測得其綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙峰面積的RSD值分別為0.83%、1.25%、1.94%(n=8)，表明樣品溶液在制備后24 h內穩定。

2.7 加樣回收率試驗

稱取已知質量分數的口炎清產品(A1)約2.5 g，共6份，精密稱定。分別精密加入綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙、川續斷皂苷乙對照品溶液(三者質量濃度分別為3.35、5.83、0.78 mg/mL)各1 mL。分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，分別精密吸取8 μL，分別按“2.1”項下色譜條件進樣測定，計算回收率。結果綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙的平均回收率分別為100.7%、101.0%、99.6%；RSD分別為1.59%、1.03%、1.34%(n=6)。見表2。

2.8 樣品的測定

顆粒劑A1～A3一次服用量是2袋，每袋10 g；顆粒劑B1～B3一次服用量是2袋，每袋3 g；顆粒劑C1一次服用量是2袋，每袋10 g；膠囊劑D1一次服用量是4粒，每粒0.5 g；片劑E1一次服用量是6片，每片0.36 g。分別取4個不同廠家生產的10 批口炎清適量，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，分別按“2.1”項下色譜條件測定各成分質量分數，結果見表3。

表1 綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙的線性方程Table 1 The linear regression equations of chlorogenic aicd,macranthoidin B and dipsacoside B (n=6)

表2 口炎清中3種成分的加樣回收率試驗結果Table 2 Recovery results of 3 components in Kouyanqing products(n=6)

表3 不同廠家口炎清產品中3種成分的質量分數

由表3可知，不同廠家生產的口炎清產品質量差異很明顯，顆粒劑(A1、A2、A3、B1、B2、B3)的質量相比膠囊劑(D1)和片劑(E1)更好。D1樣品中不但灰氈毛忍冬皂苷乙質量分數非常低，而且檢測不到川續斷皂苷乙；E1樣品中灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙的質量分數卻異常高。

3 討論

口炎清產品主要含有有機酸、皂苷和黃酮等有效成分，而2015年版《中國藥典》一部中口炎清顆粒質量控制的目標成分只有綠原酸，這為產品的質量埋下很大隱患。本文采用高效液相色譜-紫外與蒸發光散射檢測器聯用的方法同時測定口炎清產品中的綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙的質量分數，方法準確穩定[8-10]。灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙的最大紫外吸收是末端吸收，當采用紫外檢測器檢測時，這2種皂苷的質量分數誤差較大；而綠原酸在330 nm有最大吸收，所以分別采用PDAD、ELSD檢測綠原酸、皂苷的質量分數，使目標成分的檢測誤差最小化[11-14]。由于ELSD中的蒸發溫度(流動相在漂移管中蒸發的溫度)、霧化溫度和N2的載氣流速直接影響皂苷的質量分數[15-16]，所以本文通過實驗比較確定這3個參數的設置，最后選擇蒸發溫度為65 ℃,霧化溫度為60 ℃,N2流速為1.6 L/min。

本試驗收集的口炎清產品包括有顆粒劑、片劑和膠囊劑，以綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙的質量分數為指標進行比較，發現不同口炎清產品中綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙質量分數的差異較大，有效成分的差異化必然會影響用藥療效[17]。

綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙都來源于山銀花藥材，而口炎清的組方配伍經過多年的臨床驗證和科學證明，并非是山銀花藥材的投入量越大，口炎清的藥效就越好。某種成分的質量分數高低無法表征中藥藥效，發揮中藥藥效的應該是有效成分之間的協同作用。當處方中的各藥材都在最佳的配比范圍時，藥效的協同作用才能最優化。鄭艷芳等[4]采用均勻設計方法構建口炎清顆粒具有不同藥材投料比例的差異樣品，通過藥效學研究獲得差異樣品的抗感染活性數據，運用灰色關聯分析方法研究口炎清顆粒差異樣品藥材質量分數與藥效間的關聯性，結果發現口炎清顆粒原配方比例的樣品藥效作用最強。王慧玉[18]在文中指出顆粒劑較膠囊劑和片劑吸收更快，只有藥物被吸收之后才能發揮藥效，故藥物吸收的效果直接關系到藥效。

筆者認為不同廠家生產的口炎清產品中有效成分質量分數差異較大的原因：一是不同廠家采購的中藥材原料因采收季節、產地、土壤、氣候等因素而導致質量差異較大；二是不同劑型的口炎清產品制劑工藝的區別、不同的生產設備型號和設備使用年限的差異也會直接影響制劑中有效成分的質量分數。因此，只有嚴格把控中藥材原料質量，采用合理的生產工藝、淘汰陳舊的生產設備，實現生產在線質量控制，建立完善的現代化生產流水線，才是保證口炎清產品良好質量的關鍵。

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(責任編輯：劉曉涵)

Determinations of chlorogenic aicd,macranthoidin B and dipsacoside B in Kouyanqing products from different manufactures

YAO Xiaohua，KUANG Yanhui，ZHANG Yifan，ZHANG Xiaoyan

(HutchisonWhampoaGuangzhouBaiyunshanChineseMedicineCo.,Ltd.,Guangzhou510515,China)

Objective To improve the drug standard and provide a theoretical basis for the quality evaluation of Kouyanqing products from different manufactures. Methods The contents of chlorogenic acid,macranthoidin B and dipsacoside B in 10 batches of Kouyanqing products from 4 manufactures were determined by HPLC. The determination was performed on Waters XBridgeTM-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)with column temperature set at 30 ℃ and the flow rate was 1 mL/min. The mobile phase was composed of acetonitrile and 0.4% acetum (gradient elution). The chlorogenic acid was detected by diode array detector (PDAD),and the UV detection wavelength was 330 nm. The atomization chamber temperature was set at 60 ℃ and the drift tube temperature of ELSD was set at 65 ℃,with the nitrogen flow rate of 1.6 L/min for macranthoidin B and dipsacoside B. The injection volume was 8 μL. Results Significant difference was observed in contents of chlorogenic aicd,macranthoidin B and dipsacoside in Kouyanqing products from different manufactures. Conclusion The quality of the Kouyanqing products varied greatly among different manufactures,which may result from different raw materials and preparation process.

Kouyanqing; HPLC; chlorogenic aicd; macranthoidin B; dipsacoside B

2016-06-13

姚小華(1983—)，女，碩士，工程師，主要從事中藥質量標準研究，電話：020-66282450，Email：yaoxiaohua@813zy.com。

時間：2016-09-30 15:05

http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160930.1505.008.html

R284.1

A

1006-8783(2016)05-0596-05

10.16809/j.cnki.1006-8783.2016061301