喉鱗狀細胞癌組織中MTSS1、MMP-9的表達變化及意義

陳應超，王瑋，周潔，肖蘭，劉漢忠

(孝感市中心醫院，湖北孝感432100)

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喉鱗狀細胞癌組織中MTSS1、MMP-9的表達變化及意義

陳應超，王瑋，周潔，肖蘭，劉漢忠

(孝感市中心醫院，湖北孝感432100)

摘要：目的觀察喉鱗狀細胞癌組織中轉移抑制基因1(MTSS1)、基質金屬蛋白酶9(MMP-9)的表達變化，并探討其意義。方法 采用免疫組化法檢測50例喉鱗狀細胞癌組織(觀察組)、32例癌旁正常組織(對照組)中MTSS1、MMP-9蛋白表達，觀察喉鱗狀細胞癌不同臨床特點患者MTSS1、MMP-9陽性表達的差異，采用Spearman秩相關分析二者陽性表達的關系。結果觀察組及對照組MTSS1、MMP-9蛋白表達陽性率比較差異有統計學意義(P均<0.05)。MTSS1蛋白陽性表達與喉鱗狀細胞癌分化程度、淋巴結轉移有關，MMP-9蛋白陽性表達與喉鱗狀細胞癌淋巴結轉移、臨床分期有關(P均<0.05)。喉鱗狀細胞癌組織中MTSS1與MMP-9蛋白陽性表達呈負相關(rs=-0.360，P<0.01)。結論 喉鱗狀細胞癌組織中MTSS1低表達、MMP-9高表達，二者可能在腫瘤的發生發展中起重要作用。

關鍵詞：喉腫瘤；喉鱗狀細胞癌；轉移抑制基因1；基質金屬蛋白酶9

研究結果顯示，轉移抑制基因1(MTSS1)在多種人類腫瘤中表達異常，且被認為與腫瘤的侵襲轉移及預后不良有關[1]?；|金屬蛋白酶9(MMP-9)通過降解細胞外基質(ECM)及基底膜的主要成分，參與多種人類腫瘤的進展[2]。但MTSS1、MMP-9在喉鱗狀細胞癌組織中的相關性研究鮮有報道。2010年1月～2014年12月，我們觀察了喉鱗狀細胞癌組織中MTSS1、MMP-9的表達變化，并探討其意義。

1資料與方法

1.1臨床資料選擇本院于2010～2014年收治的喉鱗狀細胞癌患者50例，男45例、女5例，年齡41～78(60.0±17.3)歲。均經手術活檢及病理學檢查證實，術前均未行放、化療。手術留取喉鱗狀細胞癌組織50例(觀察組)、另取同期癌旁黏膜組織(距離癌組織>0.5 cm，病理學檢查證實無癌細胞)32例(對照組)。

1.2MTSS1、MMP-9蛋白表達檢測兩組標本常規脫蠟、水化、4 μm連續切片。采用免疫組化染色Envision法?？乖迯?、染色(按試劑盒說明進行)。DAB顯色、蘇木精復染、脫水封片，顯微鏡下觀察。結果判定：與陰性對照相比，以胞質染成黃色或棕色顆粒為MTSS1和MMP-9蛋白陽性表達。采用雙盲法，結合陽性細胞百分比及顯色程度進行半定量-積分法評分[3]。陽性細胞百分比≤5%、6%～25%、26%～50%、51%～75%、>75%分別計0～4分；顯色程度無顯色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別計0～3分。以上兩項評分乘積≥2分為陽性。

1.3統計學方法采用SPSS13.0統計軟件。計數資料用百分數表示，比較采用χ2檢驗；兩蛋白陽性表達率的關系采用Spearman秩相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1兩組MTSS1、MMP-9蛋白表達陽性率比較MTSS1、MMP-9蛋白主要在胞質中表達，少數在胞膜中表達，MTSS1染色以棕黃色為主，MMP-9以淺黃色為主。觀察組、對照組MTSS1蛋白陽性表達率分別為62.0%(31/50)、87.5%(28/32)，比較差異有統計學意義(χ2=6.287，P<0.05)；觀察組、對照組MMP-9蛋白陽性表達率分別為68.0%(34/50)、12.5%(4/32)，比較差異有統計學意義(χ2=24.170，P<0.05)。

2.2不同臨床病理特征喉鱗狀細胞癌患者MTSS1、MMP-9蛋白陽性表達比較見表1。

2.3喉鱗狀細胞癌組織中MTSS1、MMP-9蛋白陽性表達的相關性經Spearman秩相關分析顯示，MTSS1蛋白陽性表達與MMP-9呈負相關(rs=-0.360，P<0.01)。

