補腎化瘀方對PCOS大鼠血清激素水平的影響*

張翌蕾，潘　文，汪永娟，王貴霞，李明明甘肅中醫藥大學，甘肅蘭州70000；2甘肅省中醫藥研究院；甘肅省中醫院

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補腎化瘀方對PCOS大鼠
血清激素水平的影響*

張翌蕾1，潘文2△，汪永娟1，王貴霞3，李明明1
1甘肅中醫藥大學，甘肅蘭州730000；2甘肅省中醫藥研究院；3甘肅省中醫院

［摘要］目的：觀察補腎化瘀方對多囊卵巢綜合征(PCOS)大鼠內分泌水平的影響。方法：選取120只6周齡雌性SD大鼠，設立空白對照組20只，余100只大鼠采用來曲唑溶液對大鼠灌胃，并喂以高脂高糖飼料建立PCOS大鼠模型，成模大鼠隨機分為5組：模型對照組、二甲雙胍組、中藥低濃度組、中藥中濃度組、中藥高濃度組，每組20只。分別給予相應藥物進行干預，干預14天后采用酶聯免疫（ELISA）法測定大鼠血清雌醇（E1）、雙氫睪酮（DHT）、促性腺激素釋放激素（GnRH）、胰島素（INS）水平，HE染色觀察各組大鼠卵巢形態學變化。結果：與空白對照組比較，模型對照組血清E1、DHT、INS水平明顯增高(P＜0.05)，卵泡呈囊性擴張，顆粒細胞層數減少，卵泡個數增多，卵母細胞消失；與模型對照組比較，各治療組大鼠血清E1、DHT、INS水平顯著降低(P＜0.05)，卵巢HE染色鏡下可見黃體以及不同階段卵泡、顆粒細胞層數明顯增多，卵泡內可見卵母細胞以及放射冠。結論：補腎化瘀方可有效改善PCOS大鼠血清激素水平，降低INS水平，改善E1過高引起的高雌酮血癥，并且能夠改善卵巢功能與排卵情況。

［關鍵詞］多囊卵巢綜合征；補腎化瘀方；胰島素抵抗；激素水平

The Influence of BuShen HuaYu Prescription on the Levels of Hormone of PCOS Rats

ZHANG Yilei1,PAN Wen2△,WANG Yongjuan1,WANG Guixia3,LI Mingming1
1 Gansu University of Traditional Chinese Medicine,Lanzhou 730000,China;2 Gansu Provincial Academy of Chinese Medicine;3 Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine

Abstract Objective:To observe the influence of BuShen HuaYu prescription on endocrine levels of the rats with polycystic ovarian syndrome (PCOS).Methods:All 120 rats were chosen,20 rats were established as blank control group,the rest 100 rats received intragastric administration of letrozole solution,and they were fed with high fat and high sugar fodder to establish PCOS rat model,the models were randomized into five groups:model control group,metformin group,high,moderate and low doses groups of herbs,20 rats each group.The rats were intervened by the corresponding medicine,the levels of estrogen (E1),dihydrotestosterone (DHT),gonadotropin-releasing hormone(GnRH) and insulin(INS) were detected by adopting ELISA method,and morphological changes of ovaries were observed by HE staining method after intervened for 14 days.Results:Compared with blank control group,the levels of E1,DHT and INS of model control group increased obviously (P＜0.05),ovarian follicles were in cystic dilatation,granular cell layers decreased,the number of ovarian follicles increased,oocytes disappeared;compared with model control group,the levels of E1,DHT and INS lowered in different groups significantly (P＜0.05).Corpora luteum and ovarian follicles in different stages could be seen,granular cell layers increased notably,oocytes and corona radiate could be seen in the ovarian follicles under HE chromoendoscopy.Conclusion:BuShen HuaYu prescription could effectively improve endocrine levels of PCOS rats,decrease the levels of INS and improve high E1-induced ketonemia,ovarian function and ovulation.

