金針菇多糖-Zn2＋螯合物對L929腫瘤細胞的增殖抑制作用及其抗氧化活性

趙姝雯，夏 宇，陳貴堂，胡秋輝,3，趙立艷,*（.南京農業大學食品科技學院，江蘇 南京 0095；.中國藥科大學工學院，江蘇 南京 0009；3.南京財經大學食品科學與工程學院，江蘇 南京 0046）

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金針菇多糖-Zn2＋螯合物對L929腫瘤細胞的增殖抑制作用及其抗氧化活性

趙姝雯1，夏 宇1，陳貴堂2，胡秋輝1,3，趙立艷1,*
（1.南京農業大學食品科技學院，江蘇 南京 210095；2.中國藥科大學工學院，江蘇 南京 210009；3.南京財經大學食品科學與工程學院，江蘇 南京 210046）

摘 要：比較研究金針菇多糖-Zn2＋螯合前后的抗腫瘤作用與其體外抗氧化活性。通過小鼠成纖維肉瘤細胞L929培養實驗，觀察不同質量濃度金針菇多糖溶液對體外培養L929細胞形態的影響，四甲基偶氮唑藍（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）實驗評價金針菇多糖對L929細胞生長和增殖的影響。結果表明：在質量濃度為5～50 μg/mL時，金針菇粗多糖及其純化組分對L929細胞的抑制作用不強烈，金針菇多糖-Zn2＋對L929細胞有較強的抑制作用。相比較金針菇多糖直接作用于L929細胞，金針菇多糖介導的RAW 264.7巨噬細胞上清液對L929細胞的抑制率作用顯著增強。同時，以對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基、超氧陰離子自由基（O2－?）、羥自由基（?OH）、H2O2的清除率為評價指標，體外抗氧化實驗結果顯示金針菇多糖-Zn2＋抗氧化活性較螯合Zn2＋前有所提高。即金針菇多糖中Zn含量的提高有助于提升其抗氧化活性。

關鍵詞：金針菇多糖；螯合；Zn2＋；L929細胞；抗氧化活性

引文格式：

趙姝雯,夏宇,陳貴堂,等.金針菇多糖-Zn2＋螯合物對L929腫瘤細胞的增殖抑制作用及其抗氧化活性[J].食品科學,2016,37(5):202-207.DOI:10.7506/spkx1002-6630-201605036.http://www.spkx.net.cn

ZHAO Shuwen,XIA Yu,CHEN Guitang,et al.Effect of Flammulina velutipes polysaccharide-Zn2+chelate on suppression of L929 tumor cell proliferation and its antioxidant activity[J].Food Science,2016,37(5):202-207.(in Chinese with English abstract)DOI:10.7506/spkx1002-6630-201605036.http://www.spkx.net.cn

金針菇多糖（Flammulina velutipes polysaccharide，FVP）是一種以葡聚糖為主，由數個多糖組分構成的混合多糖。研究表明，FVP對肝臟損傷有保護作用，對小鼠腫瘤S180、H22、L615及人乳腺癌細胞MDA-MB-231均有明顯的抑制作用[1-2]。鋅（Zn）是人體必需的微量元素之一，對生物的生長發育、免疫功能等均具有重要作用。由于其具有重要的生物學功能，關于Zn的形態分析、富Zn食品的開發及其生物活性等方面的研究越來越多[3-4]。目前的補Zn產品中多為無機Zn，攝入過多對人體有一定的毒害作用，且無機Zn不利于人體吸收。無機Zn通過生物轉化作用可轉化為低毒的有機Zn。由于有機Zn更接近于Zn在體內的作用形式從而易于被人體吸收，其生物學效價要高于無機Zn[5]。在生物體內，Zn主要是和多糖等大分子物質結合生成較為穩定的配合物質。與其他的營養物不同，Zn不能儲留在人體內，也不能在身體中合成，只能從外界攝入[6]。交界離子如Fe2＋、Co2＋、Ni2＋、Cu2＋、Zn2＋、Pb2＋對硬軟配體都有一定親和性，能分別與軟硬離子競爭配體形成絡合物[7]。近年來，Zn2＋與殼聚糖、黑木耳多糖及金針菇多糖的螯合工藝已有研究報道[8-10]，但是關于其與金針菇多糖螯合產物的體內、體外活性尚未有深入研究。

