X射線修復(fù)交叉互補(bǔ)基因3多態(tài)性與膀胱癌易感性的關(guān)系

盧保德，劉德云，付偉金，玉鎮(zhèn)源，陸浩源，程繼文

(1廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南寧530021；2廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院)

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X射線修復(fù)交叉互補(bǔ)基因3多態(tài)性與膀胱癌易感性的關(guān)系

盧保德1，劉德云1，付偉金1，玉鎮(zhèn)源1，陸浩源2，程繼文2

(1廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南寧530021；2廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院)

摘要：目的探討X射線修復(fù)交叉互補(bǔ)基因3(XRCC3)rs861539(C>T)多態(tài)性與膀胱癌易感性的關(guān)系。方法 用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性方法檢測201例膀胱癌患者(病例組)及200例年齡、性別相匹配的健康人(對照組)XRCC3 rs861539(C>T)的基因型，比較各基因型與膀胱癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)以及膀胱癌病理分期、分級的關(guān)系，同時(shí)分層分析其與吸煙的關(guān)系。結(jié)果病例組XRCC3 rs861539位點(diǎn)CC、CT、TT 3種基因型分布頻率分別為85.6%、13.9%、0.5%，對照組分別為93%、6.5%、0.5%，兩組基因型頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與基因型CC相比，攜帶突變等位基因T的基因型(CT+TT)發(fā)生膀胱癌的風(fēng)險(xiǎn)增加3.077倍(OR 95% CI：1.452～6.882，P<0.05)；XRCC3 rs861539基因型在吸煙及膀胱癌病理分期、分級之間的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。結(jié)論 XRCC3 rs861539多態(tài)性可能增加膀胱癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

關(guān)鍵詞：膀胱腫瘤；X射線修復(fù)交叉互補(bǔ)基因3；多態(tài)性，單核苷酸

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中發(fā)病率最高的惡性腫瘤[1~3]。研究表明，膀胱癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素主要為遺傳變異、化學(xué)及環(huán)境暴露、慢性炎癥刺激等三個(gè)方面[4]。X射線修復(fù)交叉互補(bǔ)基因3(XRCC3)屬于DNA損傷修復(fù)基因之一，負(fù)責(zé)修復(fù)因電離輻射、氧自由基和正常代謝過程中導(dǎo)致的DNA雙鏈斷裂；XRCC3的多態(tài)性可能會影響其修復(fù)功能，從而增加腫瘤的易感性。本研究探討XRCC3 rs861539(C>T)多態(tài)性與膀胱癌易感性的關(guān)系，以期為膀胱癌的防治提供理論依據(jù)。

1資料與方法

1.1臨床資料選取2011年9月～2015年4月在廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院及附屬腫瘤醫(yī)院住院治療的膀胱癌患者201例(病例組)，男168例、女33例，年齡(58.87±12.03)歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：均為初發(fā)且經(jīng)病理檢查確診；采血前均未接受過放化療；無其他腫瘤病史。同期隨機(jī)選取性別、年齡相匹配的健康體檢人群200例為對照組，入選者均無職業(yè)暴露史，無腫瘤病史及其他血液病史，無肝、腎疾病史。本研究經(jīng)廣西醫(yī)科大學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，研究對象均知情同意。

