食管鱗狀細胞癌組織中MAWD、MAWBP和Smad2蛋白的表達

李冠華，郭長青，劉青青

鄭州大學第一附屬醫院消化內科 鄭州 450052

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食管鱗狀細胞癌組織中MAWD、MAWBP和Smad2蛋白的表達

李冠華，郭長青#，劉青青

鄭州大學第一附屬醫院消化內科 鄭州 450052

關鍵詞食管鱗狀細胞癌；MAWD；MAWBP；Smad2

摘要目的：探討MAWD、MAWBP和Smad2蛋白在食管鱗狀細胞癌(ESCC)組織中的表達及臨床意義。方法：收集86例ESCC組織標本及其癌旁正常組織標本，免疫組化法測定MAWD、MAWBP及Smad2蛋白的表達。結果：MAWD、MAWBP在ESCC組織中的表達明顯低于癌旁正常組織，Smad2的陽性表達率高于癌旁正常組織(P<0.05)；MAWD與MAWBP在ESCC組織中的表達呈正關聯(rP=0.045，P<0.001)，且均與Smad2蛋白表達負關聯(rP=-0.285、-0.211，P<0.05)。MAWD陽性表達率與ESCC組織的TNM 分期和分化程度有關(P<0.05)，Smad2 陽性表達率與分化程度有關(P<0.05)。結論：MAWD可能參與了ESCC的發生發展，可能成為ESCC預后判斷的有效指標和治療靶點。

Expressions of MAWD,MAWBP and Smad2 in esophageal squamous cell carcinoma tissue

LIGuanhua,GUOChangqing,LIUQingqing

DepartmentofGastroenterology,theFirstAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052

Key wordsesophageal squamous cell carcinoma;MAWD;MAWBP;Smad2

AbstractAim:To investigate the expressions of MAWD,MAWBP and Smad2 proteins in esophageal squamous cell carcinoma(ESCC) tissue.Methods:The expressions of MAWD,MAWBP and Smad2 in 86 cases of ESCC tissue and adjacent normal tissue were detected by immunohistochemistry.Results:The positive expression rate of MAWD and MAWBP in ESCC tissue was significantly lower than those in the adjacent normal tissue(P<0.05), while that of Smad2 in ESCC tissue was significantly higher than that in the adjacent normal tissue(P<0.05).The expressions of MAWD,MAWBP in ESCC tissue were negatively associated with Smad2(rP=-0.285,-0.211,P<0.05),and they were positively associated with eath ther(rP=0.045,P<0.001).The expression of MAWD was significantly related to TNM staging and pathological grading(P<0.05),and the expression of Smad2 was related with differentiation degree(P<0.05).Conclusion:MAWD might were closely relate to ESCC and may be considered as effective indicators for diagnosis,prognosis,and treatment of ESCC.

食管癌屬于十大常見的惡性腫瘤之一，在我國尤其是河南、河北、山西等省份高發，嚴重威脅人們的生命健康。盡管近年來大量研究試圖闡明食管癌的發病機制，關注早期診斷、治療方式和策略，但是迄今為止，食管癌病因和發生發展機制仍不十分明確，對食管癌的早期診斷和治療仍沒有突破性進展，食管癌患者的5 a生存率約為20%[1]。對食管癌發生發展機制的深入研究是早期診斷和治療食管癌、提高患者生存率的關鍵。MAWD(mitogen-activated protein kinase activator with WD40 repeats)及其結合蛋白MAWBP(MAWD binding protein)是轉化生長因子-β(TGF-β)通路的一個重要的調控因子，Smad2蛋白是該信號通路的重要蛋白之一[2]。研究[3]發現MAWD/MAWBP復合體與多種腫瘤關系密切，但其在食管癌中的表達及作用罕見報道。作者旨在研究MAWD、MAWBP和Smad2蛋白在食管鱗狀細胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)組織中的表達，并討論其在ESCC進展中的臨床意義。

1材料與方法

1.1臨床資料選擇鄭州大學第一附屬醫院2013年11月至2015年2月收治的ESCC患者86例，均行手術治療并經術后病理證實。其中，男51例，女35例，年齡39～72(60.0±5.8)歲；癌變部位浸潤至淺肌層23例，浸潤達外膜層63例；伴周圍淋巴結轉移38例，無周圍淋巴結轉移48例；低分化24例，中分化30例，高分化32例；按照國際TNM 分期標準，Ⅰ期10例，Ⅱ期26例，Ⅲ期39例，Ⅳ期11例。所有患者手術前均未接受任何抗癌治療。分別取癌組織、正常食管黏膜組織(手術切緣或癌組織邊緣5 cm以外的組織)，均經HE染色病理診斷證實。