Keywords polycystic ovarian syndrome;BuShen HuaYu prescription;insulin;endocrine levels

多囊卵巢綜合征(polycystic ovarian syndrome，PCOS)是一種發病多因性、臨床表現多態性的內分泌紊亂綜合征。PCOS的臨床表現主要有多毛、痤瘡、肥胖、閉經、不孕等。近幾年，PCOS的發病呈上升趨勢，PCOS對女性身心健康影響之大以及并發癥涉及范圍之廣，使得近年來對PCOS的關注和研究越來越多。研究發現，胰島素抵抗(insulin resistance，IR)與PCOS的發生發展密切相關［1］，在PCOS患者中，70％以上都伴有IR［2］，并且PCOS患者血清雌酮(E1)含量升高，誘發高雌酮血癥。目前臨床治療PCOS多采用生活方式干預和藥物治療，但存在不良反應和用藥后易復發的弊端［3］。隨著中醫對PCOS研究的不斷深入，認識到腎虛血瘀是PCOS的基本病機［4］。補腎化瘀方是甘肅省中醫院婦科經驗方，治療PCOS具有較好療效。本實驗通過建立PCOS大鼠模型，觀察補腎化瘀方對PCOS大鼠的內分泌調控作用，為臨床運用補腎化瘀方提供客觀依據。

1　材料與方法

1.1動物與分組選用體質量180 g左右、6周齡有規律排卵的SD雌鼠(清潔級)120只，由甘肅中醫學院動物實驗中心提供，許可證號：SCXK(甘) 2011-0001。SPF級喂養。將動物編號后采用隨機數計表法隨機抽取20只大鼠設為正常對照組，常規飼料飼養，飲水及食物自由攝取。其余大鼠待造模完成后重新編號根據隨機數字表法將大鼠分為模型對照組，二甲雙胍組，中藥高、中、低濃度組，每組各20只，以高脂高糖飼料和5％葡萄糖水喂養，飲水以及食物自由攝取。

1.2儀器、試劑與藥物超低溫冰箱(三洋MDF-U53V)，TDZ4-WS低速離心機(長沙平凡儀器儀表有限公司提供)，日本OLYMPUS顯微鏡光學顯微鏡(甘肅嘉瑞貿易有限責任公司提供)，DHG-9031恒溫箱(上海醫用分析儀器廠提供)，PFZ-5酶標儀(長沙平凡儀器儀表有限公司提供)。來曲唑(sigam公司提供)，羥甲基纖維素(sigam公司提供)，高脂高糖飼料(北京科澳協力有限公司提供)，ELISA試劑盒(RD公司提供)。補腎化瘀方(女貞子、墨旱蓮、菟絲子、山茱萸、赤芍、丹參、桃仁、川芎等)藥物由甘肅省中醫院藥房提供，藥物煎制與濃縮由甘肅省中醫院藥劑科負責，依據人與大鼠之間用藥劑量換算系數公式(大鼠劑量=6.3×人的劑量mg/kg)換算實驗給藥劑量。二甲雙胍組4.498 mg/mL(等效劑量換算)；補腎化瘀方高濃度組(2倍等效劑量)1.98 g/mL中濃度組(等效劑量)0.989 g/mL，低濃度組(1/2倍等效劑量) 0.494 5 g/mL。

1.3模型制備實驗組大鼠灌胃服用來曲唑［5］1 mg/(kg·d)，溶于1％羥甲基纖維素中，連續灌胃24天，自造模當天起，每天觀察大鼠陰道脫落細胞涂片。

1.4給藥方法造模結束次日開始給藥：正常對照組與模型對照組給予生理鹽水0.01mL/(g·d)灌胃；二甲雙胍組給予二甲雙胍溶液0.01 mL/(g·d)灌胃；中藥高、中、低濃度組分別給予高、中、低濃度補腎化瘀方0.01 mL/(g·d)灌胃；連續灌胃14天。

1.5標本采集與存儲大鼠灌胃14天后，當晚8∶00禁食，次晨8∶00稱重。腹腔注入10％水合氯醛麻醉，行腹主動脈取血5～8 mL，靜置30分鐘后將全血3 000 r/min離心10分鐘得血清，-80℃凍存備用。取大鼠雙側卵巢組織固定于體積分數4％多聚甲醛中。

1.6觀察指標及方法雌酮(E1)、雙氫睪酮(DHT)、促性腺激素釋放激素(GnRH)采用酶聯免疫(ELISA)法進行測定；卵巢組織用石蠟包埋切片后行HE染色，光鏡下觀察卵巢形態學變化。

1.7統計學方法采用SPSS 17.0軟件進行統計分析，計量資料用(±s)表示，檢驗資料正態性，非正態分布的資料行正態性轉換進行分析。組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2　結果

2.1激素水平模型對照組E1、DHT、INS水平明顯高于空白對照組(P＜0.05 )，各治療組與模型對照組相比，E1、DHT、INS水平明顯降低(P＜0.05)，各組相比GnRH無明顯變化。見表1。