表1　不同臨床病理特征喉鱗狀細胞癌患者MTSS1、MMP-9蛋白陽性表達比較

3討論

MTSS1表達調控的具體機制尚不清楚，可能與雜合性缺失及甲基化有關，但MTSS1作為一種信號通路應答蛋白參與腫瘤的發生發展被大多學者所認同[3]。Hh信號通路主要包括Hh信號肽(SHh、IHh、DHh)、核轉錄因子(Gli1、Gli2、Gli3)及下游目的基因(Ptch、Bcl2、N-myc等)。在哺乳動物中SHh通過Gli來調控正常細胞的生長及分化，并參與腫瘤細胞的增殖及轉移[3]。研究表明，MTSS1蛋白可與Gli1、Gli2結合促進Gli介導的轉錄，因此，MTSS1為SHh-Gli信號通路的成員之一，MTSS1可通過SHh-Gli信號通路來影響腫瘤細胞的生長、增殖及轉移[4]。本研究首次發現，觀察組中MTSS1蛋白陽性表達率低于對照組，且MTSS1陽性表達與喉鱗狀細胞癌分化程度、淋巴結轉移有關，因此，推測MTSS1可作為評估喉鱗狀細胞癌惡性程度及轉移的分子指標之一。Mustafa等[5]在過表達MTSS1 mRNA的前列腺癌細胞系(PC-3與DU-145)中發現，癌細胞的黏附及轉移能力顯著降低。張曙光等[6]用MTSS1-siRNA轉染于過表達MTSS1的食管鱗癌細胞系(KYSE180)后發現，癌細胞的遷移及侵襲力顯著增強。目前，研究認為MTSS1 抑制腫瘤侵襲轉移的可能機制為：通過促進肌動蛋白絲組合，連接細胞膜與肌動蛋白的單體從而保持細胞間連接的完整性[7]。通過調節其與F-肌動蛋白的拮抗作用來調控肌動蛋白骨架的重塑[8]。通過調控SHh-Gli及表皮生長因子(EGF)信號通路來抑制腫瘤轉移[5]。

ECM及基底膜是阻礙腫瘤細胞侵襲轉移的主要屏障。MMP-9是降解基底膜及ECM的重要水解酶之一，它通過降解其主要成分如Ⅳ、Ⅴ型膠原和明膠等而發揮重要作用[2]。本研究顯示，觀察組中MMP-9陽性率顯著高于對照組，且MMP-9陽性表達與淋巴結轉移、臨床分期有關，表明其在喉鱗狀細胞癌發生及轉移中的作用。Nagai等[9]在對胰腺癌細胞系(AsPC-1與SUIT-2)的研究中發現，過度活化的Hh-Gli信號通路可能在基因轉錄水平上通過影響MMP-9的表達從而促進細胞的侵襲轉移。MTSS1蛋白是SHh-Gli信號通路的相關蛋白，可通過SHh-Gli信號通路來影響腫瘤的惡性進展。本研究顯示，喉鱗狀細胞癌中MTSS1和MMP-9的表達呈負相關，推測喉鱗狀細胞癌中MTSS1的失活激活了Hh-Gli信號通路，誘導MMP-9的過表達而促進侵襲轉移。因局限于我們僅在蛋白水平進行了初步的研究，其具體機制還需在基因轉錄等方面進一步驗證。

參考文獻：

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[3] Callahan CA, Ofstad T, Horng L, et al. MIM/BEG4, a Sonic hedgehog-responsive gene that potentiates Gli-dependent transcription[J]. Genes Dev, 2004,18(22):2724-2729.

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[5] Mustafa N, Martin TA, Jiang WG. Metastasis tumour suppressor-1 and the aggressiveness of prostate cancer cells[J]. Exp Ther Med, 2011,2(1):157-162.

[6] 張曙光,郭曉鋒,路遙,等.食管鱗癌組織MTSS1表達及其與轉移潛能相關性研究[J]. 中華腫瘤防治雜志,2013,20(10):749-752.

[7] Dawson JC, Bruche S, Spence HJ, et al. Mtss1 promotes cell-cell junction assembly and stability through the small GTPase Rac1[J]. PLoS One, 2012,7(3):e31141.

[8] Bershteyn M, Atwood SX, Woo WM, et al. MIM and cortactin antagonism regulates ciliogenesis and hedgehog signaling[J]. Dev Cell, 2010,19(2):270-283.

[9] Nagai S, Nakamura M, Yanai K, et al. Gli1 contributes to the invasiveness of pancreatic cancer through matrix metalloproteinase-9 activation[J]. Cancer Sci, 2008,99(7):1377-1384.

(收稿日期：2015-10-10)

中圖分類號：R739.65

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)09-0071-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.09.028

通信作者：周潔(E-mail:cycpcy2001@sina.com)