miR-200b在胃癌中的表達及其臨床意義

易禮智鄧學杰王琴鐘顯飛

樂山市人民醫院消化內科 四川樂山 614000

miR-200b在胃癌中的表達及其臨床意義

易禮智1鄧學杰1王琴1鐘顯飛1

樂山市人民醫院消化內科 四川樂山 614000

目的 檢測miR-200b在胃癌(GC)細胞和組織中的表達，探討miR-200b的異常表達與胃癌發生、發展的關系及其臨床意義。方法 實時定量PCR法檢測miR-200b在胃癌細胞株及活檢組織及相應癌旁正常組織中mRNA表達水平的差異，并分析其與胃癌的臨床病理因素的關系。結果 在胃癌組織中miR-200b mRNA表達水平顯著低于正常胃黏膜組織；此外，miR-200b的表達水平與胃癌分化程度、浸潤深度以及遠處轉移呈正相關性(P＜0.05)。結論 miR-200b在胃癌中低表達，其表達水平與胃癌進展密切相關，可作為預測胃癌進展和轉移的分子標記物之一。

胃癌；miR-200b;表達;分子標記

胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，全世界排名第四位[1,2]。胃癌的發生是一個復雜的多步驟的過程，包括上皮細胞的異常增生，凋亡自然程序的紊亂，異常分化等 GC[3,4]。近些年來，隨著臨床早期診斷和治療方法的改進，早期胃癌患者的生存率要明顯高于晚期胃癌患者。然而，胃癌的整體生存率仍然很低。傳統的治療方法已經不能準確預測胃癌患者的預后，因此，發現和研究有效的、具有潛在價值的新的標志物對于胃癌的預后評估具有重要意義。

微小RNA（microRNA 或者miRs）是一種小的非編碼RNA，它能在轉錄后水平上調節基因表達[5，6]。microRNA在腫瘤的發生發展中具有重要的作用[7]。研究顯示，它通過靶定癌基因或腫瘤抑癌基因，參與了腫瘤的凋亡，增殖，分化，發揮著類似腫瘤抑制因子或癌基因的作用[8-10]。已經有文獻報道顯示miR-200b參與一些腫瘤的增殖、凋亡和周期，如乳腺癌[11]，肝癌[12]，卵巢癌[13]，宮頸癌[14]，肺癌[15]等，但在胃癌中尚未有相關的研究報道。因此這篇文章主要研究miR-200b在胃癌中的表達情況。

1 材料與方法

1.1 材料 收集樂山市人民醫院手術切除的58對新鮮的胃癌組織和癌旁正常腸黏膜組織置于液氮中保存備用，其中男性33例，女性25例；年齡23～67歲，平均年齡57.5歲。反轉錄試劑盒(Takara公司)，Trizol、SYBR GREEN MIX(Toyobo公司)，

1.2 方法 實時定量PCR采用Trizol裂解相應的組織和細胞，按常規方法提取RNA，測其濃度，按照miRNA反轉錄試劑盒說明書反轉錄成cDNA后，采用特異的引物擴增，進行實時定量PCR檢測。U6基因作為參照基因，反應條件50%2 min，95℃10 min預變性，95℃15 s，60cc 1 min，72℃34 S，30個循環，反應結束后得ct值。根據公式26[(ctof miR-200b)一(ct of GAPDH)]計算目的基因相對含量，實驗重復3次。miR在胃癌組織中N/T值＞2為高表達，0-2為低表達。

1.3 統計學分析 采用SPSS20.0進行數據分析，miR-200b的mRNA表達水平和臨床病理因素的相關性采用Wilcoxon Signed Ranks檢驗分析和Spearman相關分析。

2 結果

2.1.在細胞及胃癌組織中的檢測 miR-200b在GSE(永生化胃正常上皮細胞株)中含量最高，在 6株胃癌細胞株中，miR-200b在轉移能力較低的AGS中水平最高，在轉移能力較強的SGC中含量最低（圖1）。miR-200b在58例配對組織中，mRNA水平上，CRC組織中miR-200b的表達水平要低于正常胃黏膜組織中的表達量，P值為0.0012，具有統計學差異。其中有43例CRC組織中miR-200b蛋白的表達顯著低于正常黏膜組織，15例高于正常黏膜組織（圖2）。

圖1 miR-200b在7株胃癌細胞株中的表達

圖2 miR-200b在58例胃癌配對組織中的表達

2.2 胃癌組織中miR-200b mRNA含量與臨床病理參數的關系 癌組織中miR-200b含量高低與胃癌分化程度、是否有遠處轉移、淋巴結轉移相關，（均P＜0.05），而與腫瘤患者的性別、年齡、浸潤深度無關（P＞0.05）（表 1）。結果顯示，癌組織中miR-200b含量越低，腫瘤分化程度越低，有遠處轉移和淋巴節轉移的患者癌組織中miR-200b含量要低于無遠處轉移患者。

