氨酚曲馬多口腔崩解片中有關物質的HPLC測定

包志鵬

摘 要：目的：建立高效液相色譜法，并對氨酚曲馬多口腔崩解片中的已知雜質和未知雜質進行精準測定。方法：采用BDS-C18柱來進行有關物質測定，以醋酸-醋酸鈉緩沖液-甲醇為流動相A，以甲醇為流動相B，嚴格遵照實驗程序梯度來進行洗脫，實驗檢測波長為271nm，流速為1.0mL/min。結果：實驗研究表明，各種雜質都呈現較好的分離狀態，氨基酚和順式鹽酸曲馬多的最低檢測率滿足實驗標準，平均回收率普遍在99.5%以上。結論：采用HPLC法來對氨酚曲馬多口腔崩解片中的有關物質進行測定，具有良好的應用效果，并且具有一定的便捷性和準確性，值得加以推廣應用。

關鍵詞：氨酚曲馬多口腔崩解片；對乙酰氨基酚；對氨基酚；高效液相色譜法；有關物質

對乙酰氨基酚屬于苯胺類解熱鎮痛藥物，其半衰期大多在1-4小時之間。鹽酸曲馬多屬于合成阿片類的中樞性鎮痛藥，減小較快，實際鎮痛時間能夠持續5小時左右。國外市售的氨酚曲馬多片即是由對乙酰氨基酚和鹽酸曲馬多的相互配合所制成的，在中度和重度急性疼痛中得到比較廣泛的應用，尤其是術后疼痛和晚期癌性疼痛的之來哦，具有良好的鎮痛效果。臨床實驗研究顯示，此種復方制劑的鎮痛效果較強，與同等劑量的單獨組分相比，見效快且維持時間長。實驗研究表明，HPLC測定方式具有一定的精準性和高效性，能夠對氨酚曲馬多口腔崩解片中的已知雜質對氨基酚、順式鹽酸勿罵多和其他類型的未知雜質進行同時檢測，從而在保證檢測效果的基礎上，提高了有關物質測定的簡便性和準確性。

1 儀器與試藥

在本次實驗研究中，主要選用標準規格的高效液相色譜儀來進行實驗，確保甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。試藥方面，確保對乙酰氨基酚對照品和鹽酸曲馬多對照品的質量滿足實驗的實際藥品要求，對氨基酚對照品的含量應當在95%以上，順式鹽酸曲馬多對照品選自中國藥品生物制品檢定所，氨酚曲馬多口腔崩解片是研究人員自制而成的。

2 方法與結果

2.1 制備溶液

供試品溶液的制備過程中，取適量樣品進行研磨，至細粉末狀態后進行精密稱取，置于50mL的容量瓶中，加入流動相A，在超聲環境下對其進行溶解處理，稀釋至刻度后進行搖勻和過濾，去適量濾液作為供試品溶液。

對照品溶液的制備過程中，精密稱取適量氨基酚對照品后，加入流動相A制成標準含量的溶液，作為對照品溶液1；另外精密稱取順式鹽酸曲馬多對照品適量后，同樣加入流動相A制成標準含量的對照品溶液2。在此基礎上，精密稱取供試品溶液、對照品溶液1各1mL，對照品溶液2取3mL，將三者之于統一100mL容量瓶中，加入流動相A進行稀釋，作為對照溶液。

2.2 色譜條件及測定方法

在本次實驗研究中，采用采用BDS-C18色譜柱來進行實驗，并以以醋酸-醋酸鈉緩沖液-甲醇為流動相A，以甲醇為流動相B，嚴格遵照實驗程序梯度來進行洗脫。測定方法上，取適量對照溶液注入到液相色譜儀中，并結合實驗的實際情況來對其靈敏度進行調節，確保對乙酰氨基酚的峰高滿足實驗滿量程的80%，在此基礎上取適量供試品溶液注入到液相色譜儀中，對色譜圖內鹽酸曲馬多的保留時間進行精準的記錄。相關實驗研究人員應當注意的是，供試品溶液的色譜圖中若有對氨基酚和順式鹽酸曲馬多保留時間愛你相一致的色譜峰，應當對其面積進行合理化控制，應當小于對照品溶液中相應的峰面積，并保證其他雜質峰面積的和在對照溶液主峰面積之和。