表1　各組激素水平比較

2.2卵巢形態學正常對照組卵巢組織切片光鏡下可見不同發育階段的卵泡和黃體，卵泡內顆粒細胞分布均勻，顆粒細胞層多為8～11層，卵泡內可見卵母細胞以及放射冠；模型對照組卵泡多呈囊性擴張，顆粒細胞層減少至2～3層，卵泡內卵母細胞或放射冠消失，個別卵巢鏡下可見黃體；各治療組囊性擴張卵泡較模型對照組明顯減少，各級卵泡和黃體數量明顯增加，顆粒細胞層增厚。見圖1。

圖1　各組卵巢形態學比較

3　討論

中醫古籍中并無“多囊卵巢綜合征”這一病名，而根據其臨床表現多將PCOS歸為“月經后期”“閉經”“不孕”“崩漏”“癥瘕”等范疇，中醫從整體觀念入手，認為PCOS的病機多以腎虛為基礎，兼有痰濕、血瘀，病性多為虛實夾雜［5-6］。“經本于腎”，“經水出諸腎”，卵泡的發育與成熟與腎中精氣的充盛密切相關，并且腎中陽氣鼓動、沖任氣血調暢又可促使卵泡排出［7］。腎虛可使腎-天癸-沖任-胞宮軸失衡，卵巢正常功能受到抑制，使卵泡生長、發育受限，成熟卵泡不能正常排出，從而造成卵巢多囊樣改變，并且PCOS患者子宮、卵巢供血存在異常，阻力指數增高，子宮與卵巢長期處于血瘀狀態，瘀滯不通則阻礙卵泡的生長發育和排出［8］。PCOS兼有血瘀患者的INS水平要顯著高于單純PCOS患者，可見腎虛血瘀是PCOS伴IR的主要病機［1］。

補腎化瘀方是甘肅省中醫院婦科經驗方，原方重用菟絲子、女貞子、墨旱蓮、山茱萸等滋腎養血，酌加川芎、桃仁、丹參、赤芍等藥物活血化瘀，針對PCOS的主要發病機制運用活血化瘀藥物，使精充血足并得以疏導則經自調。中藥藥理研究發現，補腎中藥［9］有類激素作用，可以調節激素水平，使卵巢功能得到改善。活血化瘀藥［10］可改善子宮、卵巢局部微環境，使子宮、卵巢供血加強，并可改善胰島素抵抗，增加胰島素效應，使機體內分泌環境得到改善，卵泡得以生長發育，促使成熟卵泡排出，恢復正常排卵。此外，活血化瘀藥物還具有抗炎、增強脂代謝、抗氧化［11］等作用，可以有效控制PCOS的遠期并發癥的發生發展。

PCOS患者中70％以上伴有IR［2］，胰島素水平過高對卵巢和腎上腺的雄激素分泌具有促進作用，進而成為PCOS雄激素水平升高的另一重要因素［12］。臨床多采用抗雄激素、降糖、胰島素增敏等方法對PCOS進行對癥治療，雖然臨床療效顯著，但存在一定的藥物毒副作用及停藥后反復的弊端［3］。

基于以上理論和臨床現狀，在動物實驗研究中觀察補腎化瘀方的療效，并與二甲雙胍的療效進行對比。補腎化瘀方可有效降低INS水平，改善胰島素抵抗，降低E1水平，改善高雌酮血癥，并可有效降低DHT水平；改善卵巢功能，促使卵泡發育，有效改善機體內環境，從整體上對PCOS進行調控。

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通訊作者：△潘文(1963—)，女，碩士研究生導師，主任醫師，甘肅省領軍人才，甘肅省555創新人才，甘肅省衛生廳中青年學術技術帶頭人，中華中醫藥學會理事，中華中醫藥學會編輯出版分會副主任委員，中華中醫藥學會科普分會副主任委員，中華中醫藥學會文化分會常務理事，甘肅省中醫藥學會副會長兼副秘書長，甘肅省中醫藥學會文化專業委員會副主任委員兼秘書長，甘肅省中西醫結合學會婦科專業委員會主任委員。研究方向：補腎活血法治療多囊卵巢綜合征伴胰島素抵抗的機理研究。

作者簡介：張翌蕾（1990—），女，碩士研究生。研究方向：中醫婦科血瘀證。

*基金項目：國家自然科學基金資助項目（編號81360604）；甘肅省技術研究與開發專項計劃項目（編號1305TCYA029）；甘肅省教育廳碩士研究生導師項目（編號1206-07)；甘肅省衛生行業科研計劃管理項目（編號GWGL2013-3）。

收稿日期：2015-11-22

［中圖分類號］R285.5

［文獻標識碼］A

［文章編號］1004-6852(2016)02-0005-04