同時，目前有關多糖抗氧化的研究比較多[11-14]，而對金針菇純化多糖與Zn螯合前后體外抗氧化活性比較、分析的研究相對較少。本實驗通過考察金針菇多糖與Zn螯合前后的抗腫瘤效果以及金針菇多糖介導的巨噬細胞上清液對L929細胞的抑制作用，以期進一步了解其活性特點，為金針菇鋅多糖功能性產品的開發提供理論依據。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

金針菇購于眾彩農副產品批發市場有限公司；L929小鼠成纖維肉瘤細胞、RAW 264.7巨噬細胞由中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心提供。

RMPI 1640培養基、胎牛血清、胰酶、DMEM培養基 美國Gibco公司；正丁醇、氯仿、硝酸、無水乙醇、丙酮、乙醚、硫酸、苯酚、氯化鐵、鄰苯三酚、鹽酸、硫酸亞鐵、H2O2、水楊酸、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、鐵氰化鉀、三羥甲基氨基甲烷（Tris）、二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）等均為國產分析純。各種溶液配制均使用超純水。

1.2儀器與設備

HH-6數顯恒溫水浴鍋 國華電器有限公司；TDL-5-A離心機 上海安亭科學儀器廠；旋轉蒸發儀 上海愛朗儀器有限公司；2.5L冷凍干燥機 英國Labconco公司；MQX 200型酶標儀 美國Bio-Tek公司。

1.3方法

1.3.1金針菇多糖分離純化及螯合

新鮮金針菇經晾曬至半干后，放在電熱恒溫鼓風干燥箱中，60 ℃鼓風烘干，然后用粉碎機將其粉碎，過60 目篩，制得金針菇粉，置于4 ℃條件下備用。

以水提法得到多糖提取液，Sevag試劑去蛋白質，取其離心后的上清液合并旋蒸至50～100 mL。醇沉后進行凍干得到初步分離純化的金針菇粗多糖（簡稱FVPc）[15]。

FVPc通過DEAE Cellulose-52離子層析柱分離純化及Sephadex G-100凝膠色譜分離純化得到純化的金針菇多糖（簡稱FVPp）[16]。

取0.6 g ZnSO4·7H2O溶于100 mL超純水中，配成Zn2＋質量濃度為6 mg/mL的溶液，按FVPp與Zn2＋的質量比為5∶1加入多糖；30 ℃、150 r/min振蕩螯合8 h，醇沉后凍干得到金針菇多糖-Zn2＋螯合物（簡稱Zn-FVP）[17]，按照下式計算螯合率。

式中：ρ0為螯合前溶液中Zn2＋的質量濃度/（mg/mL）；ρ為螯合后溶液中Zn2＋的質量濃度/（mg/mL）。

1.3.23種金針菇多糖對L929細胞增殖的抑制作用

將L929細胞密度調整為2×104個/mL，在96 孔板中按照每孔100 μL接種細胞懸液。置于含5% CO2、37 ℃培養箱中培養24 h，使細胞貼壁生長。吸去上清液，分別加入不同質量濃度（5、12.5、25、50 μg/mL）的樣品溶液（FVPc、FVPp、Zn-FVP）100 μL和順鉑溶液（陽性對照組，5 μg/mL）100 μL，繼續在培養箱中培養24 h后，每孔加入5 mg/mL的四甲基偶氮唑藍（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）溶液10 μL，繼續培養4 h，吸去上清液，后加入DMSO 100 μL振蕩，培養箱培養10 min。用酶標儀在490 nm波長處測定各孔的吸光度[18]，按照下式計算L929細胞存活率。

式中：Ak為樣品組或陽性對照組的吸光度；A1為陰性對照組（不加多糖樣品）的吸光度；A0為空白組的吸光度。

1.3.33種金針菇多糖介導的RAW 264.7巨噬細胞上清液對L929細胞的增殖抑制作用

將RAW 264.7細胞密度調整為2×105個/mL，在96 孔板中按照每孔100 μL接種細胞懸液。置于含5% CO2、37 ℃培養箱中培養24 h，使細胞貼壁生長。吸去上清液，分別加入不同質量濃度（5、12.5、25、50 μg/mL）的樣品溶液（FVPc、FVPp、Zn-FVP）100 μL，繼續在培養箱中培養24 h。收集上清液，－20 ℃保存。