1.2基因組DNA提取兩組均抽取靜脈血2 mL，用DNA提取試劑盒(北京全式金)提取基因組DNA，用核酸檢測儀檢測DNA濃度及純度，合格者于-20 ℃冰箱保存。

1.3基因型檢測采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法。引物序列參考相關(guān)文獻(xiàn)[5]，由大連寶生物工程有限公司合成。PCR反應(yīng)體系體積50 μL，其中DNA模板(100 ng/μL)1 μL，PCR mix 25 μL,上游及下游引物(10 pmol/μL)各1 μL,三蒸水22 μL。94 ℃預(yù)變性4 min,94 ℃變性30 s,60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s,30個(gè)循環(huán)，最后72 ℃延伸7 min,4 ℃保存。酶切反應(yīng)體系為PCR產(chǎn)物8 μL，限制性內(nèi)切酶NlaIII(NEB)5 U，10×buffer 2 μL三蒸水15 μL,總體積25 μL，放入水浴箱37 ℃水浴8 h,2%瓊脂糖凝膠電泳(120 V)35 min，在凝膠成像儀下觀察DNA條帶。PCR產(chǎn)物大小為456 bp。XRCC3 rs861539 TT基因型含有2個(gè)酶切點(diǎn)，經(jīng)酶切產(chǎn)生210、141、105 bp 3個(gè)片段；CC基因型含有1個(gè)酶切點(diǎn)，經(jīng)酶切產(chǎn)生315、141 bp 2個(gè)片段；CT基因型含有2個(gè)酶切點(diǎn)，酶切后產(chǎn)生315、210、141、105 bp 4個(gè)片段。同時(shí)隨機(jī)挑選部分樣品送大連寶生物工程有限公司進(jìn)行測序驗(yàn)證，PCR-RFLP法基因型分析與測序結(jié)果一致。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料用率表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。采用多因素Logistic回歸分析計(jì)算相對危險(xiǎn)度(OR)和95%可信區(qū)間(CI)來估計(jì)XRCC3基因多態(tài)性與膀胱癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1XRCC3 rs861539多態(tài)性與膀胱癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系對照組rs861539位點(diǎn)基因型分布符合 Hardy-Weinberg平衡，具有群體代表性。兩組基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。考慮到TT基因型數(shù)量較少，把TT基因型與CT基因型合并分析，經(jīng)多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，在校正年齡、性別、民族、吸煙等因素后，攜帶突變等位基因T的基因型(CT+TT)的個(gè)體相對于CC基因型攜帶者罹患膀胱癌的風(fēng)險(xiǎn)增加約3.077倍(OR95%CI:1.452～6.882,P<0.05)。

表1　兩組XRCC3基因型分布比較[例(%)]

注：兩組XRCC3基因型比較，P<0.05。

2.2XRCC3 rs861539多態(tài)性與膀胱癌分期、分級的關(guān)系見表2。

表2　膀胱癌不同分期、分級XRCC3基因型分布

2.3XRCC3基因rs861539多態(tài)性與吸煙的關(guān)系 吸煙時(shí)間達(dá)1年以上者定義為吸煙人群。將XRCC3基因rs861539多態(tài)性與吸煙進(jìn)行分層分析，吸煙人群與非吸煙人群XRCC3基因型分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見表3。

表3　吸煙人群與非吸煙人群XRCC3基因型分布

注：兩組吸煙人群與非吸煙人群XRCC3基因型分布比較，P>0.05。

3討論

XRCC3是一種重要的DNA修復(fù)基因，位于人類染色體14q32.3[6]，主要參與同源重組修復(fù)及DNA雙鏈斷裂修復(fù)，在維持機(jī)體染色體穩(wěn)定和DNA的損傷修復(fù)中起到重要作用。目前，XRCC3基因多態(tài)性與腫瘤的關(guān)系被廣泛關(guān)注，其中研究主要集中在rs861539(C>T)位點(diǎn)上，rs861539位點(diǎn)上的堿基變異(C>T)可導(dǎo)致第241位密碼子編碼的蘇氨酸替換為蛋氨酸。這可能會影響其參與DNA損傷修復(fù)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和相應(yīng)酶的功能，導(dǎo)致機(jī)體DNA損傷修復(fù)功能改變，從而增加腫瘤易感性[7]。本研究發(fā)現(xiàn)，XRCC3 rs861539多態(tài)性與膀胱癌的易感性相關(guān)，與CC基因型相比，攜帶突變等位基因T(TT+CT)的個(gè)體發(fā)生膀胱癌的風(fēng)險(xiǎn)增加3.077倍。

研究表明，單獨(dú)的基因突變對腫瘤發(fā)生的影響可能不明顯，但是攜帶突變基因型的個(gè)體暴露于危險(xiǎn)因素下發(fā)生腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)可能會極大增加[8]。吸煙是膀胱癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素，煙草中含有多種有害物質(zhì)，并且可以產(chǎn)生活性氧自由基，導(dǎo)致DNA雙鏈斷裂，損傷斷裂的DNA如不能及時(shí)修復(fù)，將會導(dǎo)致基因突變、細(xì)胞死亡或者癌變。Andrew等[9]發(fā)現(xiàn)吸煙且攜帶 XRCC3 rs861539位點(diǎn)TT基因型的個(gè)體罹患膀胱癌的風(fēng)險(xiǎn)增加。而本研究并未發(fā)現(xiàn)XRCC3基因rs861539多態(tài)性與吸煙有相關(guān)性，可能與本研究所選樣本地區(qū)比較局限有關(guān)。

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(收稿日期：2015-10-30)

中圖分類號：R737.14

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)09-0073-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.09.029

通信作者：劉德云(E-mail:Ldy8388@163.com)

基金項(xiàng)目：廣西壯族自治區(qū)教育廳科研資助項(xiàng)目(201012MS046)。