MAWD蛋白陽性細胞表現為細胞質和細胞核棕黃色著色，MAWBP陽性細胞表現為細胞質棕黃色著色，Smad2蛋白陽性細胞表現為細胞質和細胞核棕黃色細顆粒狀著色。隨機選取每張切片中的10 個200倍視野，每個視野中計數100個細胞，計算陽性細胞百分比。陽性細胞百分比<10%判定為陰性(-)，≥10%為陽性(+)。

1.3統計學處理應用SPSS 16.0處理數據。正常和ESCC組織中MAWD、MAWBP及Smad2表達的比較采用配對χ2檢驗；用列聯系數估計ESCC組織中MAWD與MAWBP、MAWD和MAWBP與Smad2表達的關聯性；不同臨床病理指標的ESCC組織中MAWD、Smad2表達的比較采用χ2檢驗；檢驗水準α=0.05。

2結果

2.1兩種組織中MAWD、MAWBP和Smad2蛋白表達情況結果見圖1、表1。ESCC組織中MAWD、MAWBP蛋白陽性表達率均低于正常組織，而Smad2的表達高于正常組織。

圖1　正常(1)和ESCC(2)組織中MAWD(A)、MAWBP(B)和Smad2(C)蛋白的表達(SP,×200)

例

2.2ESCC組織中MAWD、MAWBP及Smad2表達的關聯性ESCC組織中MAWD和MAWBP 蛋白的表達呈正關聯(表2)，MAWD、MAWBP與Smad2的表達呈負關聯(表3、表4)。

2.3MAWD、Smad2蛋白表達與ESCC臨床病理因素的關系見表5。ESCC組織中MAWD陽性表達率與TNM 分期、病理分級有關(P<0.05)，Smad2陽性表達率與病理分級有關(P<0.05)。

表2　ESCC組織中

rP=0.405，P<0.001。

表3　ESCC組織中

rP=-0.285，P=0.006。

表4　ESCC組織中

rP=-0.211，P=0.045。

表5　MAWD、Smad2

3討論

腫瘤的發生涉及多方面因素,與多種基因、身體各種狀態、多個過程密切相關，其中上皮間質轉化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)參與多種腫瘤的發生發展，與腫瘤關系密切[2-3]。EMT涉及多種生長因子、蛋白、轉錄因子及多個信號轉導通路,目前發現涉及的主要通路有TGF-β通路、Wnt/13-catenin通路、P13K/AKT通路等。TGF-β通路參與了EMT的形成并進一步導致腫瘤的發生[4]。

TGF-β是一種負調控因子，可由機體多種細胞分泌，在大部分異常分化的細胞中可檢測到TGF-β mRNA。TGF-β信號傳導通路中，始動因子為Smad蛋白[5]。TGF-β受體Ⅱ(TGF-βRⅡ)與非活化的TGF-β結合形成復合物，激活TGF-β受體Ⅰ(TGF-βRⅠ)，與之結合形成復合物，進而磷酸化下游的Smad2 蛋白，使Smad2 與Smad4 結合形成轉錄復合物進入細胞核，參與核酸調控,進而發揮其抑制生長效應和誘導細胞EMT的作用[6]。研究[7]發現，Smad6和Smad7是細胞中TGF-βRⅠ的拮抗蛋白，可與TGF-βRⅠ緊密結合，使Smad 2/3蛋白無法被活化，從而導致信號傳遞過程的中斷。

TGF-β通路中一個重要的調控因子即MAWD，其可與Smad7形成復合體，強化對TGF-β通路的抑制[8]，進而抑制細胞EMT過程。MAWBP是在尋找與MAWD相結合的蛋白及受體的過程中發現的新蛋白[9-10]，MAWBP與MAWD相結合形成MAWD/MAWBP復合物后，可加強MAWD對TGF-β信號通路的抑制作用。

該研究運用免疫組化方法測定ESCC組織及癌旁正常組織中MAWD、MAWBP和Smad2蛋白的表達，結果顯示，ESCC組織中MAWD、MAWBP蛋白表達明顯下調，Smad2蛋白表達增強。

此外，ESCC組織中MAWD/MAWBP和Smad2蛋白的表達呈負關聯，因此推測，由于MAWD/MAWBP表達降低，其對TGF-β信號通路的抑制作用減弱，進一步使Smad2蛋白表達升高，誘發EMT，導致ESCC的發生，并且參與腫瘤的轉移、增殖、浸潤等過程。但是，腫瘤的發生是多因素的結果，因此深入研究MAWD/MAWBP的作用機制，有可能為人們提供針對腫瘤更直接、有效的基因診療方法。

參考文獻

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中圖分類號R735.1

#通信作者，男，1966年10月生，博士，教授，主任醫師，研究方向：消化道腫瘤及肝病，E-mail：cqguo6610@hotmail.com

doi：10.13705/j.issn.1671-6825.2016.02.001