不同炮制方法對土家藥“江邊一碗水”化學成分的影響

鄧旭坤，高康麗，陳旅翼，蔣　捷，蔡　爽，林親雄，關祥會，馬玉雪

(中南民族大學 藥學院，武漢430074)

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不同炮制方法對土家藥“江邊一碗水”化學成分的影響

鄧旭坤，高康麗，陳旅翼，蔣捷，蔡爽，林親雄，關祥會，馬玉雪

(中南民族大學 藥學院，武漢430074)

摘要為研究“江邊一碗水”在炮制前后其化學成分和含量的變化規律，揭示醋炙法和醋蒸法的炮制機理.采用紫外光譜法、薄層色譜法和高效液相色譜法等檢測了“江邊一碗水”生品及其炮制品中的主要化學成分.結果表明：經炮制后，其醋炙品和醋蒸品中的主要化學成分的溶出率與生品相比均有不同程度的增加，其中槲皮素、鬼臼毒素、山奈酚等成分的含量增加顯著，且醋蒸后鬼臼毒素可少量轉化為苦鬼臼毒素.該研究可為“江邊一碗水“炮制質量控制標準的制訂及其相關研究提供一定的理論和物質基礎.

關鍵詞土家藥；江邊一碗水；醋炙法；醋蒸法；化學成分；鬼臼毒素

Effects of Different Preparation Methods on the Contents of Chemical Components in Tujia MedicineDiphylleiasinesis

DengXukun,GaoKangli,ChenLüyi,JiangJie,CaiShuang,LinQinxiong,GuanXianghui,MaYuxue

(College of Pharmacy,South-Central University for Nationalities,Wuhan 430074,China)

Abstract To investigate the variation of the chemical compositions and content ofDiphylleiasinesisbefore and after processing, and uncover the processing mechanism of vinegar-stir-baked and vinegar-steamed method, the main chemical compositions in crude and processedDiphylleiasinesiswere determined by UV,TLC and HPLC. The results indicated that the dissolution rate of the main chemical components in vinegar-stir-baked and vinegar-steamed product especially qucertin, kaempferol and podophyllotoxin significantly increased compared with crude product. After vinegar-steamed, a small amount of the podophyllotoxin converted into picropodophyllotoxin. This research provided theoretical and materials basis for formulating of quality control standard for the processingDiphylleiasinesisand the related research.

KeywordsTujia medicine;Diphylleiasinesis; vinegar stir-baked method; vinegar-steamed method; chemical component; podophyllotoxin

“江邊一碗水”為小檗科植物南方山荷葉(DiphylleiasinensisH.L.li. )的根及根莖[1]，是我國武陵山區土家族常用的民族藥材，具有活血化瘀、抗炎止痛等作用，土家醫臨床上習慣將之用于治療跌打損傷、風濕性關節炎等病癥[2]. 由于“江邊一碗水”具有較強的毒副作用，土家族民間常用醋蒸法、醋炙法、醋磨法、姜制法、童便浸泡法等炮制方法對其進行減毒增效.

民族藥中的化學成分是其藥效及毒性作用的物質基礎，本課題組以鬼臼毒素含量和水浸出量為評價標準，初步認定醋蒸法和醋炙法是較為理想的炮制方法，并對其最佳炮制工藝分別進行了優選[3,4].本文通過比較“江邊一碗水”在炮制前后其化學成分及含量的變化規律，揭示了“江邊一碗水”醋炙法和醋蒸法的炮制機理，可為制定“江邊一碗水”及其醋炙品和醋蒸品的飲片質量標準提供實驗依據.

1儀器與材料

1.1儀器

高效液相色譜儀(Ultimate 3000 型, 美國戴安公司)，旋轉蒸發儀(RE 52-98 型, 上海亞榮生化儀器廠)，電子天平(CP214型, 奧豪斯儀器上海有限公司)，電磁爐(C16-221型, 廣東康寶電器有限公司)，超純水制備儀(ASWO-0005-M型, 重慶頤洋企業發展有限公司)，紫外可見分光光度計(Lambda-35, 美國珀金埃爾默公司)，三用紫外線分析儀(ZF-6型, 上海嘉鵬科技有限公司).

1.2材料

“江邊一碗水”產于湖北神農架林區(中南民族大學藥學院萬定榮教授鑒定本品為小檗科山荷葉屬的草本植物南方山荷葉的根莖)，鬼臼毒素對照品(批號23301, 中國藥品檢定所)，薄層層析板(GF254高層薄層板, 青島海洋化工廠)，色譜甲醇(Tedia Company)，氯仿、甲醇(國藥集團化學試劑有限公司)，米醋(批號20140126, 海天調味食品股份有限公司)，超純水.