表1 梯度洗脫程序表

2.3 專屬性實驗

2.3.1 各雜質的分離。精密量取對照溶液及對照品與供試品混合溶液各適量，按上述色譜條件分別進樣，結果見圖1。各己知物質與相鄰峰均基線分離，理論板數均不低于2000。輔料對測定無干擾。

2.3.2 破壞性試驗。精密稱取樣品研細粉末適量（約相當于鹽酸曲馬多37.Smg），置50mL量瓶中，共稱5份，分別經過高溫、光照、強酸、強堿、強氧化等條件破壞后，照供試品溶液制備方法處理，按色譜條件進樣分析，結果見圖2。各破壞條件下的降解產物與主成分峰均有良好的分離度。

3 討論與結論

3.1 檢測波長的選取。實驗研究顯示，檢測波長的選取，應當分別取適量已知物質對招聘適量，加入流動相A進行溶解后，在標準波長范圍內對其進行掃描，對乙酰氨基酚、鹽酸曲馬多以及對氨基酚等的最大吸收波長詳細結果見圖3。通過觀察和分析可知，樣品中鹽酸曲馬多的量較少，并且其最大吸收波長與已知雜質對氨基酚和順式鹽酸曲馬多比較接近，在此種情況下，為了更好的提高鹽酸曲馬多以及其有關雜質的實際檢測靈敏度，應當以271nm為檢測波長，以保證實驗研究的精準性和可靠性。

3.2 色譜柱的選擇從文獻來看，對乙酸氨基酚和鹽酸曲馬多的色譜分析都采用C18柱。但經試驗發現，對乙酸氨基酚和鹽酸曲馬多在不同品牌C18柱中的保留行為有很大的差異。曾采用Zorbax C18和HypersilODS柱進行分析，前者對乙酰氨基酚和鹽酸曲馬多都有拖尾現象，理論塔板數也不夠理想，后者對乙酸氨基酚峰形有了很大改善，鹽酸曲馬多拖尾卻更嚴重。可能是分析物與C18柱硅膠擔體表面的殘余硅經基發生了相互作用，使樣品峰形極差，拖尾嚴重，這樣會導致一些小峰埋沒于前一拖尾峰的尾巴中，對雜質檢查非常不利。因此嘗試使用BDS-C18柱，BDS硅膠擔體鍵合前經過專門的堿鈍化處理，將殘余硅輕基降至極限，可以大大降低硅輕基與分析物之間的相互作用，改善色譜峰形。

3.3 流動相的選擇

曾參照BP 2002收錄的鹽酸曲馬多有關物質檢查方法配制流動相：但經測定，該流動相pH值小于2，對一般色譜柱損傷較大。后參照中國藥典2005版收錄的鹽酸曲馬多片有關物質檢查191流動相：醋酸一醋酸鈉緩沖液（pH4.5）一甲醇（65：35）。但該色譜條件下，對乙酰氨基酚與相鄰雜質峰的分離度不佳，因此嘗試將流動相中甲醇比例逐漸降低。當緩沖液與甲醇比例達80：20時，對乙酸氨基酚與相鄰雜質的分離度符合要求，但鹽酸曲馬多保留時間太長（約45min），峰對稱性較差，檢測靈敏度降低。為了使對乙酸氨基酚和鹽酸曲馬多都得到理想的保留時間和分離度，使用梯度洗脫作為流動相系統，結果令人滿意。■

參考文獻

[1]胡玉慶.氨酚曲馬多片的有關物質方法學研究[D].黑龍江醫學，2014.

[2]劉小均，羅軍波，李培海.RP-HPLC加校正因子的主成分自身對照法測定鹽酸多奈哌齊口腔崩解片中有關物質的含量[J].中國藥房，2015.