將L929細胞密度調整為2×104個/mL，在96 孔板中按照每孔100 μL接種細胞懸液。置于含5% CO2、37 ℃培養箱中培養24 h，使細胞貼壁生長。吸去上清液，分別加入上述以不同質量濃度（5、12.5、25、50 μg/mL）的樣品溶液（FVPc、FVPp、Zn-FVP）培養的RAW 264.7細胞上清液和順鉑溶液（5 μg/mL）100 μL，繼續在培養箱中培養24 h。每孔加入5 mg/mL的MTT溶液10 μL，繼續培養4 h，吸去上清液，加入DMSO 100 μL振蕩，培養箱培養10 min。用酶標儀在490 nm波長處測定各孔的吸光度[19]，按照公式（2）計算L929細胞存活率。

1.3.43種金針菇多糖對L929細胞形態的影響

將L929細胞密度調整為2×104個/mL，在6 孔板中按照每孔3 mL接種細胞懸液。置于含5% CO2、37 ℃培養箱中培養24 h，使細胞貼壁生長。吸去上清液，分別加入不同質量濃度（100、200 μg/mL）的樣品溶液（FVPc、FVPp、Zn-FVP）3 mL，繼續在培養箱中培養24 h。使用倒置顯微鏡觀察不同質量濃度的樣品溶液對L929細胞形態的影響。

1.3.5金針菇多糖對DPPH自由基清除能力的測定

分別取不同質量濃度（0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL）的樣品溶液（FVPc、FVPp、Zn-FVP）1 mL到試管中，加入0.4 mL 0.2 mmol/L DPPH-甲醇溶液和1.6 mL去離子水，混合均勻在30 ℃反應30 min后，用分光光度計在517 nm波長處測定吸光度As。同時測定不加DPPH的樣品空白吸光度A1、加DPPH但不加樣品（以體積分數80%甲醇或蒸餾水代替樣品）的吸光度A0；用1 mL不同質量濃度的VC溶液代替樣品溶液作為陽性對照組，測定其對DPPH自由基的清除能力[20-22]。實驗設置3 組平行，結果取平均值。按照下式計算3 種金針菇多糖對DPPH自由基的清除率。

1.3.6金針菇多糖對超氧陰離子自由基（O2－?）清除能力的測定

取不同質量濃度（0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL）的樣品溶液（FVPc、FVPp、Zn-FVP）1 mL于試管中，加入0.05 mol/L的Tris-HCl（pH 8.2）溶液3 mL，各管用蒸餾水補齊到7 mL，在30 ℃條件下水浴15 min，最后加入由10 mmol/L HCl配制的8 mmol/L鄰苯三酚溶液1 mL，混合均勻后反應6 min，立即加入2 滴8 mol/L的HCl終止反應，用分光光度計在325 nm波長處測定吸光度。用蒸餾水代替樣品溶液作為空白對照組，用1 mL不同質量濃度的VC溶液代替樣品溶液作為陽性對照[23-25]。實驗設置3 組平行，結果取平均值。按照下式計算3 種金針菇多糖對O2－?的清除率。

式中：A0為空白對照組的吸光度；A1為樣品或陽性對照組的吸光度。

1.3.7金針菇多糖對羥自由基（?OH）清除能力的測定取不同質量濃度（0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL）的樣品溶液（FVPc、FVPp、Zn-FVP）2 mL于試管中，分別加入6 mmol/L的FeSO4溶液2 mL、6 mmol/L H2O2溶液2 mL，混合均勻，靜置10 min，再加6 mmol/L水楊酸溶液2 mL，搖勻后靜置30 min，用分光光度計在510 nm波長處測定吸光度。以蒸餾水代替樣品溶液作為空白對照組，以1 mL不同質量濃度的VC溶液代替樣品溶液作為陽性對照組[26]。實驗設置3 組平行，結果取平均值。按照下式計算3 種金針菇多糖對?OH的清除率。

式中：A0為空白對照組的吸光度；AS為樣品或陽性組的吸光度；A1為樣品干擾實驗（以蒸餾水代替水楊酸）組的吸光度。

1.3.8金針菇多糖對H2O2清除能力的測定

取不同質量濃度（0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL）的樣品溶液（FVPc、FVPp、Zn-FVP）1 mL于試管中，分別加入2.8 mL 0.1 mmol/L的磷酸鹽緩沖液（pH 4）和0.6 mL 40 mmol/L的H2O2溶液，混合物在30 ℃條件下反應10 min，之后用分光光度計在230 nm波長處測定吸光度。以蒸餾水代替樣品溶液作為空白對照組；以1 mL不同質量濃度的VC溶液代替樣品溶液作為陽性對照[27-28]。實驗設置3 組平行，結果取平均值，按照下式計算3 種金針菇多糖對H2O2的清除率。

