消銀湯對豚鼠銀屑病樣模型血清TNF—α、IFN—γ水平的影響

宋紅霞

【摘 要】目的：探討消銀湯對TNF-α、IFN-γ水平的影響。方法：建立豚鼠耳部銀屑病皮損模型，給予不同劑量的消銀湯干預，14d后，采用ELISA法檢測豚鼠血清TNF-α、IFN-γ的含量。結果：消銀湯組豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量均明顯低于模型組（P<0.01）；消銀湯高劑量組對豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ表達的改善作用優于甲氨蝶呤（P<0.05或P<0.01）。結論：消銀湯對銀屑病具有治療作用。

【關鍵詞】銀屑??；消銀湯；腫瘤壞死因子-α；干擾素-γ

銀屑病是一種常見的易復發的慢性炎癥和增殖性皮膚病，目前該病病因和發病機理不明，大多數學者認為銀屑病是一種多基因遺傳背景下的T細胞介導的自身免疫性疾病[1]。消銀湯是筆者的臨床經驗方，治療尋常型銀屑病取得了滿意的療效。本實驗利用消銀湯對豚鼠銀屑病樣動物模型進行研究，檢測豚鼠血清中腫瘤壞死因子（TNF）-α和干擾素（IFN）-γ的水平，為臨床應用提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 動物

白色豚鼠53只，普通級，體質量為300g～350g，雌雄兼用，由重慶醫科大學實驗動物中心提供，合格證號：SYXK（渝）2012-0001。

1.2 藥物

消銀湯藥物組成：黃芩10g、生地15g、牡丹皮12g、赤芍15g、半枝蓮30g、白花蛇舌草15g、槐花10g、紫草10g、玄參15g、丹參15g、雞血藤15g和甘草6g。制備方法：稱取各藥材，用水煎煮制備，共煎煮兩次，煎出液合并，濃縮到每劑藥168ml。消銀湯的人體推薦攝入量為168g·d-1生藥，相當于2.8g·kg-1·d-1生藥（成人以60kg計）。

1.3 主要試劑及設備

甲氨蝶呤片（上海信誼藥業有限公司，批號：20130403），普萘洛爾（山西云鵬制藥有限公司，批號：130801），聚乙烯吡咯烷酮，氮酮（國藥集團化學制劑有限公司，批號：20131115，20131030），豚鼠TNF-α，IFN-γELISA試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司，批號：201311），光學顯微鏡（日本奧林巴斯公司），LP-400酶標儀（法國巴斯德公司）。

1.4 消銀湯對豚鼠銀屑病樣模型血清中TNF-α、IFN-γ含量的影響

鹽酸普萘洛爾搽劑制備方法：取鹽酸普萘洛爾5g，用50%乙醇溶解，加入氮酮5mL作為透皮吸收促進劑，加入聚乙烯吡咯烷酮（PVP-K30）5g為成膜材料，最后補加50%乙醇至100mL，攪拌均勻即得[2]。

取白色豚鼠53只，雌雄兼用，隨機抽取8只作為正常對照組，其余豚鼠用玻棒涂抹普萘洛爾搽劑于兩側耳廓皮膚，用量為0.1mL/cm2，每日兩次，連續涂抹兩周，制備耳部皮膚銀屑病樣皮損模型（至第2周末，空白組及造模組隨機處死5只豚鼠作耳組織病理學檢查，如出現銀屑病樣病理改變，則提示造模成功）[3]。

將成模豚鼠40只，隨機分為模型組、消銀湯高（26.0g·kg-1）、中（13.0g·kg-1，等于臨床等效劑量）、低（6.5g·kg-1）劑量組、陽性對照組（甲氨蝶呤0.77mg·kg-1，相當于臨床等效劑量），每組8只。各組灌胃給藥，每天兩次，連續14d，給藥容積為13ml·kg-1。正常組和模型組給予等量的生理鹽水。末次給藥1h后，腹腔注射20%烏拉坦麻醉豚鼠，切開腹部，暴露腹主動脈，采集全血8mL，室溫靜置30min，3000r·min-1離心15min，吸取上清，置于-80℃保存。用ELISA試劑盒檢測血清中細胞因子TNF-α、IFN-γ含量，具體操作嚴格按照說明書進行。

1.5 統計學分析

采用SPSS 13.0軟件進行數據處理和統計分析，計量資料以均數±標準差（■±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 消銀湯對豚鼠銀屑病樣模型血清中TNF-α、IFN-γ含量的影響

與空白對照組相比，模型組豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量均明顯升高（P<0.01）；與模型組相比，消銀湯各劑量組及甲氨蝶呤組豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量均明顯降低（P<0.01）；消銀湯高劑量組與甲氨蝶呤組比較，差異有統計學意義（P<0.05或P<0.01），見表1：

表1 消銀湯對豚鼠銀屑病樣模型血清中TNF-α、IFN-γ含量的影響）（■±s，n=8）

注：與模型組比較aP<0.01；與甲氨蝶呤組比較bP<0.05，cP<0.01.

3 討論

銀屑病是一種以紅斑鱗屑為主的慢性炎癥性皮膚病，其病因和發病機制復雜。目前，銀屑病發病機制主要有遺傳因素、免疫因素、感染因素、內分泌因素、神經精神因素等[4]。近年來，大量研究表明銀屑病存在著免疫異常，而細胞因子作為免疫調節的物質基礎在銀屑病的發病中起著重要的作用[5]。TNF-α是一種重要的促炎癥性細胞因子，與銀屑病的發生密切相關，它能夠促進淋巴細胞浸潤，能夠促進朗格漢斯細胞成熟，能夠促進上皮細胞和成纖維細胞的生長[6]。INF-γ在銀屑病中既可導致角質形成細胞異常增生，又可使T細胞進入表皮增殖活化[7]。

本實驗結果顯示，模型組豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量明顯高于空白對照組，消銀湯各劑量組對豚鼠血清TNF-α、IFN-γ均有抑制作用，其中消銀湯高劑量組的作用優于甲氨蝶呤組，結果提示消銀湯對銀屑病豚鼠模型的治療作用可能與降低血清中TNF-α、IFN-γ的表達水平有關。

【參考文獻】

[1]郝平生.豚鼠銀屑病動物模型組織中TNF-α表達及加味涼血消風散的調控實驗研究[J].成都中醫藥大學學報，2011，34（3）：29-31.

[2]李濤，李洪梅，李小芹，等.銀屑平顆粒對豚鼠銀屑病動物模型的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2010，16（16）：137-139.

[3]王萍，聶繼紅，孫玉華.雙黃解毒乳膏對銀屑病動物模型作用的實驗研究[J].中成藥，2011，33（7）：1227-1229.

[4]趙辨.中國臨床皮膚病學[M].第1版.南京：江蘇科學技術出版社，2009：1008-1009.

[5]陳文娟，史玉玲.銀屑病免疫學的研究進展[J].國際皮膚性病學雜志，2015，41（1）：31-34.

[6]郝平生.豚鼠銀屑病動物模型組織中TNF-α表達及加味涼血消風散的調控實驗研究[J].成都中醫藥大學學報，2011，34（3）：29-31.

[7]胡祥宇，楊文信.血清中腫瘤壞死因子α、干擾素γ及白介素4與尋常型銀屑病中醫辨證相關性研究[J].西南軍醫，2015，17（2）：156-158.

[責任編輯：王楠]