1.3色譜條件

色譜柱(TC-C18, 4.6 mm×250 mm, 5 μm, Agilent Technologies Inc)，流動相：甲醇-0.1%甲酸水溶液(42.5︰57.5, V/V)，檢測波長為 290 nm，流速為1.0 mL/min，進樣量為10 μL，柱溫為30 ℃.

2方法與結果

2.1炮制品制備

醋炙品：將生品切薄片，用米醋(每100 g藥材加30 mL)悶潤2 h后，150 ℃下炒制4 min，干燥，粉碎，備用.

醋蒸品：將生品切薄片，用米醋(每100 g藥材加30 mL)悶潤1 h后，置于鍋內隔水常壓蒸制2 h，干燥，粉碎，備用.

2.2生品和炮制品的紫外吸收光譜(UV)的比較

供試品溶液的制備：分別精密稱取生品、醋炙品、醋蒸品粉末(過40目篩) 0.2 g，置于圓底燒瓶中加入CHCl350 mL，加熱回流1 h，冷卻抽濾，所得濾液用旋轉蒸發儀蒸干，加適量甲醇超聲溶解，定容至50 mL容量瓶，濾過，濾液即為供試品溶液.

紫外掃描：分別對生品及其炮制品的供試品溶液進行紫外光譜的掃描.掃描波長范圍為700 ～ 200 nm，結果見圖1. 由圖1可知，“江邊一碗水”的生品及其炮制品在紫外光譜圖中的吸收峰基本一致，無明顯差別，說明炮制前后藥材的化學成分種類未發生顯著改變.

圖1　 “江邊一碗水”生品、醋炙品、醋蒸品的紫外掃描對比圖 Fig.1　UV spectrums comparison diagram of crude product, vinegar stir-baked product and vinegar-steamed product

2.3生品和炮制品的薄層色譜(TLC)的比較

供試品溶液的制備：分別取“江邊一碗水”生品及其炮制品粉末各0.2 g，置圓底燒瓶中加入CHCl350 mL，加熱回流1 h，冷卻抽濾，所得濾液用旋轉蒸發儀蒸干，加適量甲醇超聲溶解，濾過，即得供試品溶液.

對照品溶液的制備：取鬼臼毒素對照品，加甲醇制成每1 mL 含 0.5 mg 的溶液，作為對照品溶液.

薄層色譜實驗條件：硅膠板，展開劑系統：二氯甲烷-甲醇(20︰1,V/V)，分別在可見光，254 nm和365 nm波長處進行觀察，測定結果如圖2所示.由TLC圖對比可知：生品與炮制品的化學成分的種類未見明顯差異，但醋炙品，醋蒸品中的一些化學成分的含量較生品相比有所增加.

每塊薄層板從左向右依次為：鬼臼毒素標準品，生品，醋炙品，醋蒸品a) 可見光; b) 波長254 nm; c) 波長365 nm圖2　不同吸收波長下薄層色譜(TLC)對比圖Fig.2　TLC comparison diagram under different absorption wavelength

2.4生品和炮制品的高效液相色譜(HPLC)的比較

供試品溶液的制備：分別精密稱取生品、醋炙品、醋蒸品粉末(過40目篩)0.2 g，置于圓底燒瓶中加入CHCl350 mL，加熱回流1 h，冷卻抽濾，所得濾液用旋轉蒸發儀蒸干，加10 mL甲醇超聲溶解，過0.45 μm 微孔濾膜后，得供試品溶液，備用.每次進樣10 μL，在上述色譜條件下進行檢測，結果見圖3和表1.

根據液相色譜圖對生品及醋炙品的特征峰進行對比分析，由表1可知: 1,3,4,5,6,8,9號峰面積均有所增加，2,7號峰面積下降并產生10號新物質，其中目前本課題組已確定的峰分別為：2(苦鬼臼毒素葡萄糖苷)，3(苦鬼臼毒素)，4(槲皮素)，5(鬼臼毒素)，6(3-O-甲基槲皮素)，8(山萘酚).經醋炙后2號峰(苦鬼臼毒素葡萄糖苷)含量減少了40.5%，含量增加較明顯的有：4號峰(槲皮素)增加了37.2%，5號峰(鬼臼毒素)增加了22.4%，8號峰(山萘酚)增加了128.5%.

對生品及醋蒸品的特征峰進行對比分析，經醋蒸后1,3,4,5,6,8,9號峰，峰面積均有所增加，9號峰增加明顯，2,7號峰面積下降，其中2號峰(苦鬼臼毒素葡萄糖苷)含量減少了42.4%，增加較明顯的有：4號峰(槲皮素)增加了30.1%，5號峰(鬼臼毒素)增加了13.9%，6號峰(3-0-甲基槲皮素)增加了34.3%，8號峰(山萘酚)增加了82.6%，除此之外，產生了10號新物質.