式中：A0為空白對照組的吸光度；As為樣品或陽性對照組的吸光度；A1為樣品干擾實驗組（以蒸餾水代替H2O2）的吸光度。

2　結果與分析

2.1Zn-FVP螯合物的制備結果

Zn2＋的初始質量濃度為6mg/mL，FVPp與Zn2＋的質量比為5∶1、鰲合時間為8 h時，FVPp與Zn2＋的螯合率達到97.28%，Zn-FVP中的Zn含量為175 mg/g。

2.2FVPc、FVPp、Zn-FVP對L929細胞增殖的抑制作用

分別測定MTT實驗中在FVPc、FVPp、Zn-FVP的4 個質量濃度梯度（5、12.5、25、50 μg/mL）處理下細胞A490 nm的變化，確定其對L929細胞存活率的影響。由圖1可知，FVPc、FVPp對L929細胞有微弱的促增殖效果，且這種促增殖效果隨著3 種金針菇多糖質量濃度的增加而下降，且下降趨勢不明顯。在5～50 μg/mL之間，Zn-FVP 對L929細胞有抑制增殖的作用，在5～25 μg/mL范圍內，L929細胞存活率下降較明顯，在25～50 μg/mL時L929細胞存活率下降趨勢平緩。當質量濃度為50 μg/mL時，Zn-FVPp使L929細胞存活率下降至17.33%。

圖1　3 種金針菇多糖對L929細胞增殖的抑制作用Fig.1 Inhibitory effect of Flammulina velutipes polysaccharides on the growth of L929 cells

2.3FVPc、FVPp、Zn-FVP介導的RAW 264.7巨噬細胞上清液對L929細胞的增殖抑制作用

圖2　3 種金針菇多糖介導的RAW 264.7巨噬細胞上清液對L929細胞的增殖抑制作用Fig.2 RAW 264.7 macrophage-mediated anti-tumor activity of Flammulina velutipes polysaccharides

分別測定MTT實驗中4 個質量濃度梯度（5、12.5、25、50 μg/mL）介導的RAW 264.7巨噬細胞上清液處理下細胞A490 nm的變化，確定3 種金針菇多糖介導的RAW 264.7巨噬細胞上清液對L929細胞存活率的影響。由圖2可知，在低質量濃度時，FVPc、FVPp對L929細胞有微弱的促進增殖效果，但這種促增殖效果隨著3 種金針菇多糖質量濃度的增加而下降，當FVPc、FVPp質量濃度超過25 μg/mL時，RAW 264.7巨噬細胞上清液對細胞產生抑制作用。Zn-FVP在5～50 μg/mL范圍內對L929細胞有抑制增殖的作用，在5～25 μg/mL范圍內，L929細胞存活率下降較明顯，在25～50 μg/mL時，L929細胞存活率下降趨勢平緩。當質量濃度為50 μg/mL時，3 種金針菇多糖介導的RAW 264.7巨噬細胞上清液使L929細胞的存活率分別下降至83.52%、78.37%、3.97%，與3 種金針菇多糖直接作用于L929細胞相比，抑制率分別增強了27.35%、20.79%、77.07%。

據文獻[29]報道，當歸多糖對小鼠腹腔巨噬細胞釋放細胞效應分子的誘導作用對癌細胞沒有直接殺傷作用，而是通過調節免疫功能對癌細胞的增殖產生抑制作用。本實驗使用3 種金針菇多糖刺激RAW 264.7巨噬細胞的上清液培養成纖維肉瘤細胞L929，檢測其是否會對L929的增殖產生更大的抑制效果，結果表明3 種金針菇多糖介導的RAW 264.7巨噬細胞上清液對L929細胞有更強的抑制效果。這可能是因為L929細胞對于腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）更敏感，金針菇多糖可促進RAW 264.7巨噬細胞釋放TNF-α等細胞效應分子，從而間接發揮抗腫瘤免疫作用。