表1：miR-200b在癌組織中的含量與臨床病理特征的關系

3 討論

本文我們主要探討了miR-200b在胃癌中的作用。miR-200b，作為微小非編碼RNA的一種，和其他大多數的miRNAs一樣，在疾病的發生發展中具有重要的作用。它的高表達能促進瘢痕的增生[16]、能調節 EB病毒的潛伏及溶解復制[17]。而在腫瘤的演進過程中miR-200b也發揮著重要的作用[7]。目前為止，僅有幾篇文章報道 miR-200b在腫瘤中的作用[11-15]，在胃癌中尚未報道。在這篇文章中，我們首先檢測了miRNA在正常的胃上皮細胞株GSE和6株胃癌細胞株中的含量。檢測發現miR-200b在正常的胃上皮細胞中含量最高，在胃癌細胞株中，在轉移能力較強的細胞中含量相對較低，轉移能力較低的細胞中含量較高。這一結果初步證明，miR-200b在胃癌中的含量高低與轉移相關。隨后，我們在58例配對的胃癌新鮮組織中檢測了miR-200b的含量。我們發現，正常胃粘膜上皮中miR-200b的含量明顯高于胃癌組織中的含量，P值小于0.001，且miR-200b在癌組織中的含量的高低與胃癌的分化程度、淋巴結轉移和遠處轉移相關。

以上結果顯示，miR-200b與胃癌的轉移是密切相關的。但其參與胃癌轉移的作用機制尚不清楚。眾所周知，microRNA能通過靶定癌基因或腫瘤抑癌基因，調節其轉錄后的蛋白水平，發揮著類似腫瘤抑制因子或癌基因的作用，參與腫瘤的凋亡、增殖、分化和轉移[8-10]。有研究報道顯示，miR-200b能夠靶向作用于ZEB2抑制膠質瘤的生長和轉移[18]。它還能夠通過靶向作用于FSCN1抑制非小細胞肺癌的侵襲和轉移[14]。另外，miR-200b還能靶向作用于 RhoE抑制宮頸癌細胞的上皮向間質轉化和轉移[15].除此之外，miR-200b還能通過抑制其啟動子或DNA的甲基化來抑制腫瘤細胞的增殖和侵襲、轉移[19,20]。這些研究機制在我們下一步研究闡述miR-200b在胃癌中的作用機制中有很重要的參考價值。

綜上所述，本實驗結果表明，miR-200b在胃癌腫瘤組織中低表達，其表達水平在腫瘤分化程度、淋巴結轉移和遠處轉移的病例中有差異，且呈負相關關系，故其可能參與結直腸癌的發生、進展和轉移。本研究為miR-200b在胃癌腫瘤轉移分子標證物提供了理論依據，也為結胃癌的治療提供一個新的思路。

[1]Jemal A, Bray F， Center MM, Ferlay J, Ward E, et al.Global cancer statistics.CA Cancer J Clin 2011; 61: 69–90

[2]Catalano V, Labianca R, Beretta GD, et al.Gastric cancer.Crit Rev Oncol Hematol 2009; 71: 127-164.

[3]hand metastasis of glioma cells via targeting ZEB2.Int J Oncol 2016;48:541-550.

Expression of miR-200b and its clinical pathologic significance in gastric cancer

Yi Lizhi1Deng Xuejie1Wang Qin1Zhong Xianfei1
Department of gastroenterology，People’s hospital of Leshan City, 614000,Sichuan Province，China; Corresponding author：Zhong Xianfei (E—mail：651218437@qq.com)

Purpose To investigate the expression and clinicopathologic significance of miR-200b in gastric cancer.MethodsThe mRNA expression level of miR-200b in GC cell lines and biopsies and their matched adjacent tissues were detected by real time RT—PCR.ResultsmiR-200b mRNA expression levels was significantly lower in gastric cancer biopsies than that in their matched adjacent tissues.Additionally，low expression of miR-200b was significantly associated with GC differentiation, the depth of serosal invasion and distant metastasis(P＜0.05).ConclusionmiR-200b is lowly expressed in gastric cancer.low expression of miR-200b is closely related to progression of GC.miR-200b may serve as a novel molecular marker for prediction of gastric cancer progression and metastasis.

gastric cancer；miR-200b；Expression；Biomarker

R735.2

A

1672-5018（2016）11-006-02