2) 苦鬼臼毒素葡萄糖苷；3) 苦鬼臼毒素；4) 槲皮素；5) 鬼臼毒素；6) 3-O-甲基槲皮素；8)山奈酚 a) 生品-醋炙品；b)生品-醋蒸品圖3　生品、醋炙品、醋蒸品HPLC圖譜鏡像比較圖Fig.3　The HPLC comparison diagram of crude product, vinegar stir-baked product and vinegar steamed product

編號生品醋炙醋蒸變化情況生品-醋炙生品-醋蒸醋炙-醋蒸120.19725.24224.008+5.045+3.811+1.234216.1739.6119.322-6.562-6.851+0.28931.1491.2261.265+0.077+0.116-0.03941.9492.6742.536+0.725+0.587+0.138590.352110.560102.944+20.212+12.592+7.62064.0785.8815.789+1.803+1.711+0.09278.1728.1205.373-0.052-2.799+2.747810.97325.07220.034+14.099+9.061+5.03891.1154.0298.107+2.914+6.992-4.07810 00.5061.185+0.506+1.185-0.679

從“江邊一碗水”生品、醋炙品和醋蒸品的對比可知，經炮制后，炮制品中的鬼臼毒素含量均高于生品，但醋蒸品中臼毒素含量較醋炙品降低，是由于蒸制時受熱時間較長，鬼臼毒素含量下降.故將鬼臼毒素標準品長時間高溫加熱處理后，制備成供試品溶液進行HPLC檢測，結果見圖4. 圖4中1號峰(鬼臼毒素)長時間高溫加熱后，會少量轉化為2號峰，這是醋蒸品鬼臼毒素含量低于醋炙品的原因，圖4c中鬼臼毒素經過長時間加熱后所生成的2號峰即為苦鬼臼毒素.

1) 鬼臼毒素；2)苦鬼臼毒素圖4　高溫加熱后鬼臼毒素標準品(a)，鬼臼毒素標準品(b)，苦鬼臼毒素標準品(c)的HPLC圖Fig.4　The HPLC diagram of podophyllotoxin standards after heated(a), picropodophyllotoxin standards(b) and podophyllotoxin standards(c).

此外，由于炮制過程中加入了輔料醋，會引進一些米醋中含有的成分，對輔料醋進行了HPLC分析，所得結果見圖5.由圖5可知：炮制輔料醋的化學成分出峰時間較靠前，炮制之后9號峰增加明顯(醋炙后增加了261.3%，醋蒸后增加了627.1%)，分析可能是輔料醋帶入的物質.

圖5　炮制輔料醋的HPLC圖譜Fig.5　The HPLC diagram of vinegar

3討論

中藥和民族藥物炮制后常能減毒或增效，這種作用的發揮主要建立在改變藥材中化學成分的基礎之上. 傳統上土家醫對“江邊一碗水”采取醋蒸法和醋炙法兩種炮制方法，本文深入研究了這兩種不同炮制方法對其藥材中化學成分的種類和含量的影響.

對比分析藥材炮制前后的UV圖譜，TLC圖譜和HPLC圖譜變化，發現“江邊一碗水”經過醋蒸或醋炙后，總煎出率明顯提高，其中化學成分種類變化不大，但一些相關化學成分的含量變化較大，由HPLC圖譜可知：炮制后產生了一個微量的新物質(10號峰).藥材經醋炙或醋蒸炮制后主要化學成分含量增加，是由于經醋潤泡后藥材質地松軟，植物細胞壁在酸性條件下遭到破壞，醋蒸或醋炙使其高溫受熱后，隨著細胞壁和細胞膜的破壞，其水溶性和脂溶性成分的溶出率均顯著增加.醋蒸品中鬼臼毒素較醋炙品含量略低是由于長時間高溫加熱，使其轉化為苦鬼臼毒素所致；醋蒸與醋炙炮制后藥材中苦鬼臼毒素葡萄糖苷含量明顯降低，是由于炮制過程中苦鬼臼毒素葡萄糖苷在酸性受熱條件下水解轉化為其他物質所致.此外，兩種炮制品的9號峰較生品均顯著增加，可能是加入輔料醋后帶入的物質.對于炮制輔料醋是否會引起藥材中化學成分的改變尚有待進一步探討，以期深入闡釋其炮制機理.

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中圖分類號R282.71

文獻標識碼A

文章編號1672-4321(2016)01-0055-04

基金項目國家科技部“十二五”科技支撐計劃資助項目(2012BAI27B06)；國家自然科學基金資助項目(81073147)

作者簡介鄧旭坤(1972-)，男，教授，博士，研究方向：藥理學，中藥炮制學，E-mail：dxk711208@163.com

收稿日期2015-09-15