2.4FVPc、FVPp、Zn-FVP對L929細胞形態的影響

圖3　3 種金針菇多糖對L929細胞形態的影響Fig.3 Morphological change of L929 cells in the presence of Flammulina velutipes polysaccharides

為了直觀地顯示出不同質量濃度金針菇多糖對L929細胞形態的影響，本實驗選取了較高質量濃度（100、200 μg/mL）的金針菇多糖提取液。如圖3所示，在顯微鏡下觀察細胞形態，100、200 μg/mL的FVPc、FVPp處理組的L929細胞多為長梭形和多角形，細胞密度隨著多糖質量濃度增加而下降，100、200 μg/mL組的細胞形態基本相同。但100、200 μg/mL的Zn-FVP處理組的L929細胞數目均顯著減少，細胞核縮小，懸浮細胞增多，基本不貼壁，細胞收縮為圓形，絕大部分細胞死亡。

2.5FVPp、Zn-FVP對DPPH自由基的清除能力

由于FVPc與FVPp的自由基清除效果大致相當，因此后續實驗只選用FVPp與Zn-FVP進行對比分析。如圖4所示，螯合Zn2＋前后，FVP均有清除DPPH自由基的能力，但都弱于陽性對照組VC。各組DPPH自由基清除能力均隨質量濃度增加逐漸增大，在一定質量濃度范圍內，金針菇多糖的DPPH自由基清除率與質量濃度成正相關。在1.0 mg/mL時，VC、FVPp、Zn-FVP對DPPH自由基的清除率分別為84.11%、42.63%、52.10%。FVPp與Zn-FVP可以終止自由基鏈式反應，與DPPH自由基反應生成更穩定的產物。

圖4　金針菇多糖對DPPH自由基的清除率Fig.4 DPPH radical scavenging efficiency of Flammulina velutipes polysaccharides

2.6FVPp、Zn-FVP對O2－?的清除能力

圖5　金針菇多糖對OO2－·的清除率Fig.5 Superoxide anion radical scavenging efficiency of Flammulina velutipes polysaccharide

O2－?是生物體內最重要的自由基之一。如圖5所示，各組O2－?清除能力隨著質量濃度的增加而逐漸增大。在同等質量濃度條件下，O2－?清除能力由強到弱排序為

VC＞Zn-FVP＞FVPp。數據統計分析結果表明，FVPp、

Zn-FVP的O2－?清除能力在α＝0.05水平上差異顯著。在質量濃度為1.0 mg/mL時，與FVPp相比，Zn-FVP的O2－?清除率提高了20%。

2.7FVPp、Zn-FVP對?OH的清除能力

圖6　金針菇多糖對·OH的清除率Fig.6 Hydroxyl radical scavenging efficiency of Flammulina velutipes polysaccharide

采用Fenton體系產生?OH，水楊酸法檢測樣品清除?OH的能力。如圖6所示，各組?OH清除能力隨著質量濃度的增加而逐漸增大。FVPp與Zn-FVP的?OH清除能力均弱于VC，Zn-FVP略強于FVPp。這可能是由于Zn能夠阻斷金屬離子如Fe3＋、Cu2＋與H2O2和超氧化物反應產生?OH，防止在金屬離子的作用過程中形成羥基基團，進而阻止了因金屬離子的催化生成的?OH對機體組織產生的破壞作用[30]。數據統計分析結果表明，FVPp與Zn-FVP的?OH清除能力在α＝0.05水平上差異顯著。

2.8FVPp、Zn-FVP對H2O2的清除能力

圖7　金針菇多糖對HH2O2的清除率Fig.7 Hydrogen peroxide scavenging efficiency of Flammulina velutipes polysaccharide

如圖7所示，各組的H2O2清除能力隨著質量濃度的增加而逐漸增大。在金針菇多糖同等質量濃度條件下，對H2O2的清除能力由強到弱排序為VC＞Zn-FVP＞FVPp。

FVPp與Zn-FVP 的H2O2清除率在α＝0.05水平上差異不顯著。在質量濃度為1.0 mg/mL時，VC、FVPp與Zn-FVP的H2O2清除率分別為92.73%、39.59%、42.73%。含有Zn的豬苓多糖比不含Zn的豬苓多糖體外抗氧化能力高[31]，這與本實驗的結論相一致，說明Zn含量較高有利于提高多糖對H2O2的清除能力，引起這一現象的原因可能是Zn2＋與多糖分子結構中產生自由基所必需的醇羥基絡合在一起，使自由基的產生被抑制。

3　結 論

本實驗結果顯示，FVP螯合Zn2＋后，其對DPPH自由基、O2－?、?OH、H2O2的清除率均有所提高。通過幾組成分抗氧化活性能力的檢測與其Zn含量的對比，可以初步得出多糖體外抗氧化活性與樣品中Zn含量密切相關的結論。Zn2＋質量濃度越大，Zn含量越高，多糖清除自由基的能力越強，抗氧化活性越高[32]。金針菇多糖與Zn2＋的螯合增強了多糖的抗氧化活性。

本實驗通過小鼠成纖維肉瘤細胞L929培養實驗發現，FVPc及其純化組分FVPp在質量濃度為5～50 μg/mL時對L929細胞的抑制率不大，FVPc對L929細胞無抑制作用，FVPp有微弱的抑制作用，在質量濃度為50 μg/mL時，L929細胞存活率為98.93%。Zn-FVP對L929細胞有較強的抑制作用，在質量濃度為50 μg/mL時，L929細胞存活率為17.33%。而以FVPc、其純化組分FVPp及其螯合后的Zn-FVP培養RAW 264.7巨噬細胞，其上清液對L929細胞抑制率有顯著提高。FVPc、FVPp、Zn-FVP在質量濃度為50 μg/mL時，L929細胞存活率分別為83.52%、78.37%、3.97%，與3 種金針菇多糖直接作用于L929細胞相比，抑制率分別增強了27.35%、20.79%、77.07%。金針菇多糖介導的RAW 264.7巨噬細胞上清液對L929細胞的抑制率明顯提升。多糖抗腫瘤的機理可能是通過活化巨噬細胞和淋巴細胞、促進細胞因子分泌或活化補體等從而間接性發揮抗腫瘤免疫作用，但還需要進一步的實驗來證明金針菇多糖介導的RAW 264.7巨噬細胞上清液對L929細胞產生抑制作用的機理。

Zn-FVP表現出了良好的抗氧化活性與抗腫瘤細胞增殖作用，這為Zn-FVP產品的進一步開發利用提供了科學依據，它有望成為一種有效的保健藥物。

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Effect of Flammulina velutipes Polysaccharide-Zn2+Chelate on Suppression of L929 Tumor Cell Proliferation and Its Antioxidant Activity

ZHAO Shuwen1,XIA Yu1,CHEN Guitang2,HU Qiuhui1,3,ZHAO Liyan1,*
(1.College of Food Science and Technology,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,China; 2.College of Engineering,China Pharmaceutical University,Nanjing 210009,China; 3.College of Food Science and Engineering,Nanjing University of Finance and Economics,Nanjing 210046,China)

Abstract:The antitumor effect and antioxidant activity of purified polysaccharide from Flammulina velutipes before and after chelation with Zn2+were evaluated.To investigate the antitumor effect of the polysaccharide-Zn2+chelate on the proliferation of L929 tumor cells,methlthiazolyl tetrazolium(MTT)experiments were carried out and the morphology of L929 cells was observed with different concentrations of polysaccharide.The results showed that crude and purified polysaccharide at concentrations of 5–50 μg/mL had little impact on the growth of L929 cells,while the polysaccharide-Zn2+chelate played an important role in the inhibition of cell growth.Furthermore,the supernatant of macrophages co-cultured with Flammulina velutipes polysaccharides could kill L929 cells.Moreover,the antioxidant activity was improved after the chelation with Zn2+.This study demonstrated that zinc chelation could enhance the antioxidant activity of purified polysaccharide from Flammulina velutipes.

Key words:Flammulina velutipes polysaccharide; chelation; Zn2+; L929 cell; antioxidant activity

中圖分類號：TS201.2

文獻標志碼：A

文章編號：1002-6630（2016）05-0202-06

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201605036

*通信作者：趙立艷（1977—），女，副教授，博士，研究方向為食品營養化學。E-mail：zhlychen@njau.edu.cn

作者簡介：趙姝雯（1991—），女，碩士研究生，研究方向為食品營養化學。E-mail：2013108035@njau.edu.cn

基金項目：國家現代農業（食用菌）產業技術體系建設專項（CARS-24）；國家自然科學基金青年科學基金項目（31101255）

收稿日期：2015-09-11